高效液相色譜—串聯質譜法同時測定蔬菜中12種農藥殘留

廖美林　馬作江

摘 要：建立了高效液相色譜-串聯質譜法同時測定蔬菜中敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、甲拌磷、氧化樂果、二嗪農、呋喃丹、樂果、甲基毒死蜱、毒死蜱、甲基對硫磷、對硫磷12種農藥殘留的檢測方法，分別選取黃瓜、菠菜和大蔥等蔬菜樣品，經過0.1%醋酸乙腈提取、濃縮以及分散萃取，在電噴霧離子源ESI正離子模式下多重反應監測（MRM）對所選取的蔬菜農藥殘留進行檢測。最終測定結果顯示，該方法簡便靈敏，準確快速，檢出限低，回收率達到70%以上，可實現對蔬菜種多種農藥同時快速測定。

關鍵詞：高效液相色譜-串聯質譜 蔬菜 農藥殘留

中圖分類號：TS207 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）09（c）-0117-02

我國屬于農業生產大國，面臨14億人的飲食需求，為保證農副產品的有效成長，使用農藥也是一道有效的工序。伴隨著廣泛的使用農藥，在蔬菜出口中也因為有機農藥殘留問題導致了大量的經濟損失?，F在由于我國的農藥種類比較繁多，如果單一的進行一項一項的檢測，那么就會耗費大量的人力物力，且效率低下[1-2]，因此在近年來，通過基質同時進行多種農藥殘留的檢測方法，即簡單，有顯著有效的解決了這一問題。該文采用液相色譜、質譜聯用技術同時檢測蔬菜中12農藥殘留，結果準確可靠，提高了分析效率。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

高效液相色譜-串聯質譜聯用儀Agilent 1290/6460 LC/MS/MS （ESI源），Agilent公司；氮氣發生器NM32LA，PEAK公司；電子天平AUY220，島津公司；Milli-Q超純水器，美國Milli-Q公司；超聲波清洗儀SB25-12D，寧波新芝生物科技股份有限公司；氮氣吹干儀N-EVAP， 美國Organomation公司；旋渦混合器XW-80A，上海滬西分析儀器廠有限公司。

敵敵畏（Dichlorvos）、甲胺磷（Methamidophos）、乙酰甲胺磷（Acephate）、甲拌磷（Phorate）、氧化樂果（Omethoate）、二嗪農（Diazinon）、呋喃丹（Carbofuran）、樂果（Dimethoate）、甲基毒死蜱（Chlorpyrifos_methyl）、毒死蜱（Chlorpyrifos）、甲基對硫磷（Parathion-methyl）、對硫磷（Parathion-ethyl）購自德國Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸為質譜純，購自德國Merck公司；0.22 μm微孔濾膜購自Ameritech公司。

1.2 溶液配制

分別取一定的農藥標準進行混合溶于甲醇中，配置好1g/L的儲備溶液，將其放置到于4℃冰箱進行保存。臨用前將標準儲備液用甲醇溶液逐步的進行稀釋，然后達到相應的混合工作標準使用液。

1.3 樣品制備處理

蔬菜樣品經組織搗碎機制成勻漿后，分別稱取樣品20 g于離心管中，加入50 mL0.1%的乙酸-乙腈溶液渦旋混勻提取，對提取液加入3 g的無水硫酸鎂和1 g無水乙酸鈉進行搖勻靜置10 min。吸取10 mL上清液，在45℃的水浴環境下進行氮氣吹干。加入甲醇進行渦旋溶解定容至5 mL容量瓶中，最后加入石墨進行渦旋脫色，過0.22 μm有機相微孔濾膜于進樣瓶中。

1.4 儀器分析條件

色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB–C18型（50 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流動相A：0.1%甲酸溶液，流動相B：甲醇；梯度洗脫：柱溫：30℃；進樣量：2.0 μL；流速為0.3 mL/min。

質譜條件 離子源：電噴霧離子源ESI：掃描方式：正離子掃描；檢測方式：選擇反應檢測（MRM）；干燥氣溫度（Gas Temp）：325 ℃；干燥氣流速（Gas Flow）：10 L/min；霧化器壓力（Nebulizer）：20 psi；鞘氣溫度（Sheath Gas Temp）：300 ℃；鞘氣流速（Sheath Gas Flow）：12 L/min；毛細管電壓（Capillary）：3500 V；高純氮氣：純度不低99.999%，采用MRM模式外標法定量。12種農藥標準物質總離子流圖。（見表1）

2 實驗結果

通過液相色譜分離技術進行分離，經質譜分析參數進行數據的截取分析，對于整體的溶液內結構來說，都能夠給與很好的保留。在通過色譜分析，就能夠分析出其中的數據信息了，分別對0.25，0.50，1.0，2.0 mg/L的標準混合液進行色譜分析，得到各種農殘的的最低檢出限、準曲線和回收率。（見表2）

