移植早期卵裂胚胎對IVF-ET妊娠結局的影響研究

金良

移植早期卵裂胚胎對IVF-ET妊娠結局的影響研究

金良

早期卵裂胚胎；體外受精-胚胎移植；臨床妊娠率

高質量、具有發育潛能的受精卵是體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）治療周期成功的先決條件之一。如何選擇出這樣的受精卵是輔助生殖技術領域研究的重點。對胚胎早期卵裂情況進行觀察早在2001年即被認為是選擇卵裂第3天（D3）移植胚胎的有效方法。Fisch等[1]在 2003年提出了改進的胚胎評分標準（GES），首次將早期卵裂的觀察方法系統地應用于胚胎評分中，以此預測胚胎的發育潛力，在D3選擇出最優秀的胚胎進行移植，并得到了較好的結果。本文回顧性分析本中心2127個鮮胚周期移植的胚胎質量情況，分析移植早期卵裂胚胎對IVF-ET妊娠結局的影響，探討觀察胚胎早期卵裂情況是否能夠有效指導臨床，得到較高的妊娠率。

1 資料與方法

1.1 研究對象 本研究對象包括2012年8月—2014年1月期間在本中心進行體外受精-胚胎移植（IVF-ET）和胞漿內單精子注射（ICSI）共2127個周期鮮胚移植的不孕癥患者。異常受精的卵母細胞（多原核或單原核）和取卵失敗以及取消移植的周期，均未納入本研究。

1.2 方 法

1.2.1 超促排卵 采用本生殖中心常規超排卵方案，當主導卵泡直徑達18mm時，肌注人絨毛膜促性腺激素（hCG）5000～10 000U，36h后經陰道B超介導下取卵。

1.2.2 授精、早期卵裂觀察 取卵后培養3～5h（HCG注射39～41h）后根據指征進行常規體外授精（IVF）或胞漿內單精子注射（ICSI），授精后18～20h觀察受精情況，觀察到2PN為正常受精。將正常受精的卵子轉移至微滴單獨培養，于取卵后26～28h觀察記錄微滴內受精卵的早期卵裂現象。卵裂良好評估標準：兩個卵裂球大小均勻，相差＜20%，無碎片或碎片較少，無多核現象。直接分裂成≥3細胞的胚胎染色體異常可能大者，也應標記注明，避免移植。

1.2.3 胚胎選擇和移植移植后處理 取卵后第3天進行胚胎移植。于取卵后67～69h進行胚胎評級，根據臨床方案挑選相應個數胚胎進行移植。年齡＜35歲，最多移植2個胚胎，年齡≥35歲，或治療2個周期以上的，最多可移植3個胚胎。依照伊斯坦布爾共識進行胚胎評級，標準如下：I級胚胎：細胞數7～9個，大小均勻，碎片＜10%，無多核現象；II級胚胎：細胞數6～9個，大小基本均勻，碎片10%～25%，無多核現象；III級胚胎：細胞數＜6個或＞9個，碎片＞25%，或有多核現象；其中I級、II級胚胎定義為優質胚胎。同等質量胚胎中，優先選擇有早期卵裂的胚胎進行移植。移植后予黃體酮或HCG維持黃體水平。于移植后2周檢測血HCG，陽性者為成功種植，記錄胚胎種植率。移植后4～5周行B超檢查妊娠囊數和胎心搏動，以妊娠囊內見到胚芽和原始心管搏動判為臨床妊娠，僅有1個妊娠囊為單胎妊娠，有2個或以上妊娠囊為多胎妊娠。

1.3 統計學方法 使用SPSS13.0軟件進行統計分析，采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

共統計2127個鮮胚周期，4898個移植胚胎，其中早期卵裂組780周期，無早期卵裂組1347周期，兩組移植患者在平均年齡、不孕年數、平均取卵個數及移植胚胎個數上組間差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。相比無早期卵裂組，移植有早期卵裂胚胎獲得了較高的臨床妊娠率，差異有統計學意義（P＜0.01）；在種植率上早期卵裂組稍高于無早期卵裂組，但差異無統計學意義（P＞0.05）；早期卵裂組多胎率也高于無早期卵裂組，差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。兩組卵子受精率和優質胚胎率差異無統計學意義（P＞0.05）。

具體統計有早期卵裂組880例移植胚胎中早期卵裂胚胎個數發現，移植1個早期卵裂胚胎者臨床妊娠率顯著低于移植2個早期卵裂胚胎者（52.62% VS 61.04%）（P＜0.05），也低于與移植3個早期卵裂胚胎者的57.69%，但差異無統計學意義（P＞0.05）；移植早期卵裂胚胎數與妊娠結果及多胎數關系見表3。

