柴芩軟膠囊中正己醛的含量測定

楊冬麗* 張東閣 王春民 王 成

（頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北省中藥新輔料工程技術(shù)研究中心，河北 承德 067000）

柴芩軟膠囊中正己醛的含量測定

楊冬麗* 張東閣 王春民 王 成

（頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北省中藥新輔料工程技術(shù)研究中心，河北 承德 067000）

目的 建立柴芩軟膠囊中正己醛GC含量測定法。方法 采用GC法，DB-225（15 m×0.25 mm）石英毛細(xì)管柱，F(xiàn)ID檢測器，程序升溫系統(tǒng)進(jìn)行檢測。結(jié)果 正己醛的線性范圍是38.88～388.8 μg/mL（r=0.9998）。回收率為97.2%。結(jié)論 該方法簡便快速，樣品使用量少，可用于柴芩軟膠囊中正己醛的含量測定。

柴芩軟膠囊；正己醛；氣相色譜

柴芩軟膠囊處方中含有柴胡、黃芩、山豆根、葛根、升麻、薄荷油。具有疏肌解表，清透表里的作用，主要用于感冒風(fēng)熱證。柴胡揮發(fā)油為其有效成分之一，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未對其進(jìn)行檢測。柴胡揮發(fā)油具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、保肝等作用，研究表明含有揮發(fā)油的柴胡浸膏較不含揮發(fā)油的柴胡浸膏具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱作用［1］。且南、北柴胡揮發(fā)油對不同致熱源致熱的家兔均有一定的解熱作用［2］。柴胡揮發(fā)油可能作用于下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，從而抑制體溫調(diào)定點的上移［3］。其揮發(fā)油中低分子醛酮部分為抗炎的有效成分［4］，回歸分析和相關(guān)分析結(jié)果表明正己醛、正庚醛、（E）2-庚烯醛、2-戊基呋喃等與柴胡揮發(fā)油的藥理作用密切相關(guān)，各種物質(zhì)共同構(gòu)成柴胡揮發(fā)油藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)［5］。因此，本研究以正己醛為指標(biāo)，建立柴芩軟膠囊中柴胡揮發(fā)性成分進(jìn)行含量測定方法，進(jìn)一步完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1　儀器與試藥

Agilent 7890A氣相色譜儀，Agilent G4513A自動進(jìn)樣器，J&W DB-225 15 m×0.25 mm石英毛細(xì)管柱，正己醛對照品（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，色標(biāo)級含量≥99%），正己烷（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純）。柴芩軟膠囊（頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號398002、398005、398006）。

圖1　柴芩軟膠囊GC圖譜 A.正己醛；B.柴芩軟膠囊樣品；C.陰性

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：DB-225（15 m×0.25 mm）石英毛細(xì)管柱，F(xiàn)ID檢測器，檢測器溫度250 ℃，脈沖分流，分流比10∶1，程序升溫，初始溫度45 ℃，以0.5 ℃/min升溫至48 ℃，然后以6.5 ℃/min升溫至70 ℃，保持3 min；再以25 ℃/min升溫至210 ℃，保持5 min。載氣氮氣，進(jìn)樣量1 μL。

2.2對照品溶液的制備：取正己醛適量，精密稱定，用正己烷配制成濃度為0.15 mg/mL的溶液。

2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取正己醛對照品適量，用正己烷配成濃度為1.9 mg/mL的溶液，分別精密吸取正己醛對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1 mL置5 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件進(jìn)樣檢測。以正己醛對照品的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)（mg/mL），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為：Y=899.66X-5.689，r=0.9998；線性范圍是38.88～388.8 μg/mL。

2.4提取溶劑的選擇：取柴芩軟膠囊54粒（批號398002），置500 mL圓底燒瓶中，加入水250 mL，于揮發(fā)油提取器中分別加入乙酸乙酯、石油醚、正己烷各1 mL，回流提取2 h。分別將乙酸乙酯、石油醚、正己烷層置于2 mL容量瓶中，用相應(yīng)的溶劑定容，作為供試品溶液。將供試品溶液用上述GC法進(jìn)行測定，外標(biāo)法計算正己醛含量，結(jié)果見表1，結(jié)果表明用正己烷為提取溶劑時，樣品中正己醛含量較高，因此，確定提取溶劑為正己烷。

