《衛(wèi)生微生物學(xué)》實驗教學(xué)實踐與體會

邵軍麗　戴娟秀　郭蓮仙　凌曉璇　楊慧　沈嘉　余桂彩

摘要：本文主要從教學(xué)內(nèi)容、實驗準備、實驗環(huán)節(jié)安排、規(guī)范學(xué)生操作等幾個方面總結(jié)了《衛(wèi)生微生物學(xué)》實驗教學(xué)實踐中的體會，對進一步提高實驗教學(xué)質(zhì)量、培養(yǎng)符合社會需要的衛(wèi)生微生物檢驗人才具有重要意義。

關(guān)鍵詞：衛(wèi)生微生物學(xué)；實驗教學(xué)；衛(wèi)生檢驗

中圖分類號：G642.0 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2015）14-0247-02

《衛(wèi)生微生物學(xué)》是研究微生物與其環(huán)境（如大氣、水、土壤、食物等）相互作用的規(guī)律、對人類健康的影響以及應(yīng)對方略的科學(xué)。該課程作為預(yù)防醫(yī)學(xué)及衛(wèi)生檢驗專業(yè)本科教育教學(xué)的基本課程，在我國的形成、發(fā)展和日趨完善的過程中，一直是對生物病原學(xué)習(xí)、研究、應(yīng)用和疾病預(yù)防、控制必不可少的重要理論和實踐的重要課程之一[1]。由于《衛(wèi)生微生物學(xué)》是一門實踐性和應(yīng)用性非常強的學(xué)科，所以實驗課是其重要組成部分。通過實驗課可以培養(yǎng)學(xué)生嚴肅認真的科學(xué)態(tài)度和獨立自主的工作能力，為今后從事疾病預(yù)防控制、衛(wèi)生監(jiān)督與監(jiān)測、進出口商品檢驗和檢疫、環(huán)境安全與保護、生態(tài)平衡與防護等方面的工作奠定必要的基礎(chǔ)[2]。筆者根據(jù)多年的《衛(wèi)生微生物學(xué)》實驗教學(xué)實踐，將體會總結(jié)如下。

一、合理安排教學(xué)內(nèi)容，強化實驗技能

教學(xué)內(nèi)容主要是參考教材的實習(xí)指導(dǎo)，并結(jié)合學(xué)生知識背景、未來工作需求、實驗室條件來確定。幾經(jīng)修改完善，目前包括了培養(yǎng)基的配制及滅菌、環(huán)境中微生物的檢測、微生物的接種技術(shù)、細菌的簡單染色及觀察、革蘭氏染色及觀察、水中大腸菌群的測定、水中菌落總數(shù)的測定、變質(zhì)食品中蠟樣芽孢桿菌的檢測與鑒定、真菌形態(tài)觀察、滴露消毒效果的檢測等。內(nèi)容涉及了衛(wèi)生微生物檢驗的主要相關(guān)方面，強化了學(xué)生衛(wèi)生微生物基本實驗技能。

二、與實驗員密切溝通，做好充分準備

《衛(wèi)生微生物學(xué)》實驗涉及諸多器材，如移液管、平皿、接種環(huán)、接種針、涂布棒、玻璃棒、酒精燈、酒精棉球、鑷子、標簽紙、記號筆、顯微鏡、顯微鏡配套用品、試管、試管架、燒杯、錐形瓶、棉簽等，還有滅菌水、各種染液等，其數(shù)量遠遠超過一般的理化檢驗實驗，所以準備工作極其瑣碎、繁雜。在我們的實驗準備中，主要由帶教老師列出所需用品及數(shù)量，然后由實驗員負責(zé)實際的準備工作。由于實驗內(nèi)容的調(diào)整、新實驗的加入等原因會導(dǎo)致實驗器材或數(shù)量的變化，所以帶教老師與實驗員必須密切溝通以防遺漏或錯誤發(fā)生，影響實驗課的順利進行。