表1 兩組基本情況比較（±s）

表1 兩組基本情況比較（±s）

組別早期卵裂組無早期卵裂組例數780 1347平均年齡（歲）32.43±3.41 32.78±3.33平均不孕時間（年）3.63±1.67 3.78±1.34平均取卵數（個）11.89±2.32 10.78±3.07平均移植胚胎數（個）2.03±0.24 2.11±0.32

表2 移植早期卵裂胚胎與胚胎發育及妊娠結局的比較（%）

表3 移植早期卵裂胚胎個數與妊娠結局關系［例（%）］

3 討論

輔助生殖技術發展的方向在于提高臨床妊娠率的同時降低多胎的發生，選擇移植具有發育潛能的胚胎是關鍵。胚胎發育是一個動態過程，受精卵的形態、胚胎形態、發育速度都是相對獨立又密切相關，雖然靜態評估某一階段的形態不能準確地預測胚胎進一步發育的潛能，但Van Montfoort等[2]發現，早期卵裂胚胎的囊胚形成率顯著高于非早期卵裂胚，并且選擇性早期卵裂單胚胎移植臨床妊娠率顯著高于非早期卵裂胚，認為早期卵裂是影響妊娠率和囊胚形成率的一個獨立因素，本研究的統計結果也證實了移植早期卵裂胚胎能夠獲得更高的臨床妊娠率、種植率和多胎率。此外，方叢等[3]觀察了移植早期卵裂胚胎對IVF-ET結局的影響，認為移植早期卵裂胚胎可以提高IVF-ET成功率，并隨著移植早期卵裂胚胎數量的增加，妊娠率、多胎妊娠率均有增高趨勢。本研究也得出了同樣的結論，植入有2～3個早期卵裂胚胎者較植入僅有1個早期卵裂胚胎者有更高的臨床妊娠率及多胎率，提示植入有早期卵裂胚胎作為篩選胚胎的一個參數，可以有效提高臨床妊娠率[4]，同時根據調整植入早期卵裂的優質胚胎數量可以為臨床降低多胎妊娠提供有效的參考[5]，以期達到單胚胎移植的目的。

總之，胚胎早期卵裂的觀察可以有效預見胚胎的發育潛力，同時排除一些首次分裂＞2個細胞的異常胚胎，當然在挑選植入胚胎時有無早期卵裂不能作為單獨標準，還應結合D3胚胎細胞數目及碎片比例等綜合因素[6]。本研究中早期卵裂組種植率雖然稍高于無早期卵裂組，但無顯著差異，證實決定臨床種植率最具實際意義的指標仍然是優質胚胎。因此，作為輔助標準，在同等質量胚胎中優先挑選有早期卵裂的胚胎進行移植，對提高臨床植入率有重要意義，加之觀察早期卵裂方法快速、簡便，不受觀察者主觀影響，非侵入性[7]，易于實施，作為輔助生殖技術實驗室常規步驟，在IVF-ET治療中有較好應用價值。

［1］Fisch JD，Sher G，Adamoviczm，et al.The graduated embryo Score predicts the outcome of assisted reproductive technologies better than a single day 3 evaluation and achieves results associated with blastocyst transfer from day 3 embryo transfer［J］.Fertil Steril，2003，80：1352-1358.

［2］ Van Montfoort AP，Dumoulin JC，Kester AD，et al.Early cleavage is a valuable addition to existing embryo selection parameters：a study using single embryo transfers［J］.Hum Reprod，2004，19（9）：2103-2108.

［3］方叢，莊廣倫，鐘依平，等.移植人類早期卵裂胚胎對1VFET結局的影響［J］.中山大學學報（醫學科學版），2004，25（3）：99-100.

［4］刁英，楊智敏，譚兵兵.觀察早期卵裂和原核消失在體外受精-胚胎移植周期中的應用價值［J］.中國計劃生育學雜志，2008，10（156）：618-620.

［5］賀平，劉海鵬，彭妹明，等.移植早期卵裂胚胎對促性腺激素釋放激素拮抗劑方案結局影響分析［J］.生殖醫學雜志2014，23（1）：20-23.

［6］譚兵兵，楊智敏，刁英.早期卵裂與胚胎形態學和生長速率聯合評分預測胚胎發育潛能［J］.中國婦幼保健，2007，22：2670-2672.

［7］王嫻靜.早期原核分裂對于胚胎發育潛能預測的研究［J］.同濟大學學報（醫學版），2013，34（1）：77-80.

（收稿：2014-12-19 修回：2015-02-15）

浙江大學醫學院附屬婦產科醫院生殖中心（杭州 310000）

金良，Tel：13868027272