百色市馬傳染性貧血監(jiān)測及撲滅吸血昆蟲試驗報告

黃百花 覃 勇 蒙振畝 陸春禮 趙 聰 盧少坤

（廣西百色市動物疫病預防控制中心，廣西 百色 533000）

百色市馬傳染性貧血監(jiān)測及撲滅吸血昆蟲試驗報告

黃百花 覃 勇 蒙振畝 陸春禮 趙 聰 盧少坤

（廣西百色市動物疫病預防控制中心，廣西 百色 533000）

為了消滅百色市馬傳貧疫情并鞏固防治成果，1990年至2014年先后使用馬傳貧瓊脂凝膠免疫擴散試驗配合斑點單抗ELISA和抗體快速檢測卡等對采自轄區(qū)9844份馬屬動物血清進行檢測，結(jié)果全部為陰性；為了探明該病的傳播媒介蠓、蚊、刺蠅及虻等吸血昆蟲帶毒情況，2011年至2014年，使用RT-PCR法對采自與疫區(qū)云南省交界村屯370份吸血昆蟲樣品進行檢測，結(jié)果全部為陰性；開展使用高效氯氰菊酯、溴氯氰菊酯和雙硫磷殺蟲顆粒等三種藥物對吸血昆蟲滅殺效果試驗，結(jié)果顯示高效氯氰菊酯的滅蟲效果最好，雙硫磷殺蟲顆粒投藥使用比較方便簡單，試驗后大力推廣使用，有效地控制馬傳貧通過吸血昆蟲的傳播。百色市通過廣泛開展馬傳貧監(jiān)測和傳播媒介的控制，實現(xiàn)了鞏固馬傳貧防控成果。

馬傳染性貧血；監(jiān)測；消滅；傳播媒介；控制

馬傳染性貧血（Equine Infectious Anemia, EIA,簡稱馬傳貧），是由反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬馬傳貧病毒引起的馬屬動物傳染病，屬于二類動物疫病。百色市田陽縣于1987年檢測出馬傳貧陽性血清，為此，百色市被劃成馬傳貧疫區(qū)市，田陽縣被列為廣西防治馬傳貧的重點縣之一。為了控制和消滅馬傳貧疫情，通過廣泛開展監(jiān)測、流調(diào)、檢疫、監(jiān)管、消毒等措施，2005年全市通過自治區(qū)消滅馬傳貧考核驗收。由于與百色市毗鄰的云南省還存在馬傳貧疫情，2011～2014年我市又加大對與云南省毗鄰的 7個縣（區(qū)）和原疫點田陽縣的馬傳貧防控力度，至今沒有發(fā)生新疫情，有效地鞏固前階段的防控成果。

1 持續(xù)開展監(jiān)測凈化，鞏固防控成果

1990～2004年使用馬傳貧瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID）檢測馬屬動物血清樣品4218份，結(jié)果全部為陰性。2005～2010年為了區(qū)分強毒感染馬和疫苗免疫馬，采用AGID法檢測1518份馬屬動物血清，同時隨機抽出480份血清樣品使用斑點單抗ELISA（DB）進行檢測，結(jié)果全部為陰性。2011～2014年使用AGID法檢測4108份馬屬動物血清樣品，結(jié)果全部呈陰性，同時對 405匹新引種及外出比賽表演的馬匹使用抗體快速檢測卡（ICLF）加強檢測，結(jié)果全部呈陰性（見表1）。

表1　1990～2014年使用不同方法檢測馬屬動物血清樣品馬傳貧抗體結(jié)果統(tǒng)計表

2 探明傳播媒介帶毒情況，做好防控對策

為了探明馬傳貧傳播媒介帶毒情況，2011年至2014年，采自與疫區(qū)云南省交界村屯蠓（蚊）樣品分別為85份、88份、95份、102份，每份樣品包括蠓、蚊各20只，4年共計采集370份，使用RT-PCR進行檢測，結(jié)果全部為陰性。

2.1采樣方法

使用吸入式捕蚊器在與云南省交界村屯飼養(yǎng)馬屬動物區(qū)域采集蠓、蚊等相關(guān)昆蟲，為了確保樣品質(zhì)量，要求當晚采樣第二天早上立即將儲蚊盒放入-20℃的冰箱內(nèi)，20分鐘后取出，利用解剖顯微分出蠓和蚊，并按蠓、蚊各20只作為1份樣品放入自封袋中-20℃保存。

