阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征對睡眠結構與免疫功能的影響

曹 娟　薛 佳　鄭 聞

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征對睡眠結構與免疫功能的影響

曹 娟薛 佳★鄭 聞

目的 探討阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）對機體免疫功能﹑睡眠結構﹑炎癥反應的影響及其相關性。方法 選取160例受試者，根據睡眠呼吸暫停指數將受試者分為輕（38例）﹑中（38例）﹑重度（44例）OSAHS組及對照組（40例），比較受試者的年齡﹑睡眠結構及睡眠中末梢血氧，將受試者的外周血采用流式細胞儀進行淋巴細胞免疫表型分析和C反應蛋白（CRP）檢測。結果 OSAHS組最低血氧﹑平均血氧均較對照組明顯下降（P＜0.01）。中重度OSAHS組快動眼睡眠期百分比（REM%）及4期睡眠百分比較對照組及輕度OSAHS組下降（P＜0.05），中﹑重度OSAHS組Ⅰ期和Ⅱ期睡眠比例及睡眠呼吸事件比對照組及輕度OSAHS組增加（P＜0.05）。OSAHS組患者外周血CD3+﹑CD4+/CD3+淋巴細胞及CD4+/CD8+比值均比對照組下降（P＜0.05）；OSAHS組CD8+/CD3+淋巴細胞較對照組升高（P＜0.05）；OSAHS組CD16+56+比對照組升高（P＜0.05）；CD19+與對照組差異無統計學意義（P＞0.05）；重度OSAHS組外周血CRP比對照組和輕度OSAHS組升高（P＜0.05）。結論 OSAHS導致患者睡眠結構紊亂，同時伴隨機體免疫功能下降及炎癥反應增強，上述改變與OSAHS嚴重程度有關。

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征 睡眠結構 免疫功能

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（OSAHS）是常見的一種睡眠呼吸障礙性疾病，其對睡眠結構影響導致白天嗜睡，疲勞，記憶力減退，夜間打鼾，憋醒等一系列臨床表現。國內外流行病學調查顯示其發病率男性4%、女性2%。OSAHS累及全身多個系統，研究顯示［1，2］OSAHS對免疫系統有明顯影響，尤其對T細胞影響最為明顯。有研究［3，4］證實T細胞參與炎癥反應的調節，導致OSAHS對心血管系統的損害。本文探討OSAHS對患者睡眠結構、免疫功能及C反應蛋白的影響，及其相互間的關系。

1　臨床資料

1.1一般資料 2011年3月至2015年3月本院老年科OSAHS患者120例，其中男88例，女32例；年齡43～81歲，平均年齡（52.96±10.21）歲。另選取40例體檢者為對照組，其中男22例，女18例；年齡39～65歲，平均年齡（49.18±7.72）歲。排除慢性支氣管炎、支氣管擴張、肺部腫瘤及肺結核等慢性呼吸道疾病；有嚴重心、肝、腎功能不全者；繼發于甲狀腺功能低下、垂體功能減退、聲帶麻痹、帕金森病等的OSAHS；正在服用鎮靜催眠藥物者和過量飲酒者。本項目經本院醫學倫理委員會批準，簽署知情同意書。

1.2方法 （1）多導睡眠監測：以計算機Polysomnogram（PSG）系統，按國際標準法進行監測，監測時間為晚上9點至次日晨6點，根據監測結果由計算機自動分析、統計，最后結果人工校正，計算呼吸暫停低通氣指數（AHI）、最低脈搏容積血氧飽和度（SpO2）、平均SpO2、快眼動睡眠期占總睡眠時間百分比（REM%）、非快眼動睡眠期占總睡眠時間百分比（NREM%）、以及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期睡眠百分比、覺醒次數、睡眠呼吸事件次數。所有受檢者監測當日禁用對睡眠有影響的食物及藥物，檢查結果根據2011年中華醫學會呼吸分會修訂指南標準為診斷標準。（2）外周血淋巴細胞表型檢測：采用美國BD Biosciences公司生產的BD-FAScalibur型流式細胞儀。抽肘靜脈血2ml，EDTA抗凝，分別向2管流式細胞管加入測定抗體20μl，再各自加入100μl全血，輕搖混勻，室溫避光放置15min，加入FACSLysing溶血液2.0ml，混勻，置室溫，避光孵育10min，1500r/min離心5min，棄上清液，PBS洗滌細胞2次，1500r/min離心5min，棄上清液，1%多聚甲醛0.5ml。流式細胞儀采用前向角散射光（FSC）與側向角散射光（SSC）雙參數設門，CD45SSC熒光與FSC設門兩種方法作圖對白細胞進行分群，選擇淋巴細胞亞群，分析標記CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD16+56+的熒光強度，分別記錄各自表達的百分率。（3） 血清CRP的檢測方法：采用美國庫爾特貝克曼公司生產的Array360檢測儀器，抽取清晨空腹靜脈血2～4ml靜置30min，離心后分離血清。CRP檢查采用比濁法（正常范圍：CRP＜8mg/L）。（4）依據PSG檢查AHI結果分為OSAHS組120例（AHI≥5）和對照組40例（AHI＜5）。OSAHS組又分為輕度OSAHS組（5≤AHI＜15）38例、中度OSAHS組（15≤AHI＜30）38例和重度OSAHS組（AHI≥30）44例。

