心可舒膠囊溶出度的研究

陳勇，王愛民

(1.貴州省黔東南州食品藥品檢驗所，貴州 黔東南 556003；2.貴陽醫(yī)學院，貴州 貴陽 550001)

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心可舒膠囊溶出度的研究

陳勇1，王愛民2

(1.貴州省黔東南州食品藥品檢驗所，貴州 黔東南 556003；2.貴陽醫(yī)學院，貴州 貴陽 550001)

目的 建立心可舒膠囊溶出度實驗方法，考察心可舒膠囊中丹參素鈉、 原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素的溶出行為。方法 采用《中國藥典》2010年版二部溶出度測定第一法，參照日本《醫(yī)療用藥品品質(zhì)情報集》中的溶出度試驗條件，分別考察了心可舒膠囊在pH 1.2的人工胃液、pH 4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液及水中的溶出行為，采用HPLC法梯度洗脫測定心可舒膠囊中丹參素鈉、 原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素的溶出度。結(jié)果 心可舒膠囊中各廠家樣品中的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素溶出情況良好，45 min時的溶出度均在80%左右，且溶出均一性好。結(jié)論 該方法簡便、準確, 重復性好, 可用于該膠囊的溶出度測定。

心可舒膠囊；溶出行為；HPLC；梯度洗脫

心可舒膠囊由山楂、丹參、葛根、三七、木香5味中藥組成[1]，臨床上用于冠心病引起的諸多病癥及高血脂、高血壓的治療，是一種安全、無毒副作用，且療效確切的純中藥制劑，現(xiàn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第15冊。

“心可舒膠囊”現(xiàn)行質(zhì)量標準對于該制劑只限于檢測崩解時限, 崩解時限僅能反映藥物是否崩解完全, 卻不能反映出藥物的生物利用度，而溶出度檢測是評價常規(guī)口服固體制劑生物利用度的重要指標之一[2]。本文參考日本“藥品品質(zhì)再評價”工程在溶出度研究中所擬定的人體消化道內(nèi)體液的4種基本溶出介質(zhì)及相關(guān)文獻[3～7]，構(gòu)建了適宜的溶出條件, 采用高效液相色譜法梯度洗脫程序測定了心可舒膠囊中的4種有效成分[4]丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素的溶出度,結(jié)果證明，該方法簡便、準確, 重復性好, 可用于心可舒膠囊的溶出度測定。

1 材料與方法

1.1 儀器 LC-20A高效液相色譜儀，配備四元泵、DAD檢測器、威瑪龍色譜工作站(日本島津公司)；Luna C18柱(4.6×250 mm，5 μm)；RCZ-5A智能藥物溶出儀(天津大學儀器廠)；AB135S型電子天平(梅特勒-托利多)。

1.2 藥品與試劑 丹參素鈉(批號：110855-201210，含量：98%)、原兒茶醛(批號：110810-201007，含量：98%)、丹酚酸B(批號：111562-201009，含量：98%)、葛根素(批號：110752-200912，含量：98%)均購自中國食品藥品檢定研究院；心可舒膠囊由全國4個生產(chǎn)企業(yè)提供(重慶希爾安藥業(yè)有限公司，批號：141103;山西德元堂藥業(yè)有限公司，批號：140506;四川龍人藥業(yè)有限公司，批號：140708;西安天一秦昆制藥有限責任公司，批號：140907)，規(guī)格均為0.3g/粒。乙腈、三氟乙酸均為色譜純；水為超純水。

1.3 方法

1.3.1 溶出介質(zhì)的配制[7]：純凈水；pH1.2的人工胃液：取氯化鈉2.0 g，加適量水溶解后，加7 mL鹽酸，再加水稀釋至1000 mL，混勻，即得；pH4.0醋酸鹽緩沖液：將0.05 mol/L醋酸溶液與0.05 mol/L醋酸鈉溶液按16.4︰3.6(V/V)的比例混合，即得；pH 6.8磷酸鹽緩沖液：取磷酸二氫鉀1.7 g和無水磷酸氫二鈉1.775 g，加水溶解并定容至1000 mL，即得。