表1　不同提取溶劑的測定結(jié)果

2.5提取時間的選擇：取柴芩軟膠囊54粒（批號398002），置500 mL圓底燒瓶中，加入水250 mL，于揮發(fā)油提取器中加入正己烷1 mL，共三份，分別回流提取2、3、4 h。將正己烷層置于2 mL容量瓶中，用正己烷定容，作為供試品溶液。將供試品溶液用上述GC法進(jìn)行測定，外標(biāo)法計算正己醛含量，結(jié)果見表2，結(jié)果表明用正己烷為提取溶劑時，提取3 h樣品中正己醛含量較高，因此，確定提取時間為3 h。

表2　不同提取時間的測定結(jié)果

通過上述試驗研究結(jié)果，最終確定供試品溶液的制備方法為：取柴芩軟膠囊54粒，置500 mL圓底燒瓶中，加入水250 mL，于揮發(fā)油提取器中加入正己烷1 mL，水蒸氣蒸餾法提取3 h。將正己烷層置于2 mL容量瓶中，用正己烷定容，作為供試品溶液。將供試品溶液用上述GC法進(jìn)行測定，外標(biāo)法計算正己醛含量。

2.8陰性對照液的制備：按柴芩軟膠囊處方比例取除柴胡外的其他藥材，按柴芩軟膠囊的制備方法制備模擬陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制備，即得。結(jié)果表明陰性無干擾。色譜圖見圖1。

2.9儀器精密度：取正己醛對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，計算RSD為：0.69%（n=6），精密度符合要求。

2.10重復(fù)性試驗：取同一批次的柴芩軟膠囊（批號398002），按供試品溶液的制備方法，重復(fù)處理6份，測定，計算含量，RSD為0.68%（n=6），重復(fù)性良好。

2.11穩(wěn)定性試驗：取同一批次的柴芩軟膠囊，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8 h測定峰面積，計算峰面積的RSD為0.91%。試驗結(jié)果表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.12回收率試驗：取已知含量的柴芩軟膠囊（批號398002）27粒，精密加入濃度為0.1555 mg/mL正己醛對照品溶液1 mL，按供試品溶液的制備方法制備，在上述色譜條件下，進(jìn)樣測定，計算平均回收率為97.2%（n=5），RSD為1.09%。

2.13樣品測定：取3批柴芩軟膠囊（批號398002、398005、398006），按供試品溶液制備方法項下操作，按上述色譜條件進(jìn)行測定，色譜圖見圖1，結(jié)果見表3。

表3　柴芩軟膠囊含量測定結(jié)果（n=3）

3批含量測定結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠，方法學(xué)研究符合要求，可用于柴芩軟膠囊中正己醛的含量測定，并為進(jìn)一步控制柴芩軟膠囊質(zhì)量，完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

3　討 論

試驗過程中通過對比柴胡揮發(fā)油和柴芩軟膠囊揮發(fā)油的GC色譜圖，最終將共有成分正己醛確定為柴芩軟膠囊的指標(biāo)成分。正己醛為柴胡揮發(fā)油的有效成分之一，在色譜圖中該峰與其他峰分離較好，陰性無干擾。

在進(jìn)行供試品溶液的制備時，發(fā)現(xiàn)采用柴芩軟膠囊內(nèi)容物進(jìn)行供試品溶液的制備與直接用柴芩軟膠囊進(jìn)行供試品溶液的制備所得含量測定結(jié)果一致，故在供試品溶液的制備中采用柴芩軟膠囊直接進(jìn)行供試品溶液的制備，避免將內(nèi)容物擠出時有效成分的損失。

正己醛為柴胡揮發(fā)油中的主要有效成分，對于發(fā)揮柴芩軟膠囊治療感冒的療效起著重要作用。通過檢測發(fā)現(xiàn)柴芩軟膠囊中正己醛含量差異較大，因此有必要建立該制劑中正己醛的含量測定方法，從而更加有效的保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性。

［1］周王誼，李欣欣，莫紅梅，等.兩種不同揮發(fā)油含量柴胡制劑藥效作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2012，28（1）：104-106.

［2］李秀琴，賈英，陳曉輝，等.南北柴胡揮發(fā)油解熱作用研究［J］.中草藥，2005，36（增刊）：162-164.

［3］孫秀萍，張寧.柴胡解熱的物質(zhì)基礎(chǔ)、機(jī)制及影響因素探討［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，33（4）：345-346.

［4］湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究所.北柴胡揮發(fā)油解熱抗炎化學(xué)成分的研究［J］.藥學(xué)通報，1982，17（4）：10-13.

［5］李秀琴.柴胡質(zhì)量評價方法與其相關(guān)成分的藥動學(xué)研究［D］.沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2006.

R282.710.3

B

1671-8194（2015）27-0046-02

河北省自主創(chuàng)新重大成果轉(zhuǎn)化項目（11276409Z）