1.3統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以（x±s）表示，用t檢驗比較兩組間參數差別，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.14組一般情況比較 見表1。

表1　4組受試者年齡、AHI及血氧指標比較（x±s）

表2　4組受試者睡眠結構比較（x±s）

表3　4組受試對象淋巴細胞免疫分析及C反應蛋白結果比較（x±s）

2.24組受試者睡眠結構比較 見表2。

2.3淋巴細胞免疫表型結果及CRP結果 見表3。

3　討論

睡眠呼吸暫停綜合征（OSAHS）是睡眠障礙中對全身多系統影響最大的疾病，其反復氣道阻塞，睡眠結構紊亂，導致呼吸暫停、低通氣，引起低氧血癥、高碳酸血癥等病理生理改變。睡眠結構周期分兩個時相：非快速眼動睡眠期（NREM）和快速眼動睡眠期（REM）。在成人每晝夜總睡眠時間中REM睡眠時間占20%～25%，NREM睡眠時間占75%～80%，其中Ⅰ期占2%～5%，Ⅱ期占45%～50%，Ⅲ期占3%～8%，Ⅳ期占10%～15%，Ⅰ、Ⅱ期為淺睡眠，Ⅲ、Ⅳ期為深睡眠。睡眠對神經內分泌調節系統起著非常重要的作用，通過神經內分泌的調節睡眠對免疫系統有重要影響［2］，OSAHS的睡眠中斷影響神經內分泌，從而對機體的免疫功能造成影響。本資料結果顯示OSAHS患者的免疫功能指標均較對照組發生改變，與國外相關文獻報道一致［1，2，4］。OSAHS對機體的睡眠結構有顯著影響，REM睡眠及Ⅳ期睡眠明顯減少，Ⅰ、Ⅱ期睡眠相應增加，且中重度OSAHS組較對照組及輕度OSAHS組差異明顯；OSAHS組REM睡眠期呼吸事件發生次數及NREM睡眠期呼吸事件發生次數較對照組明顯增加，隨著OSAHS嚴重程度的增加，呼吸事件發生次數逐漸增加，提示隨著OSAHS嚴重程度的增加對睡眠的影響逐漸加重，可見中重度OSAHS對睡眠結構的影響顯著。有研究［5］認為中度OSAHS患者NREM期的呼吸事件明顯增加，隨著OSAHS加重，REM睡眠周期明顯減少，這與本資料結果相一致。

睡眠呼吸暫停綜合征的主要特點是呼吸紊亂及低氧血癥，本資料顯示輕、中、重度OSAHS組平均血氧及最低血氧均較對照組明顯下降（P＜0.01），隨著AHI的增加，組織缺氧程度逐漸增加，與AHI呈現正相關性，這是OSAHS導致全身多個系統受累的病理生理基礎，組織缺氧可導致氧化應激，誘發炎癥反應。間斷性缺氧可以通過激活轉錄因子NF-κB（Nuclear factor -κB） 誘導機體產生細胞因子（CRP、TNF-α、IL-6等）、粘附分子（ICAM-1、VCAM-1）等促進炎癥反應發生發展，影響動脈粥樣硬化的形成［6］，導致血管內皮功能障礙。本資料結果顯示OSAHS患者的炎癥反應指標CRP均較對照組升高，與國外相關文獻報道一致［4，6］。

外周血淋巴細胞亞群的變化是了解機體細胞免疫狀態的一種較為準確的方法。CD4+/CD3+細胞和CD4+/ CD8+T細胞比值的增高表示細胞免疫功能增強，而CD8+/CD3+細胞增高和CD4+/CD8+比值降低則表示細胞免疫功能下降，CD19+代表的B淋巴細胞，反映體液免疫的情況。本資料結果顯示輕、中、重度OSAHS組患者外周血CD3+、CD4+/CD3+淋巴細胞組群及CD4+/ CD8+比值均較對照組明顯下降，提示機體的細胞免疫功能下降，且隨著OSAHS嚴重程度增加，機體免疫功能下降更明顯，其變化與REM睡眠及4期睡眠下降有一致性。

CRP是公認的敏感的炎癥指標之一，主要在IL-1、IL-6等細胞因子介導下由肝臟產生，外周血淋巴細胞亦能少量合成。CRP具有一定的免疫調節作用，作用于淋巴細胞及單核細胞的受體，導致淋巴細胞活化、增生，促使淋巴因子生成，能夠與T細胞特異性結合，改變或者限制其功能，OSAHS患者CRP與免疫系統關系密切。本資料結果顯示OSAHS患者免疫功能較對照組下降。OSAHS組CRP水平高于對照組，以重度組尤為明顯，提示炎癥反應程度與OSAHS嚴重程度相關，這與國外研究結果類似［7］。Tan等［8］研究顯示OSAHS患者外周血T調節細胞及TH1與TH2比例異常，使機體處于促炎狀態，導致T細胞表型發生改變，從而導致系統炎癥損害。因此，CRP與淋巴細胞系統是相輔相成的作用關系，二者均與OSAHS的嚴重程度有一定的相關性。