1.3.2 溶出介質(zhì)的選擇：取心可舒膠囊樣品(重慶希爾安藥業(yè)有限公司 批號：141103), 通過比較4種待測成分在 1000 mL水、pH1.2的人工胃液、pH4.0醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線。

1.3.3 溶出方法和時間的選擇：2010年版《中國藥典》(二部)溶出度檢測方法有3種：轉(zhuǎn)籃法、漿法、小杯漿法，心可舒膠囊樣品的規(guī)格為每粒0.3 g, 淘汰對小杯法的試驗研究, 在轉(zhuǎn)籃法與漿法中進行研究和篩選。采用轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)速分別為50、75、 100 r/min；在“1.3.2”項下確定的溶出介質(zhì)中，考察4種待測成分的溶出量。同時采用漿法，在溶出介質(zhì)與時間不變的條件下，考察4種待測成分的溶出量。

1.4 溶出度測定方法的建立[4]

1.4.1 色譜條件：色譜柱：Thermo C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動相：以乙腈為流動相A ，0.1%三氟乙酸為流動相B，梯度洗脫條件為0～20 min，5%A; 20～30 min，5%～9%A；30～60 min，9%A；60～80 min，9%～22%A；80～120 min，22%A；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：287 nm；進樣量20 μL。

1.4.2 混合對照品溶液的配制：分別精密稱取丹參素鈉、 原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素對照品適量，加70%甲醇溶液制成每1 mL含丹參素鈉0.25 mg、 原兒茶醛0.1 mg、丹酚酸B 0.5 mg和葛根素0.75 mg的混合溶液，即得。

1.4.3 供試品溶液的制備：取心可舒膠囊樣品，按《中國藥典》2010年版二部附錄XC溶出度測定法第一法，以pH 6.8磷酸鹽緩沖液1000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，于45 min時取樣5 mL，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

1.4.4 陰性樣品溶液的制備：按心可舒膠囊處方比例與制備工藝，制備缺丹參、 葛根的陰性樣品，加溶出介質(zhì)1000 mL，在37 ℃水浴中超聲(200 w，45 kHz)15 min，放至室溫，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得。

1.4.5 線性關(guān)系考察：精密吸取1.4.2項下丹參素鈉、 原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素混合對照品溶液1、8、10、12、20 mL置100 mL 棕色量瓶中，分別加溶出介質(zhì)定容，搖勻，即得不同濃度的標準品溶液。取上述標準品溶液，按1.4.1項下的色譜條件分別進樣20 μL。以峰面積(y)為縱坐標，樣品濃度(x，mg/L)為橫坐標，進行回歸分析，得出各組分的回歸方程。

1.4.6 精密度試驗：量取用溶出介質(zhì)稀釋制成的25 μg/mL的丹參素鈉、10 μg/mL的原兒茶醛、50 μg/mL的丹酚酸B和75 μg/mL的葛根素對照品溶液，分別連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，計算各組峰面積的RSD。

1.4.7 穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0、4、8、10、15、24 h進樣20 μL，記錄色譜峰面積，計算各組峰面積的RSD。

1.4.8 重復性試驗：取心可舒膠囊(山西德元堂藥業(yè)有限公司 批號：140506)，按照1.4.3項下方法制備6份供試品溶液，并按1.4.1項下色譜條件分別進樣分析，計算各組峰面積的RSD。

1.4.9 加樣回收率試驗：精密稱取已知含量的本品內(nèi)容物3組，每組2份，3組分別精密加入一定量的丹參素鈉、 原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素對照品，按供試品溶液的制備方法制備并測定, 計算加樣回收率。

1.5 溶出曲線的均一性 取心可舒膠囊樣品(西安天一秦昆制藥有限責任公司，批號：140907)6粒, 按溶出度測定法進行試驗, 考察溶出均一性。計算丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出度。

