脂氧素A4對顱腦損傷伴失血性休克大鼠腦組織的保護(hù)作用

李 萍，許會(huì)彬，王化芬，崔 慶，吳玲玲

顱腦損傷伴失血性休克（TBIS）是臨床上常見的危重癥之一，因其病情兇險(xiǎn)、并發(fā)癥多見，救治難度大，而過度炎癥反應(yīng)是引起機(jī)體二次損傷的重要原因［1，2］。因此，如何減輕炎癥反應(yīng)，抑制過度炎癥反應(yīng)，對改善患者預(yù)后具有重要的意義。脂氧素A4（LXA4）是一種內(nèi)源性脂類介質(zhì)，被稱為是炎癥反應(yīng)的“剎車信號(hào)”，其通過抑制中性粒細(xì)胞的趨化、黏附和炎性介質(zhì)的釋放而發(fā)揮廣泛的抗炎作用［3－6］。

本研究對TBIS大鼠進(jìn)行術(shù)前LXA4干預(yù)，對大鼠腦組織S100β、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及腦含水量進(jìn)行檢測，旨在探討LXA4對TBIS大鼠腦損傷的保護(hù)作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組 清潔級(jí)雄性Wistar大鼠45只（購自山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），體重220～250 g。隨機(jī)分成假手術(shù)組 （C組）、TBIS模型組和LXA4治療組，每組15只。

LXA4治療組于術(shù)前6 h及2 h尾靜脈注射LXA4（脂氧素 A4， Lipoxin A4methyl ester， 美國Cayman公司生產(chǎn)，溶于10%乙醇溶液），給予量為0.1 mg/kg體重。C組及TBIS組尾靜脈注射等量生理鹽水及10%乙醇溶液。

1.2 動(dòng)物模型制備 大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，不禁水。采用自由落體復(fù)制顱腦外傷合并休克模型［1］。假手術(shù)組僅開顱窗后骨蠟封閉骨窗，不予于打擊及放血。

1.3 標(biāo)本留取及指標(biāo)測定

1.3.1 S100β、 丙二醛 （MDA） 及超氧化物歧化酶（SOD）測定 取新鮮腦組織，用生理鹽水制備10%組織勻漿液，離心后留取上清液，－80℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)錅y。S100β試劑盒購自長沙佳和生物科技有限責(zé)任公司，丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒購自南京建成生物工程研究所。測定步驟完全按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.2 腦含水量測定 采用干濕重法。大鼠處死后斷頭，取腦組織，用天平稱濕重（W），再置于80℃電熱恒溫干燥箱中烘烤48 h至恒重稱干重（D）。腦含水量（%）＝（W－D）/W×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 腦組織 S100β、MDA及 SOD水平變化 TBIS組與LXA4治療組腦組織勻漿S100β及MDA的水平均高于 C 組 （P＜0.01），SOD 活性低于 C 組 （P＜0.01）。 與 TBIS 組比較，LXA4治療組 S100β 及 MDA的水平均降低（P＜0.01），SOD 活性升高（P＜0.01）。見表1。

表1 腦組織 S100β、MDA 及 SOD 水平變化（±s，n＝15）

表1 腦組織 S100β、MDA 及 SOD 水平變化（±s，n＝15）

注：與 C 組比較，＊P＜0.01；與 TBIS 組比較，＃P＜0.01

組別 S100β（ng/L） MDA（nmol/mg pro） SOD（U/mg pro）C 組 141.5±22.3 3.27±0.65 29.38±6.71 TBIS 組 262.1±28.9＊ 6.61±1.53＊ 14.55±4.29＊LXA4治療組 192.8±26.7＊＃ 4.22±0.81＊＃ 21.38±4.85＊＃

2.2 腦含水量比較 同C組比較，TBIS組與LXA4治療組腦組織均有明顯水腫，腦含水量明顯增加（P＜0.01），LXA4與 TBIS 組比較，腦含水量明顯降低（P＜0.05）。 見表 2。

表2 腦含水量比較（±s，n＝15）

表2 腦含水量比較（±s，n＝15）

注：與 C 組比較，＊P＜0.01；與 TBIS 組比較，＃P＜0.01

組別 腦含水量（%）C 組 58.91±9.04 TBIS 組 82.46±7.59＊LXA4治療組 69.02±8.21＊＃

3 討 論

對顱腦損傷合并失血性休克（TBIS）來說，過度炎癥反應(yīng)引起機(jī)體的二次損傷是加劇病情惡化的重要因素之一。因此抑制炎癥因子的釋放，防止過度炎癥反應(yīng)，緩解TBIS的病程進(jìn)展是改善TBIS預(yù)后的重要措施之一。