三、重視預(yù)實驗，保障實驗課順利開展

預(yù)實驗是在正式實驗之前進行的一次實驗。通過預(yù)實驗可以摸出最佳的實驗條件、操作方法，為正式實驗打下基礎(chǔ)。如所用教材上半固體培養(yǎng)基的瓊脂用量為0.3g/100ml，但預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)0.3g/100ml不能凝固，通過幾個不同濃度的比較最后選擇了0.8g/100ml。再如，蠟樣芽孢桿菌檢測的實驗需制備50%無菌蛋黃液，在預(yù)實驗中通過嘗試注射器直接刺入蛋殼抽取蛋黃、將整個雞蛋打在燒杯中再用注射器抽取蛋黃、先打破小塊蛋殼放掉大部分蛋清后打在燒杯中再用注射器抽取蛋黃等多種方式，最后證明第三種方法最能保證蛋黃液的數(shù)量及純度。

預(yù)實驗也是發(fā)現(xiàn)實驗用品是否存在問題的重要環(huán)節(jié)，為正式實驗排除障礙。如在蠟樣芽孢桿菌檢測的預(yù)實驗中發(fā)現(xiàn)-20℃放置一年的多粘菌素在10000IU/ml時對雜菌的抑制效果很差，將濃度增至20000IU/ml時效果明顯轉(zhuǎn)好，所以推測多年菌素不穩(wěn)定，放置一年后有效成分被破壞了。再如，有一次預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)瓊脂濃度高達2g/100ml仍不能使培養(yǎng)基凝固，推測瓊脂老化了，通過更換新的瓊脂粉解決了問題。

通過預(yù)實驗還可以檢驗實驗設(shè)計的合理性，避免由于設(shè)計不周影響實驗教學(xué)效果。如通過水中菌落總數(shù)檢測的預(yù)實驗，發(fā)現(xiàn)原定的水樣稀釋度10-1、10-2所培養(yǎng)出的菌落過多，計數(shù)困難且不準確，所以去掉這兩個稀釋度，增加10-5、10-6兩個稀釋度，最終采用的是10-3、10-4、10-5、10-6，學(xué)生實驗培養(yǎng)出的菌落數(shù)量合適有效。

四、合理安排實驗環(huán)節(jié)，充分有效利用時間

《衛(wèi)生微生物學(xué)》實驗基本都包括老師講授、培養(yǎng)基配制滅菌、樣品制備、接種、培養(yǎng)觀察等幾個環(huán)節(jié)。其中培養(yǎng)基配制滅菌環(huán)節(jié)的安排尤為重要，因為滅菌鍋升溫、滅菌、降溫大約需要1.5小時。如果讓學(xué)生在老師講授完才開始配制、滅菌，必然會使實驗時間遠遠超過規(guī)定學(xué)時，而且學(xué)生等待滅菌的時間很難處理。筆者教學(xué)實踐中是讓自發(fā)組成的興趣小組輪流在上課前1.5小時配制培養(yǎng)基并滅菌。上課后老師先講解實驗相關(guān)內(nèi)容，然后播放一些與將要進行的實驗相關(guān)的視頻，如倒平板、平板劃線、斜面劃線及穿刺、梯度稀釋、革蘭氏染色、顯微鏡使用等操作。視頻形象直觀，便于學(xué)生理解接受。然后把時間交給學(xué)生做準備工作，如樣品前處理、梯度稀釋、標記等。一般在準備工作進行時或完成后稍等片刻培養(yǎng)基剛好滅菌完畢，學(xué)生可以領(lǐng)取培養(yǎng)基并繼續(xù)實驗。這樣安排就可保證實驗內(nèi)容在規(guī)定的學(xué)時內(nèi)完成。在接種技術(shù)練習(xí)的實驗中，由于所用培養(yǎng)基為前一次實驗課所配制，所以實驗時間比較短。所以，我們還同時安排了實驗室內(nèi)微生物的檢測。所用培養(yǎng)基與接種技術(shù)練習(xí)所用培養(yǎng)基一樣，也已在前一次實驗時完成配制。充分有效利用時間可使學(xué)生在有限的時間里學(xué)到了更多知識。

五、現(xiàn)場指導(dǎo)、課后總結(jié)，規(guī)范學(xué)生操作

在學(xué)生進行實驗操作時，教師進行巡視，及時指出操作中存在的問題，或進行現(xiàn)場示范操作。在接近下課時，將所有小組操作中出現(xiàn)的問題總結(jié)給學(xué)生，使有者改之，無者加勉。在前期的實驗中存在最多的問題是無菌意識淡薄，如將移液管拿出后用手觸摸吸嘴、操作離酒精燈很遠、將平皿蓋子徹底打開并扣在桌面上、倒平板時手握錐形瓶口部等，此類問題主要是以提醒為主。還有倒板、涂板、畫線、移液管使用等操作不規(guī)范，此類問題主要以示范為主。前期還容易出現(xiàn)不標記或標記不當問題，應(yīng)及時指出。經(jīng)過前期的指導(dǎo)，在中后期的實驗中，學(xué)生的無菌意識越來越強，操作也越來越規(guī)范。endprint