3 討論

3.1 質譜條件優化

在對農藥標準品純度等相關因素作綜合考慮之后，為避免發生離子干擾，在實驗過程中需要選用一根短C18優化柱，對所選取的農藥單標進樣并實施優化柱粗分離。對每種農藥的母離子和子離子采用全掃描及子離子掃描模式確定；還要對碰撞電壓以及碰撞能量等相關參數實施優化，以此對每種物質特征進行確定，通常情況下豐度較高的是定量離子，反之則為定性離子。在本次研究中質譜數據所采用的分析方式為MRM模式，任何一種分析物均會有一個時間窗口，從而最大化提高每個離子的駐留時間，從而提高檢測方法的信噪比，這一模式和傳統檢測方式相比，不用將采集時間窗口截取以此對離子駐留時間實施增加，也就能夠將傳統模式中須卻確保足夠分離度將采集時間窗口進行截取，和快速測定之間的矛盾有效處理[3-4]。在相同色譜和質譜條件下，也就能夠實現MRM和Dynamic MRM采集方式對比。

3.2 樣品的提取與凈化分析

筆者這里主要是針對12種農藥進行的分析，由于他們的溶解性有著很大的區別，所以在通過提取儀器進行提取的過程中，需要有效的控制時間，而同時根據溶劑的性質以及農藥的物理性質，就基質的特點方面，也需要進行分析。乙腈是農藥提取的最常用溶劑，對于各種有機農藥的提取效果都十分明顯[5]。而由于乙腈的沸點比較高，在進行濃縮的過程中，就會浪費大量的時間，所以在進行提取的時候，往往至提取有機氯時采用，丙酮-石油醚則作為主要的混合溶劑針對這些其他的農藥進行溶劑提取[6]。

在進行蔬菜樣品的含水量提取中，我們針對的是干燥樣品的農藥殘留提取，這些樣品的含量比較多，所以也有必要除去水分以后再進行提取。

3.3 色譜條件和質譜條件的選取

我們在進行色譜的提取的過程中，在針對質譜條件的優化中就比較容易對農藥中產生的有機離子部分進行選取，這對于整體的線性范圍和標準曲線方面，都能夠給與很好的檢測。通過這一方法進行有機提取以后，就可以進行三者之間的對比，然后確定其中殘留農藥的種類和殘留農藥的含量，從確定所檢測的農產品是否殘留過多的農藥。不過這個檢測的結果也有一定的弊端，那就是對于檢測的結果仍存在一定的下限，那就是5μg/L。

3.4 農藥回收和蔬菜樣品分析

選擇的黃瓜、菠菜和大蔥，在其機制中對不同水平的回收檢測標準中，都有精確的數據，對于黃瓜的28種農藥檢測結果也證明其回收率達到了75%～103%精密度小于14.3%；菠菜回收率70%～108%，精密度小于15.0%；大蔥回收率為70%～100%，精密度小于14.7%?？梢砸姷眠@種方法對于檢測農藥的殘留上，是能夠滿足我們現在的研究需求的。

3.5 樣品分析

將這種方法應用到其他的蔬菜中，進行豌豆、胡蘿卜、花菜、西蘭花等20多種市場蔬菜調查，其中檢測到多種蔬菜在不同程度上都有一定的農藥殘留。集中較多的是菠菜、豌豆、蘿卜、黃瓜等無包衣農副產品。因為其生長結構的關系，這些蔬菜在生長的過程中無法避免的接受到了農藥的噴灑，采摘期，也沒有得到及時的分解，這就導致在銷售的過程中，出現了農藥的殘留[7-8]。

4 結語

通過液相色譜-串聯質譜法進行蔬菜的多種農藥殘留研究過程中，驗證到這種方法對于進行農副產品的農藥殘留的提取效果是明顯的，同時對于分析其中殘留的農藥成分方面，也能夠十分精確地完成農藥的定向研究。

參考文獻

[1] 陳達煒，高潔，呂冰，等.超高效液相色譜—高分辨質譜法快速篩查土豆中的多種農藥殘留[J].分析化學，2014，42（4）：579-584.

[2] 章虎，錢鳴蓉，王新全，等.固相萃取-液相色譜質譜法測定稻米中乙蟲腈對映體殘留[J].分析化學，2012，40（6）：883-887.

[3] 高馥蝶，趙妍，邵兵，等.超高效液相色譜—四極桿—飛行時間質譜法快速篩查牛奶中的農藥和獸藥殘留[J].色譜，2012，30（6）：560-567.

[4] 劉軍，沈菁，劉建，等.分散固相萃取—高效液相色譜—質譜聯用法測定水稻秸稈、糙米、稻殼和土壤中戊唑醇殘留[J].分析科學學報，2010，26（1）：55-58.

[5] 張新忠，羅逢健，陳宗懋，等.超高效液相色譜串聯質譜法測定茶葉、茶湯和土壤中氟環唑、茚蟲威和苯醚甲環唑殘留[J].分析化學，2013，41（2）：215-222.

[6] 郭幸麗，秦冬梅，徐彥軍，等.高效液相色譜—電噴霧質譜法測定土壤中的矮壯素殘留[J].農藥學學報，2009，11（3）：346-350.

[7] 陳武瑛，董豐收，劉新剛，等.分散固相萃取—超高效液相色譜—串聯質譜法快速測定蘋果中代森錳鋅殘留[J].分析化學，2010，38（4）：508-512.

[8] 田宏哲，趙瑛博，周艷明，等.高效液相色譜—質譜法測定牛奶中6種氨基甲酸酯農藥殘留[J].食品科學，2011，32（2）：187-190.