自然流產患者蛻膜組織中CXCR4的表達及意義

路妍妍，金海燕，田 耕

（廣州醫科大學附屬第二醫院婦產科，廣東 廣州 510260）

自然流產患者蛻膜組織中CXCR4的表達及意義

路妍妍，金海燕，田 耕

（廣州醫科大學附屬第二醫院婦產科，廣東 廣州 510260）

目的探討趨化因子受體4(CXCR4)在自然流產患者蛻膜組織中的表達情況及其臨床意義。方法收集人正常妊娠(對照組)和自然流產蛻膜組織(自然流產組)各20例，采用免疫組織化學法檢測CXCR4的表達。結果自然流產組CXCR4的表達顯著高于正常對照組，差異有顯著統計學意義(P＜0.01)。結論自然流產患者蛻膜組織CXCR4表達增高，可能通過募集NK細胞引起免疫排斥而導致流產。

自然流產；蛻膜；趨化因子受體4

自然流產(Spontaneous abortion，SA)是常見的妊娠并發癥，危害婦女的身心健康。人類的妊娠有賴于絨毛外細胞滋養細胞侵蝕子宮內膜將胚胎植入宮腔內，再侵入血管內皮從而使血管重建，滿足胎盤的血流供應。新近研究發現，趨化因子受體4(Chemokine receptor 4，CXCR4)參與血管重建過程，而血管重建障礙會導致病理妊娠[1]。目前未見自然流產的蛻膜中CXCR4的研究報道，本實驗通過免疫組化檢測蛻膜CXCR4的表達，探索自然流產發生機制，為今后自然流產的診治提供基礎性研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年6月至2011年6月在廣州醫科大學附屬第二醫院門診診斷自然流產的患者20例納入自然流產組，并選同期在我院進行正常人工流產的患者20例作為對照組。兩組患者年齡均在20～35歲，身體健康，月經規律(月經周期28～30 d)，通過婦檢排除陰道炎、宮頸糜爛和宮頸息肉等其他妊娠合并癥，3個月內未服用藥物，未放置宮內節育器。

1.2 取材 吸宮術后迅速取蛻膜組織1 cm×1 cm×1 cm，10%中性甲醛水溶液內固定24 h后脫水、包埋，制成蠟塊。

1.3 試劑與方法 鼠抗人CXCR4單克隆抗體購自Invitrogen試劑公司，免疫組織化學試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。采用免疫組織化學SP法測定CXCR4在組織中的表達情況，方法參照試劑盒說明書。常規將切片脫蠟至水，室溫下3%H2O2作用和正常羊血清工作液封閉各10 min；滴加鼠抗CXCR4單克隆抗體(1：50)，4℃孵育過夜；二抗工作液(生物素化羊抗小鼠IgG)室溫10 min；鏈酶素抗生物素—過氧化物酶溶液作用室溫10 min；二氨基聯苯胺顯色；脫水、透明、封片。用已知陽性組織切片作陽性對照，陰性對照以磷酸鹽緩沖液(PBS)取代CXCR4抗體。

1.4 結果判定 免疫陽性染色以細胞內呈現棕黃色顆粒為準。應用申洪等(2)提出的陽性單位(Positive unit，PU)概念定量表達免疫組化陽性反應程度，使用Leica QW550圖像分析系統，在10×20倍鏡下每個樣本隨機選擇10個陽性視場作為測試點，測定蛻膜基質細胞和背景區域的平均灰度，分別為的為Gα和GB，Gmax＝256，為檢測儀的最大灰度。按公式PU=[(Gα-GB)/Gmax]×100計算。

1.5 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件進行實驗數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

兩組蛻膜CXCR4的表達主要分布在蛻膜基質細胞的胞漿和胞核內(見圖1和圖2)。對照組CXCR4PU值為(2.30±0.55)，自然流產組為(5.37±0.87)，組間比較差異具有顯著統計學意義(t值=13.35，P=0.00＜0.01)。

圖1 SA組蛻膜CXCR4的表達(200×)

圖2 正常妊娠組蛻膜CXCR4的表達(200×)

3 討論

蛻膜淋巴細胞和基質、滋養細胞均表達多種趨化因子及受體。趨化因子是一組相對分子質量為8 000～12 000、至少存在2個保守的半胱氨酸的、含70～90個氨基酸的分泌型單鏈蛋白質，能夠趨化細胞定向移動，通過趨化因子受體介導其功能。CXCR4是一個高度保守的G蛋白偶聯受體，編碼352個氨基酸[3]。CXCLl2/CXCR4是一對獨特的趨化因子受體-配體，它們之間廣泛地表達于多種細胞和組織，包括免疫細胞、心臟、腦、肝等，在免疫、微循環及中樞神經系統的發育中起著非常重要的作用，還參與新生血管形成、造血生成、腫瘤侵襲轉移等過程[4]。

