前列腺癌組織中ALKBH3和Bcl-xl蛋白的表達*

楊德京，李沛寰，武玉東

1)鄧州市人民醫院泌尿外科 鄧州474150 2)鄭州大學學報編輯部 鄭州450001 3)鄭州大學第一附屬醫院泌尿外科 鄭州450052

近年來我國前列腺癌的發病率快速上升，目前已是最常見的泌尿系統腫瘤，由于我國未常規開展前列腺癌篩查，因此就診患者腫瘤多已進展至晚期，失去手術機會。雖然采用內分泌治療和放療的綜合治療方案，但患者生存率并沒有顯著改善，尋找與前列腺癌進展相關的蛋白成為前列腺癌治療的關鍵。ALKBH3 與腫瘤的進展密切相關，但作用機制尚不明確［1-2］。Bcl-xl 是Bcl-2 家族成員之一，其作用為抑制細胞的程序性凋亡，在腫瘤的發生、發展中起著重要的作用［3］。該研究采用免疫組化SP 法檢測前列腺癌組織中ALKBH3 和Bcl-xl 蛋白的表達，探討ALKBH3 在前列腺癌中的表達與腫瘤細胞凋亡的關系。

1 對象與方法

1．1 研究對象 收集鄭州大學第一附屬醫院2010年1月至2013年5月收治的前列腺癌患者的病理組織標本143例。年齡57～83歲，中位年齡68歲。分化程度依照Gleason 評分標準判斷:高、中分化癌83例，低分化癌60例;TNM 分期:T1、T2 期71例，T3、T4 期72例。患者術前均未接受化療或激素治療。收集同期住院的前列腺增生患者組織標本125例，患者年齡65～87歲，中位年齡69歲。所有組織標本均經組織病理學確診。

1．2 兩種前列腺組織中ALKBH3 和Bcl-xl 蛋白的檢測 采用免疫組化SP 法。ALKBH3 和Bcl-xl 一抗及二抗(SP-9002 通用試劑盒)和DAB 顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術有限公司。組織標本4 μm 厚切片，滴加稀釋150 倍的一抗，DAB 顯色，常規脫水、透明、封片。用PBS 代替一抗作陰性對照。ALKBH3 及Bcl-xl 蛋白以細胞核或細胞質中出現棕黃色或者黃色顆粒為染色陽性細胞。于陽性細胞最密集處連續觀察5個高倍視野，計數每個視野中的陽性細胞，取均值。按陽性細胞百分比計分:0%為0 分，～20%為1 分，～50%為2 分，＞50%為3 分;按染色強度計分:淡黃色為1 分，棕黃色為2分，棕褐色為3 分。染色強度與陽性細胞百分比評分的乘積＞3 分為陽性。

1．3 統計學處理 采用SPSS 17．0 處理數據，兩種組織中ALKBH3 或Bcl-xl 蛋白陽性表達率的比較以及前列腺癌組織中ALKBH3 和Bcl-xl 蛋白的表達與臨床病理特征的關系應用χ2檢驗，以列聯系數評估前列腺癌組織中兩種蛋白表達的關系。檢驗水準α=0．05。

2 結果

2．1 兩種前列腺組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達 見圖1、表1。

圖1 兩種組織中ALKBH3(1)和Bcl-xl(2)蛋白的表達(SP，×400)

表1 前列腺增生與前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達例(%)

2．2 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達與臨床病理特征的關系 ALKBH3 和Bcl-xl 的蛋白表達與前列腺癌的分化程度及TNM 分期有關，與年齡無關。見表2。

2．3 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白表達的關聯性分析 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl蛋白的表達呈正關聯(rp=0．261，P =0．001)。見表3。

表2 前列腺癌組織中ALKBH3 與Bcl-xl 蛋白的表達與臨床病理特征的關系例(%)

表3 前列腺癌組織中兩種蛋白表達的關聯性例

3 討論

隨著分子生物學的快速發展，目前已經發現前列腺特異性膜抗原、前列腺特異抗原等與前列腺癌的發生及進展相關;隨著研究的深入，發現這些蛋白的表達可作為前列腺癌的腫瘤標志物進行早期診斷，但是作為靶點進行治療意義不大［4］。隨著我國快速進入老齡化社會，前列腺癌的發病人數與日俱增，內分泌治療患者不可避免地會進展為去勢抵抗性前列腺癌(CRPC)，CRPC 的治療即將成為個人及社會的沉重負擔。因此尋找安全有效的治療靶點，從而提高患者的生存率迫在眉睫。ALKBH3 是2005年利用熒光差異顯示分析技術克隆出的一種新的腫瘤基因［1］，與前列腺癌的發展密切相關，但是其作用機制尚不清楚。該研究采用免疫組化技術檢測ALKBH3 蛋白在不同前列腺組織中表達的情況，同時分析其與前列腺癌腫瘤細胞凋亡的關系。

細胞凋亡是受一系列基因控制的程序化細胞死亡方式，是通過外源性或內源性的凋亡信號激活細胞內的自殺程序而發生。已在哺乳動物中發現Bcl-2 是重要的抑凋亡蛋白［5-6］。有研究［7］表明，定位于內質網膜上的Bcl-2 可能通過阻斷Ca2+從內質網向胞質的流動，使依賴Ca2+的核酸內切酶活性降低，從而阻斷細胞凋亡。有學者［8］認為Bcl-2 通過抗氧化劑或抑制氧自由基的產生而發揮其抑制細胞凋亡的功能。Bcl-xl 是Bcl-2 家族中重要的凋亡抑制基因，其激活與腫瘤的發生密切相關。Bcl-xl 通過抑制死亡誘導信號復合體形成，從而抑制Caspase 的活化［9］;而且可以通過與Apaf-1 和Caspase-9 形成三元復合物阻斷細胞凋亡的級聯反應［10］。Bcl-xl 通過打破細胞自穩平衡機制，使得受損的細胞不能及時清除，導致細胞惡變，而且Bcl-xl 的過量表達與腫瘤的耐藥性相關［11］。

該研究結果顯示，前列腺癌組織中ALKBH3 的陽性表達率為88．8%，遠高于前列腺增生組織;ALKBH3 蛋白表達與前列腺癌的腫瘤分化程度和臨床分期有關。以上結果提示ALKBH3 的表達與前列腺癌的發生發展密切相關，可以作為預測因子輔助判斷患者的預后。此外，該研究結果顯示Bcl-xl在前列腺癌中的表達與患者腫瘤分化程度及病理分期明顯相關，并且前列腺癌組織中Bcl-xl 的表達與ALKBH3 的表達呈正關聯，提示ALKBH3 可能是通過抑制前列腺癌細胞凋亡促進前列腺癌的進展。

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