1.6 溶出度試驗 取4批心可舒膠囊樣品進行溶出度試驗(重慶希爾安藥業(yè)有限公司，批號：141103；山西德元堂藥業(yè)有限公司，批號：140506；四川龍人藥業(yè)有限公司，批號：140708；西安天一秦昆制藥有限責任公司，批號：140907)，按《中國藥典》2010年版二部溶出度測定法第一法[8]，以pH 6.8磷酸鹽緩沖液1000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r/min，依法操作，于45 min時取樣5 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液按“1.4.1”項下色譜條件測定心可舒膠囊的溶出度。

2 結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)的選擇 心可舒膠囊在 4 種溶出介質(zhì)中均具有良好的溶出度；4種待測成分在45 min時溶出量均能達到80%左右 , 但在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出速率最快, 且溶出均一性相對較好, 因此選擇 pH 6.8磷酸鹽緩沖液1000 mL為溶出介質(zhì)。

2.2 溶出方法和取樣時間的選擇 以 pH 6.8磷酸鹽緩沖液1000 mL 為溶出介質(zhì)時，45 min時4種待測成分的溶出量均在80%左右，其中以轉(zhuǎn)速100 r/min時的溶出量最多；采用漿法，溶出介質(zhì)與時間不變，4種待測成分溶出量均未達到80%，且溶出度均一性不好。以測量數(shù)據(jù)為依據(jù)，選擇轉(zhuǎn)籃法和轉(zhuǎn)速為100 r/min。

由2.2可知，心可舒膠囊中的4種待測成分45 min時，在 pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出度均在80%左右，因此，取樣時間選擇45 min。

綜合上述實驗結(jié)果，確定心可舒膠囊最終的溶出試驗條件為：溶出方法選擇轉(zhuǎn)籃法，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溶出介質(zhì)為pH 6.8磷酸鹽緩沖液1000 mL；取樣時間為45 min。

2.3 溶出度測定方法的建立[4]在此色譜條件下測定對照品(見圖1A)、 心可舒膠囊樣品(見圖1B)及陰性樣品(見圖1C)，心可舒膠囊中的4種有效成分丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素均實現(xiàn)了基線分離，峰型良好，且與其他成分分離度良好；陰性樣本對心可舒膠囊溶出度的測定無干擾。

圖1 心可舒膠囊的HPLC圖譜A.對照品；B.供試品；C.陰性對照1.丹參素鈉；2.原兒茶醛；3.葛根素；4.丹酚酸BFig.1 Chromatogram of HPLCA.Reference substances;B.Sample;C.Negative sample1.Danshensu sodium;2.Protocatechuic aldehyde;3.Puerarin ;4.Salvianolic acid B

2.3.1 線性關(guān)系考察 丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素混合對照品的標準回歸方程，見表1。

表1 標準曲線結(jié)果Tab.1 Results of standard curve

2.3.2 精密度試驗 丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素峰面積的RSD分別為0.7 %、0.4 % 、0.8 % 和1.1 %, 表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 丹參素鈉、 原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素峰面積的RSD分別為1.2 %、1.7 %、 1.3 %和1.5 %(n=6)，表明丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素在溶出介質(zhì)中24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.4 重復性試驗 丹參素鈉、 原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素的RSD分別為2.71%、1.98%、2.07%和1.56%，表明該方法重復性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素的加樣回收率，見表3～6。

表3 丹參素鈉加樣回收率(n=6)Tab.3 Result of recovery test of Danshensu sodium(n=6)

表4 原兒茶醛加樣回收率(n=6)Tab.4 Result of recovery test of protocatechuic aldehyde(n=6)

表5 丹酚酸B加樣回收率(n=6)Tab.5 Result of recovery test of salvianolic acid B(n=6)

表6 葛根素加樣回收率(n=6)Tab.6 Result of recovery test of puerarin(n=6)

2.4 溶出曲線的均一性 6粒心可舒膠囊樣本中的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出度的RSD均小于2%，表明心可舒膠囊樣品溶出度的均一性良好，見圖2。

圖2 心可舒膠囊中4種主成分的溶出曲線A.丹參素鈉；B.原兒茶醛；C.丹酚酸B；D.葛根素Fig.2 The dissolution curves of four principal components in Xinkeshu capsuleA.Danshensu sodium;B.Protocatechuic aldehyde ;C.Salvianolic acid B;D.Puerarin