有研究顯示早孕蛻膜NK細胞表面除CXCR3和CXCR4高表達外，其他趨化因子受體都呈低表達，可能趨化NK細胞在局部聚集調節母胎界面免疫平衡[5-6]。我們的研究發現蛻膜基質細胞表達CXCR4，同Ren等[7]的研究一致。Ren等[7]發現CXCL12/ CXCR4信號通路參與調節人早孕期滋養細胞和蛻膜基質細胞的增殖與侵襲。侵蝕性滋養細胞可表達CXCR4且表達持續到取代蛻膜血管內皮細胞后。CXCR4通過調節VEGF參與血管重建過程，而血管重建障礙會導致病理妊娠。

自然流產的發生率約占全部妊娠的15%～20%，是產科常見病理性妊娠。自然流產病因復雜，目前仍約有40%原因不明。自然流產蛻膜中細胞因子表達增高。多種趨化因子在蛻膜中表達，起著趨化免疫活性細胞的作用。本實驗觀察到自然流產組CXCR4表達增高。蛻膜中最重要的免疫細胞是CD56+CD16-NK細胞。NK細胞在蛻膜中以表達CXCR4等趨化因子受體為主。蛻膜表達趨化因子CXCR4可能招募NK細胞到母胎界面調節免疫反應[8]。有研究顯示NK抑制滋養細胞的侵入遷移，在復發性流產患者中滋養細胞侵襲力和遷移力低下[9]。自然流產中CXCR4表達增高，可能募集NK細胞，調節母胎界面的免疫排斥反應，從而導致流產。

綜上所述，早孕蛻膜組織中表達CXCR4，調節滋養細胞侵蝕。自然流產中CXCR4表達增高，可能通過調控母一胎界面NK細胞的聚集，影響早孕期免疫微環境變化，抑制滋養細胞的侵入遷移，從而引起流產。

[1]Barrientos G,Tirado-González I,Freitag N,et al.CXCR4(+)dendritic cells promote angiogenesis during embryo implantation in mice[J].Angiogenesis,2013,16(2):417-427.

[2]申 洪.免疫組織化學染色定量方法研究[J].中國組織化學與細胞化學雜志,1995,4(1):89-92.

[3]De Clercq E.Potential clinical applications of the CXCR4 antagonist bieyclamAMD3100[J].Mini Rev Med Chem,2005,5(9):805-824.

[4]Nagamatsu T,Fujii T,Ishikawa T,et al.A primary cell culture system for human cytotrophoblasts of proximal cytotrophoblast cell columns enabling in vitro acquisition of the extra-villous phenotype [J].Placenta,2004,25(2-3):153-165.

[5]Hanna J,Wald O,Goldman-Wohl D,et al.CXCL12 expression by invasive trophoblasts induces the specific migration of CD16-human natural killer cells[J].Blood,2003,102(5):1569-1577.

[6]Red-Horse K,Drake PM,Gunn MD,et al.Chemokine ligand and receptor expression in the pregnant uterus:reciprocal patterns in complementary cell subsets suggest functional roles[J].Am J Pathol, 2001,159(6):2199-2213.

[7]Ren L,liu YQ,Zhou WH,et al.Trophoblast-derived chemokine CXCL12 promotes CXCR4 expression and invasion of human first-trimester decidual stromal cells[J].Hum Reprod,2012,27(2):366-374.

[8]Bai XX1,Kong BH,Zhang YZ,et al.Expression and significance of chemokine CXC receptor 3,4 and their ligands at the early pregnancy deciduaand villi[J].Zhonghua Fu Chan Ke Za Zhi,2008,43 (12):904-908.

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Expression and significance of CXCR4 in decidua of patients with spontaneous abortion.

LU Yan-yan,JIN Hai-yan,TIAN Geng.
Department of Gynecology and Obstetrics,the Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University,Guangzhou 510260,Guangdong,CHINA

Objective To investigate the expression of chemokine receptor 4(CXCR4)and its clinical significance in decidua of patients with spontaneous abortion.MethodsThe expression of CXCR4 protein in decidua tissue of 20 patients with spontaneous abortion(spontaneous abortion group)and 20 healthy pregnant women(control group)were detected by immunohistochemistry.ResultsThe expression of CXCR4 in spontaneous abortion group was significantly higher than that in the control group(P＜0.01).ConclusionThe increased expression of CXCR4 in decidua tissue of patients with spontaneous abortion may cause immune rejection by the recruitment of NK cells and lead to abortion.

Spontaneous abortion;Decidua;Chemokine receptor 4

R714.21

A

1003—6350（2015）13—1892—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.13.0682

2014-11-28)

廣州醫學院校基金資助項目(編號：2010C44)

路妍妍。E-mail：yanlup2006@163.com