綜上，OSAHS對機體睡眠結構、免疫功能及炎癥反應有明顯影響，隨OSAHS的嚴重程度的增加，睡眠結構紊亂加重，組織缺氧程度也進一步加重，機體的免疫功能呈進行性下降，三者之間存在一定的相關性。由于機體免疫下降，其對腫瘤細胞的識別及對細菌、病毒的抵抗力下降，同時激活全身的炎癥反應，導致各系統損害，尤其對心血管系統的損害明顯增加［4］，且炎癥反應與免疫功能間有相互促進作用，形成惡性循環，從而加重OSAHS對機體各系統損害。因此，分析睡眠結構，監測淋巴細胞免疫表型及CRP等炎癥因子可用于OSAHS病情評估，指導臨床早期對OSAHS及其并發癥干預，延緩或逆轉OSAHS對機體的損傷，以減輕OSAHS對人們健康的危害有重要的臨床意義。

1 Freire AX， Kadaria D， Avecillas JF， et al. Obstructive sleep apnea and immunity： relationship of lymphocyte count and apnea hypopnea index. Southern Medical Journal， 2010， 103（8）：771～774.

2 Bollinger T， Bollinger A， Skrum L， et al.Sleep-dependent activity of T cells and regulatory T cells.Clinical and Experimental Immunology，2009， 155（2）： 231～238 .

3 Kasal DA， Barhoumi T， Li MW，et al. T regulatory lymphocytes prevent aldosterone-induced vascular injury. Hypertension，2012， 59（2）：324～330.

4 Tan HL， Gozal D， Samiei A， et al. T Regulatory Lymphocytes and Endothelial Function in Pediatric Obstructive Sleep Apnea . PLoS ONE，2013 ，8（7）： e69710.

5 陳曦，孫玉梅，孫建軍.OSAHS呼吸事件發生與睡眠時相﹑體位的關系.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2012，26（17）：774～776.

6 Greenberg H， Ye X， Wilson D， Htoo AK， et al. Chronic intermittent hypoxia activates nuclear factor-kappaB incardiovascular tissues in vivo . Biochem Biophys Res Commun，2006， 343： 591～596.

7 Nadeem R1， Molnar J， Madbouly EM，et al.Serum inflammatory markers in obstructive sleep apnea： a meta-analysis. J Clin Sleep Med， 2013，9（10）L1003～1012.

Objective To explore the impact of obstructive sleep apnea hypopnea syndrome in body immune function，sleep structure and infl ammatory reaction in obstructive sleep apnea hypopnea syndrome（OSAHS） patients. Methods According apnea hypopnea index（AHI） of polysomnography test，160 subjects were divided into mild OSAHS group（38 cases），moderate OSAHS group（38cases），severe OSAHS group（44 cases），and control group （40 cases. The age，sleep patterns and peripheral blood oxygen content during sleeping period of all subjects were compared. Double fasting blood were drawn in each subject，which was used to analyze lymphocyte subgroup by fl ow cell meter and check blood C-reactive protein （CRP） level. Result Average blood oxygen content and lowest blood oxygen content in OSAHS patients were signifi cantly lower than those in controls（P＜0.01）. Rapid eye movement sleep percent （REM%）and stage 4 of non-rapid eye movement sleep percent in moderate OSAHS groups and severe OSAHS groups were signifi cantly lower than those in the controls and mild OSAHS groups（P＜0.05），stage 1-2 of nonrapid eye movement sleep percent in moderate OSAHS groups and severe OSAHS groups were signifi cantly higher than those in the controls and mild OSAHS groups（P＜0.05）.Peripheral blood CD3+，the ratios of CD4+/CD3+lymphocyte and CD4+/CD8+in OSAHS patients were signifi cantly lower than those in controls（P＜0.05）. The ratio of CD8+/CD3+in OSAHS patients was significantly higher than that in controls（P＜0.05）.CD16+56+（natural killer cell，NK cell） lymphocyte percentage of OSAHS patients was higher than that of the controls（P＜0.05）.There had no statistical signifi cance ofCD19+lymphocyte （B lymphocyte） percentage between OSAHS patients and the controls（P＞0.05）. Peripheral blood CRP values in severe OSAHS patients was increased，compared with that in mild OSAHS patients and the controls（P＜0.05）. Conclusions OSAHS induces structure of sleep disorders，decreases immunity function of the body and activates infl ammation reaction，which is associated with the severity degree of OSAHS.

Obstructive sleep apnea hypopnea syndrome Sleep structure Immunity function

210008 南京大學醫學院附屬鼓樓醫院