2.2樣品處理

將樣品置于研磨器中，加入 1.5ml生理鹽水后研磨成勻漿，將勻漿轉(zhuǎn)入1.5ml干凈的EP管中，用離心機10000rpm離心2min，取上清液備檢。

2.3RNA提取

按照RNA提取試劑盒說明要求提取馬傳貧RNA，并置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.4試劑配制及反應(yīng)體系

將提取好的RNA、陽性對照、陰性對照各取4μl，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。見表2。

表2　RT-PCR反應(yīng)體系(25μl體系)

2.5RT-PCR擴增

將待反應(yīng)管置于PCR擴增儀的反應(yīng)槽內(nèi)，設(shè)置相應(yīng)循環(huán)參數(shù)。見表3。

表3　RT-PCR循環(huán)參數(shù)

2.6結(jié)果判定

制作2%瓊脂凝膠，將擴增產(chǎn)物10μl置于凝膠孔中進行電泳。電泳結(jié)果顯示，EIAV陽性對照出現(xiàn)313bp條帶，陰性不出現(xiàn)條帶，試驗結(jié)果成立，其中1-6份樣品皆為陰性。如圖1所示。

圖1　RT-PCR結(jié)果

3 藥物殺滅蠓、蚊等吸血昆蟲田間試驗

為了更有效控制蠓、蚊等吸血昆蟲對農(nóng)村散養(yǎng)動物的危害，減少馬傳貧風險區(qū)域傳播疫情機率，通過使用 3種不同滅蚊藥物在農(nóng)村進行田間試驗，得出使用效果比較好使用方法較為簡單的藥物并推廣應(yīng)用。

3.1材料與方法

3.1.1材料

購買足量的滅蚊藥10%高效氯氟氰菊酯、5%氯氰菊酯、1%雙硫磷殺蟲顆粒和吸入式捕蚊器4個。

3.1.2方法

（1）目標群。選擇平果縣舊城鎮(zhèn)康馬村那座屯、仙峨屯、作下屯和古城屯等4自然屯作為試驗點，這4個自然屯每屯約有居民10戶，并且相對獨立，各種環(huán)境條件、飼養(yǎng)動物種類和規(guī)模以及人口數(shù)基本一樣，試驗對象屯與屯之間距離約1km。

（2）試驗分組。以那座屯為對照組，試驗期間與其他試驗組同時使用捕蚊器采集蠓、蚊等昆蟲；以仙峨屯為試驗組A，按10%高效氯氟氰菊酯使用說明書進行稀釋，對全屯畜禽欄、露天地面、人居房間地板、開放式糞坑、死水坑等表面按150ml/m2進行噴灑，15d后再以同樣方法用藥；以作下屯為試驗組B，按5%氯氰菊酯使用說明書進行稀釋，對全屯畜禽欄、露天地面、人居房間地板、開放式糞坑、死水坑等表面按150ml/m2進行噴灑，15d后再以同樣方法用藥；以古城屯為試驗組C，對全屯開放式糞坑、死水坑等使用1%雙硫磷殺蟲顆粒按15g/m3投藥，投藥后使用竹鈀攪拌以便藥物溶于水中，15d后再以同樣方法用藥。

（3）采樣方法。將捕蚊器固定在各試驗組馬欄內(nèi)距地面藥1m，分別于試驗前1d、第一次投藥第1d、5d、9d、14d、第二次投藥第1d、5d、9d、14d、20d晚上8時開啟捕蚊器捕捉蠓、蚊等昆蟲，第二天早上 8時關(guān)閉捕蚊器電源，收集捕捉到的昆蟲樣品置于自封袋中并冰凍保存。

3.2統(tǒng)計分析

應(yīng)用Microsoft Excel軟件對各組蠓、蚊下降率進行統(tǒng)計分析。

3.3試驗結(jié)果

從試驗結(jié)果來看，單獨使用捕蚊器在固定的區(qū)域內(nèi)對蠓、蚊具有一定的殺滅作用，但效果不是很理想；使用高效氯氟氰菊酯噴灑滅蠓、蚊效果最好；使用雙硫磷殺蟲顆粒對開放式糞坑、死水坑等用藥后，顯示蠓、蚊數(shù)持續(xù)下降，這也說明在廣大農(nóng)村開放式糞坑、死水坑等是滋生蠓、蚊的主要地方。見表4、圖2。