六、重視實驗報告，培養(yǎng)學(xué)生正確的科學(xué)態(tài)度及分析問題、解決問題的能力

實驗報告是實驗課程的一項重要內(nèi)容，既可以體現(xiàn)出學(xué)生對實驗內(nèi)容的認識，也可以反映出教師教學(xué)效果如何。所以，筆者非常重視實驗報告，將報告書寫是否規(guī)范、結(jié)果記錄是否如實、討論是否認真作為判定實驗報告成績的重要依據(jù)，以此來培養(yǎng)學(xué)生正確的科學(xué)態(tài)度及分析問題、解決問題的能力。如測定水中菌落總數(shù)時，有一組出現(xiàn)10-4稀釋度培養(yǎng)出的菌落數(shù)多于10-3，某同學(xué)就針對這點，列出了：（1）10-3樣品接種時移液管操作不慎，漏掉一滴到實驗臺上；（2）向10-3樣品中傾注的培養(yǎng)基溫度偏高燙死了部分細菌；（3）10-3樣品未混勻即從其液面吸取1ml加入9ml滅菌水中，制備出10-4稀釋度樣品；（4）10-4稀釋度樣品制備時，移液管管嘴部分的掛液（10-3稀釋度）全部流入9ml滅菌水中；（5）向平皿中加入1ml10-4稀釋度樣品前移液管管嘴碰到了左手污染了細菌等多個可能的原因，其討論可謂細致、全面、合理，反映出該生對實驗進行了仔細觀察和認真思考。

七、不斷調(diào)整、改進，完善實驗內(nèi)容

國家標準是在全國范圍內(nèi)統(tǒng)一的技術(shù)要求，是進行衛(wèi)生檢測的重要依據(jù)，但一般都有有效年限，過了年限后，國家標準就要被修訂或重新制定。那么，相應(yīng)教學(xué)內(nèi)容也應(yīng)該及時更新。如食品中大腸菌群測定的國標有2003版、2008版和2010版。2009、2010年的實驗教學(xué)采用的是當時最新的GB/T 4789.3-2008，從2011年起至今采用的是現(xiàn)行的GB 4789.3-2010方法。根據(jù)國標調(diào)整內(nèi)容，有助于學(xué)生樹立法規(guī)、標準和規(guī)范意識。

糧食中真菌的檢測實驗中霉菌、酵母菌數(shù)的測定，除了樣品處理之外，其他操作和水樣中菌落總數(shù)的操作過程基本一致。考慮到菌落總數(shù)測定比真菌數(shù)檢測常用，就在開課的第三年去除了糧食中霉菌、酵母菌數(shù)的測定，保留霉菌標準片的觀察。并在已開設(shè)的變質(zhì)食品中蠟樣芽孢桿菌檢測的基礎(chǔ)上，增加蠟樣芽孢桿菌的鑒定實驗。由于蠟樣芽孢桿菌鑒定的實驗時間相對較短，就將保留的真菌標準片的觀察安排其中。

考慮到學(xué)生缺乏微生物實驗基礎(chǔ)，筆者經(jīng)過思考，并與其他任教老師商議，將前三個實驗設(shè)計為培養(yǎng)基配制及滅菌、接種技術(shù)練習(xí)、簡單染色與革蘭氏染色。第一個實驗配制的培養(yǎng)基供第二個實驗使用。第二個實驗所接種的是大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌三個標準菌株，供第三個實驗使用。如此將三個實驗聯(lián)系起來，學(xué)生既練習(xí)了微生物實驗的基本技術(shù)，也熟悉了微生物實驗的基本流程，有助于后面的實驗順利開展。

八、總結(jié)

本單位《衛(wèi)生微生物學(xué)》實驗課自2009年開課以來，實驗內(nèi)容及設(shè)計安排不斷改進，教學(xué)效果越來越好，為進一步的實驗教學(xué)改革奠定了基礎(chǔ)。

參考文獻：

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