脂氧素（LX）是一類花生四烯酸酯加氧酶代謝產(chǎn)物，屬于二十烷家族中重要成員之一。LXA4是體內(nèi)重要的內(nèi)源性促炎癥消退介質(zhì)，其在促炎介質(zhì)前列素E2和白三烯之后產(chǎn)生。一方面，LXA4通過抑制白細(xì)胞游走、拮抗白三烯、抑制黏附分子及趨化因子受體表達(dá)，從而抑制機(jī)體炎癥反應(yīng)及病情的進(jìn)一步惡化。另一方面，LXA4通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬作用，及時(shí)清除凋亡的中性粒細(xì)胞，促進(jìn)炎癥消退［3－6］。

S100β蛋白是神經(jīng)系統(tǒng)的特異性蛋白，主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形細(xì)胞和少突神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。研究表明S100β在顱腦外傷、腦血管疾病及繼發(fā)性腦損傷等疾病中均有較高表達(dá)，可反映血腦屏障的破壞情況，被稱為腦的“C 反應(yīng)蛋白”［7，8］。 本研究顯示，TBIS組與LXA4治療組腦組織勻漿S100β水平均高于C組。與TBIS組比較，LXA4治療組S100β水平降低。本研究腦組織含水量結(jié)果顯示，同C組比較，TBIS組與LXA4治療組腦組織均有明顯水腫，腦含水量明顯增加，LXA與TBIS組比較，腦含水量明顯降低。表明應(yīng)用LXA4對TBIS干預(yù)能夠減輕模型大鼠的腦損傷。

創(chuàng)傷后機(jī)體會(huì)發(fā)生氧應(yīng)激損傷，由此引起多種炎癥介質(zhì)的釋放，會(huì)進(jìn)一步加劇休克的進(jìn)程。丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）能較好反映機(jī)體內(nèi)氧自由基水平和機(jī)體對氧自由基的清除能力。本研究結(jié)果顯示，TBIS組與LXA4治療組腦組織勻漿MDA的水平均高于C組，SOD活性均低于C組。說明在TBIS早期，腦組織內(nèi)產(chǎn)生了大量氧自由基。而SOD水平的降低使得機(jī)體對氧自由基的清除能力下降，并可進(jìn)一步造成機(jī)體的氧化與抗氧化平衡體系被打破，導(dǎo)致腦組織中氧自由基的蓄積，加劇腦組織的損傷。與TBIS組比較LXA4治療組腦組織勻漿MDA活性降低，SOD活性升高。說明LXA4干預(yù)，能明顯降低腦組織氧自由基的產(chǎn)生，有效增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化水平。

總之，LXA4干預(yù)可有效降低TBIS大鼠腦組織的脂質(zhì)過氧化水平，增強(qiáng)清除氧自由基的能力，減輕炎癥反應(yīng)，對TBIS所致腦組織損傷具有保護(hù)作用。

［1］許會(huì)彬，王 青，王化芬，等.大鼠顱腦損傷伴休克所致小腸過氧化損傷及ω－3多不飽和脂肪酸的保護(hù)作用［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2011，28（9）：1584.

［2］孫榮青，朱麗超，周新閣，等.重組人促紅細(xì)胞生成素對顱腦損傷患者血清腦紅蛋白、血紅蛋白含量的影響［J］.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，7（2）：257－260.

［3］呂萬治，呂重慶，余夙慧，等.脂氧素A4對TNF－α誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響［J］.溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，43（1）：1－4.

［4］趙琦峰，邵 蘭，杜 杰，等.脂氧素A4不同給藥時(shí)機(jī)對大鼠心肌缺血再灌注時(shí)縫隙連接蛋白43表達(dá)的影響［J］.中華麻醉學(xué)雜志，2013，33（10）：1266－1271.

［5］陳寬林，方明明，張玉穎，等.脂氧素A4調(diào)節(jié)Smad7/3表達(dá)對糖尿病腎臟保護(hù)機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究［J］.實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2013，17（21）：58－61.

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［8］趙朝華，吳樹強(qiáng)，楊 杰，等.天麻素預(yù)處理對短暫性腦缺血大鼠腦組織 S100β 表達(dá)的影響［J］.中國老年學(xué)雜志，2014，20（8）：2156－2158.