表4　使用不同的藥物對蠓、蚊殺滅效果統(tǒng)計表

圖2　使用不同的藥物后蠓、蚊下降率

4 小結(jié)與體會

（1）通過使用馬傳貧瓊脂凝膠免疫擴散試驗（AGID）、斑點單抗ELISA（DB）及免疫試紙快速檢測法（ICLF）等多種方法對轄區(qū)馬屬動物進行監(jiān)測，確保了檢驗結(jié)果的準確性、時效性和實用性。2005-2010年，使用AGID與 DB相結(jié)合的監(jiān)測方法，可以很好地區(qū)分自然病毒感染抗體和疫苗免疫抗體。ICLF法用于引種、勞役輸出或外出演出的馬屬動物檢測，檢測時間快、操作方法簡易，實用性強。自 1990年以來，百色市馬傳貧監(jiān)測面廣量多，檢測結(jié)果全部呈陰性，表明全市馬傳貧防控效果相當顯著。

（2）為了進一步了解蠓、蚊等馬傳貧傳播媒介昆蟲帶毒情況，對與疫區(qū)云南省交界村屯蠓、蚊進行采樣檢測，結(jié)果全部為陰性。對馬傳貧風險區(qū)域蠓、蚊等馬傳貧傳播媒介帶毒情況進行監(jiān)測目前國內(nèi)尚未見報道，通過全方位開展監(jiān)測，對評估消滅馬傳貧疫情工作提供強有力的科學依據(jù)。

（3）通過使用高效氯氰菊酯、溴氯氰菊酯和雙硫磷殺蟲顆粒等三種藥物對吸血昆蟲滅殺效果試驗，結(jié)果顯示高效氯氰菊酯的滅蟲效果最好，雙硫磷殺蟲顆粒投藥使用比較方便簡單。根據(jù)試驗結(jié)果，結(jié)合全市滅蚊活動，筆者使用高效氯氰菊酯和雙硫磷殺蟲顆粒等藥物在與馬傳貧疫區(qū)云南省毗鄰的2218個自然屯開展滅蠓、蚊工作，取得了明顯效果，有效地控制風險區(qū)域馬傳貧通過吸血昆蟲的傳播。

百色市作為廣西飼養(yǎng)馬屬動物最多的地級市，常年飼養(yǎng)馬屬動物有20萬匹左右，做好馬傳貧疫情的防控對廣西乃至全國鞏固消滅馬傳貧成果具有重要的現(xiàn)實意義。

The test report of monitoring equine infectious anemia and eliminate the blood-sucking insects in Baise

In order to eliminate the epidemic of Equine infectious anemia and strengthen the results of prevention and control in baise.From 1990 to 2014, successively using AGID test, single spots of ELISA and immune strip rapid test monitoring the 9844 copies of Equine infectious anemia antibodies, the results are all negative;To find out the media of the disease as Ceratopogonidae , Mosquito that blood-sucking insects with virus, from 2011 to 2014, RT-PCR method were used to detect the 370 samples of blood sucking insects in the boundary village with Yunnan province，all the results are negative;To carried out using three drugs of efficient cypermethrin, bromine cypermethrin and double sulphur phosphorous pesticide particles for blood sucking insects killing test, the results show that the efficient cypermethrin disinsection effect is best, the double sulfur phosphorus pesticide particles drug delivery using more convenient and simple, vigorously promote the use after test, effectively control the spread of the Equine infectious anemia by blood-sucking insects in Baise .To through a series of monitoring and control measures for Equine infectious anemia in 25 years, the test results are negative, have reached the target of eliminating Equine infectious anemia.

Equine infectious anemia; monitor; eliminate; media;control

S85

A

1008-1151(2015)04-0116-03

2015-03-15

百色市科學研究與技術(shù)開發(fā)項目“百色市消滅馬傳染性貧血綜合技術(shù)集成與應(yīng)用”（百科計20111801）。

黃百花（1984-），女，廣西百色人，廣西百色市動物疫病預防控制中心獸醫(yī)師，碩士研究生，從事動物疫病防控工作。