2.5 溶出度試驗 4批心可舒膠囊樣品的溶出度結(jié)果見圖1B。心可舒膠囊樣品在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出度結(jié)果見表7。

表7 心可舒膠囊溶出度測定結(jié)果(n=3)Tab.7 Results of dissolution determination(n=3)

3 討論

3.1 有效成分的溶出情況 有效成分的溶出對固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的重要性已毋庸置疑[9]，心可舒膠囊為中成藥制劑，本試驗對其中的4種主要有效成分進行了溶出度考察，實驗結(jié)果表明，各廠家心可舒膠囊中的丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B和葛根素溶出情況良好，45min時的溶出度均在80%左右，且溶出均一性好，表明該制劑處方工藝較穩(wěn)定。

3.2 溶出介質(zhì)的選擇 本實驗首先分別考察了心可舒膠囊在pH1.2的人工胃液、pH4.0醋酸鹽緩沖液、pH6.8磷酸鹽緩沖液及水中的溶出行為，實驗結(jié)果表明心可舒膠囊在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出速率最快, 且溶出均一性相對較好。同時考慮到該制劑在30 min內(nèi)基本釋放完全，進入緩慢釋放的平臺期，考慮到藥物在服用30 min后的生理環(huán)境，本研究建議選擇pH 6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)。

[1] 國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十五冊[M]：北京，1997：41-41.

[2] 李麗，周振旗.影響藥物制劑溶出度實驗的因素[J].西北藥學雜志，2010，25(6)：479-480.

[3] 謝沐風.溶出曲線相似性的評價方法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40(4)：308-310.

[4] 趙振霞， 劉永利，王敏，等.HPLC、UPLC法同時測定心可舒膠囊中四種成分的含量[J].中國藥科大學學報，2014，45(5)：563-566.

[5] 李瑞芳，程秀民.自制恩替卡韋片與上市對照制劑體外溶出度對比研究[J].藥物分析雜志，2011，31(7)：1333-1336.

[6] 劉敏，李玉蘭，王鐵杰，等.HPLC法測定氟哌啶醇片中主藥的含量[J].中國藥房，2009，20(4)：298-299.

[7] 張曉偉，李小莉，周園，等.自制與原研頭孢呋辛酯片在4 種介質(zhì)中的體外溶出度比較分析[J].中國藥房，2015， 26(4)：544-546.

[8] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010 年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄85-87.

[9] 謝沐風.改善溶出度評價方法，提高固體藥物制劑水平[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2005，36(7)：447-451.

(編校：王冬梅)

Study on dissolution test of Xinkeshu capsule

CHEN Yong1, WANG Ai-min2

(1.Guizhou Qiandongnan Institute for Food and Drug Control, Qiandongnan 556003, China; 2.Guiyang Medical University, Guiyang 550001, China)

ObjectiveTo establish a method of the dissolution test of Xinkeshu capsule and study the dissolution behavior of sodium Danshensu,protocatechuic aldehyde,salvianolic acid B and puerarin in Xinkeshu capsule.MethodsUsing the dissolution determination first law of Chinese Pharmacopoeia 2010 II edition,according to the dissolution test conditions in Japan′s“quality of medical drugs information set”,different Xinkeshu capsule were inspected in pH 1.2 solution,pH 4.0 acetate buffer, pH 6.8 phosphate buffer and water.The HPLC gradient elution method was adopted to determine the dissolution of sodium Danshensu,protocatechuic aldehyde,salvianolic acid B and puerarin in Xinkeshu capsule.ResultsDissolution of sodium Danshensu,protocatechuic aldehyde,puerarin and salvianolic acid B of Xinkeshu capsule sample from each manufacturer were in good condition, 45min dissolution were 80% and dissolution uniformity.ConclusionThe method is simple, accurate and reproducible for the dissolution determination of this capsule.

Xinkeshu capsule; dissolution behavior; HPLC; gradient elution

陳勇，男，本科，副主任藥師，研究方向：食品藥品檢驗與研究，E-mail: 2693444525@qq.com。

R969.3

B

1005-1678(2015)07-0148-04