厚樸三物栓劑的最佳提取工藝

2015-12-08 05:34:20胡建萍黃慶德

福建中醫藥 2015年1期

胡建萍，黃慶德，王杰

（福建中醫藥大學藥學院，福建福州 350122）

厚樸三物湯出自《金匱要略》，由厚樸、大黃、枳實3味藥組成。具有行氣除滿、去積通便的功能。主治實熱內積、氣滯不行、腹部脹滿疼痛、大便不通。為提高用藥的便利性及患者的順應性，我們將厚樸三物湯改劑型為栓劑。根據處方中各藥味中有效成分的性質及文獻報道，確定將方中厚樸、大黃、枳實3味藥用乙醇回流提取，以柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚提取率和收膏率為評價指標，用單因素實驗及L9（34）正交實驗，對提取次數、乙醇濃度、乙醇用量、提取時間等因素進行考察，優選最佳提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器島津LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司）；XS205十萬分之一電子天平［梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司］；FA2004N萬分之一電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；KQ-500E超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SHB-III循環水式多用真空泵（鄭州市長城科教儀器有限公司）；HH-6數顯恒溫水浴鍋（常州市國華電器有限公司）。

1.2 試藥厚樸酚、和厚樸酚、柚皮苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110729-200412、110730-201112、110722-201111）；厚樸、大黃、枳實購于福建中醫藥大學附屬第三人民醫院，由福建中醫藥大學藥學院楊成梓副教授鑒定，符合《中華人民共和國藥典》［1］2010 版相關規定；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；乙醇、磷酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件 ① 色譜柱：Diamonsil?Platisil ODS （250 mm×4.6 mm，5 μm）。 ② 流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B）。 ③ 梯度洗脫條件：0～10 min A為 20%，10～30 min A由 20%～85%，30～40 min A為85%。④ 檢測波長：283 nm；柱溫：35℃。 ⑤ 流速：0.8 mL／min。 ⑥ 進樣量：10 μL。

2.1.2 對照品儲備液的制備取柚皮苷對照品、和厚樸酚對照品、厚樸酚對照品各6.97、7.07、7.59 mg置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得含柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚分別為0.697、0.707、0.759 mg／mL的對照品儲備液。

2.1.3 提取液的制備按照處方比例稱取厚樸、大黃、枳實共120 g，6倍量70%乙醇水浴回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，濃縮，置500 mL量瓶中，加70%乙醇定容，即得提取液。

2.1.4 供試品的制備精密吸取“2.1.3”項提取液1 mL，揮干，用甲醇溶解并移至10 mL量瓶中，加甲醇定容，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得供試品溶液。

2.1.5 線性關系考察精密吸取混合對照品儲備液各 0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5 mL 至 10 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成系列濃度的混合對照品溶液，搖勻。分別精密吸取10 μL進樣，測定峰面積，以質量濃度（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，進行線性回歸，柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚回歸方程為：

Y＝2.15×107X－1.70×104，r＝0.9999

Y＝1.78×107X－5.36×104，r＝0.9999

Y＝1.64×107X－3.29×104，r＝0.9999

結果表明：柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚分別在0.00697～0.34850、0.00707～0.35350、0.00759～0.37950 mg／mL線性關系良好。

2.1.6 精密度試驗吸取混合對照品儲備液1 mL至10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得對照品溶液，按“2.1.1”項條件重復進樣6次，測定峰面積，計算柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的RSD分別為0.46%、0.37%、0.39%，表明儀器精密度良好。

2.1.7 重復性試驗精密吸取“2.1.3”項同一批樣品6份，照“2.1.4”項方法制備，測定峰面積，柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的RSD分別為0.49%、0.32%、0.28%，表明本方法重復性良好。

2.1.8 穩定性實驗取同一供試品溶液，室溫放置0、2、4、6、8、12、24 h，測定。柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的RSD分別為2.47%、2.31%、2.08%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.1.9 加樣回收試驗精密吸取“2.1.3”項已知含量的提取液0.5 mL，分別加入混合對照品溶液0.5 mL，照“2.1.4”項方法制備6份，測定峰面積，計算柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的平均回收率。結果見表1。

2.2 收膏率的測定精密吸取“2.1.3”項提取液10 mL，置105℃已干燥至恒重的蒸發皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h至恒重，置干燥器中冷卻至室溫，迅速稱定質量，計算收膏率。

表1 加樣回收率測定結果

2.3 提取工藝條件

2.3.1 提取次數按處方比例，稱取藥材3份，每份24 g，置 500 mL圓底燒瓶中，加入8倍量的70%乙醇，水浴回流，分別提取3次，每次提取1.5 h，紗布濾過，合并濾液，將提取液濃縮，置至100 mL量瓶中，加70%乙醇定容。精密吸取提取溶液1 mL，照“2.1.4”項方法制備供試品溶液，測定，計算柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的提取率，結果表明第3次的提取較好。見表2。

表2 提取次數的實驗結果

2.3.2 正交試驗設計參考相關文獻及預實驗結果［2-6］，以柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的提取率及收膏率為評價指標，選用L9（34）正交實驗表對乙醇濃度（A）、乙醇用量（B）、提取時間（C）3 個因素，每因素3個水平進行考察。因素水平見表3。

2.3.3 提取液的制備按照處方比例稱取厚樸、大黃、枳實共 120 g，按 L9（34）正交實驗條件進行水浴回流提取，濾過，合并濾液，濃縮，置500 mL量瓶中，加70%乙醇定容，即得提取液。

表3 正交實驗因素

2.3.4 樣品測定精密吸取“2.3.3”項提取溶液1 mL，按“2.1.4”項方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算柚皮苷、和厚樸酚、厚樸酚的提取率。另精密吸取“2.3.3”項提取溶液 10 mL，按“2.2”項方法進行操作，測得收膏率。正交試驗安排及結果見表4，方差分析見表5～表8。

由直觀分析及方差分析可知，各因素對提取工藝的影響順序為A＞C＞B；其中乙醇濃度、提取時間對收膏率和柚皮苷提取率的影響較大，結合直觀分析結果，選擇A2、C2，乙醇用量對實驗結果影響不大。為了使操作簡單，適合大生產，選擇B1。故確定優選工藝為A2B1C2，即加6倍量70%乙醇提取3次，每次1 h。

2.4 驗證試驗按處方量稱取3份藥材，每份24 g，按優選的提取工藝進行3次驗證試驗，結果表明此工藝穩定可行。見表9。

3 結論

厚樸三物湯為復方制劑，成分復雜，采用單一評價指標篩選提取工藝條件并不全面，不能確保質量。研究［7］表明：厚樸中的厚樸酚及和厚樸酚、大黃中的蒽醌類成分、枳實中的柚皮苷均有抗炎作用，但大黃中的主要成分對光敏感，水解不穩定，且重復性低，故選擇厚樸酚、和厚樸酚、柚皮苷作為評價指標。本實驗所得最佳提取工藝穩定可行，為有效開發利用厚樸三物湯劑型提供了實驗依據。