采用薄層層析—硅膠柱層析法考察不同展開劑的層析效果

摘要：目的 研究探討采用薄層層析-硅膠柱層析法考察不同展開劑的層析效果。方法 以超臨界二氧化碳萃取得到的青蒿素粗品作為研究對象，分別采用薄層層析和硅膠柱層析的方法對不同展開劑的層析效果進行研究，選擇最合適的展開劑。結果 觀察五種展開劑下，青蒿素樣品溶液經薄層層析后的結果，可見展開劑為石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）的情況下，溶質的溶解性和選擇性都比較好，可以作為柱層析的洗脫劑。觀察兩種洗脫劑下的柱層析分離效果，可見選擇石油醚-乙酸乙酯（80：20）作為洗脫劑青蒿素的收率以及純度等均顯著高于正己烷-乙醚（80：20）為洗脫劑的情況。結論 在進行中藥材的提取純化過程中，通過薄層層析-硅膠柱層析的方法對不同展開劑的層析效果進行考察，獲得最優工藝條件，可以提高其純化程度。

關鍵詞：薄層層析；硅膠柱層析；展開劑；層析效果

中草藥是我國傳統醫學的瑰寶，在現代醫學的體系下，中草藥的有效成分提取、鑒別與純化是其發展的一個方向。在其提取過程中常常需要使用層析法來進行初步的鑒定，而隨著植化工作的不斷深入研究，選擇合適的展開劑是對藥物的研究發展有重要的意義。展開劑的選擇不恰當，不僅費時，還造成了藥物的浪費。利用薄層層析的方法研究不同展開劑的比移值，是物質鑒定的重要參數[1]。這個參數的確定不僅與被測物質的極性、固定相吸附劑的吸附能力有關，也與展開劑的極性、洗脫能力等有關[2]，本文以超臨界二氧化碳萃取得到的青蒿素粗品作為研究對象，在被測物、固定相吸附劑等都確定的條件下，研究獲得青蒿素純品應選擇的最佳展開劑。具體報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料 實驗對象：黃花蒿全草（經自然曬干后做粉碎、篩分處理）、青蒿素對照品（青蒿素的含量可達99.8%）。試劑：石油醚、乙酸乙酯、乙醚、正己烷、丙酮，均為分析純。

實驗材料和儀器：粗孔柱層析硅膠，粒度在100目～200目之間，為試劑級薄板、低壓層析玻璃柱、電子天平、旋轉蒸發器。

1.2方法 薄層層析：稱取硅膠并以蒸餾水調勻（避免氣泡的產生），將其均勻涂布在洗干凈的薄板上，并控制硅膠層的厚度在0.25mm左右。薄板在室溫下晾干之后，高溫活化、干燥后備用于備用。選擇100μl的移液器將樣品青蒿素溶液和青蒿素對照品溶液點在距離薄板下緣1cm處，要求點樣時對樣品濃度、點樣斑點大小2～3mm[3]、點與點之間的距離（一般為2cm左右）等進行嚴格控制。待薄板上的溶液發揮干燥之后將其置于不同展開劑飽和的層析瓶中（展開劑包括5種，分別包括石油醚-丙酮，比例為70：30；石油醚-乙醚，比例為60：40；石油醚-乙酸乙酯，比例為80：20，正己烷-乙醚，比例為80：20；正己烷-乙酸乙酯，比例為85：15），注意點樣點不能被展開劑所浸潤，蓋好蓋子靜置展開，直到展開液前沿線到達薄板的上緣后可以停止，取出薄板，均勻噴灑顯色劑[4]（1%的香草醛濃硫酸），室溫下將其晾干后，可見青蒿素斑點呈現鮮黃色，之后變成藍色。計算不同展開劑下的比移值（Rf值）。根據不同展開劑下青蒿素的比移值、組分斑點的相對距離等，選擇柱層析的洗脫劑。

柱層析：將硅膠進行烘干預處理，通過干法將其裝入低壓層析玻璃柱中，作為固定相，層析玻璃柱的規格為2.0cm×50cm，壓緊硅膠。使用電子天平稱取青蒿素的粗提物，用少量洗脫劑將其溶解，置入層析柱中，然后采用對應的洗脫劑對其進行柱層析，做好計時與取樣工作，分段收集樣品組分，并使用薄層層析法對柱層析中收集得到的組分進行定性。將含有不同分段中獲得的青蒿素的洗脫液合并，使用旋轉蒸發儀將其蒸干，測定青蒿素的含量，并對其純度、回收率等分別進行計算。觀察不同洗脫劑的效果。

2結果

觀察五種展開劑下，青蒿素樣品溶液經薄層層析后的結果，可見展開劑為石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）的情況下，溶質的溶解性和選擇性都比較好，可以作為柱層析的洗脫劑。見表1。

觀察石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）兩種洗脫劑下的柱層析分離效果，結果可見選擇石油醚-乙酸乙酯（80：20）作為洗脫劑青蒿素的收率以及純度等均顯著高于正己烷-乙醚（80：20）為洗脫劑的情況。見表2。

3討論

在進行天然藥物提取分離和純化的過程中，固定相的選擇、層析中的進樣量、洗脫劑的極性、洗脫劑的流速等都會對最終結果造成影響[5]。本文主要研究的是洗脫劑（展開劑）對其的影響。考慮固定相、進樣量、流速等條件均固定的情況下，先通過薄層層析對不同展開劑的展開效果進行考察，觀察不同展開劑對青蒿素樣品的溶解性，選擇性等，既要保證其能有效溶解青蒿素，還要求薄板上青蒿素的斑點與其他斑點具有良好的區分度，避免溶液中其他組分對其的影響和干擾。石油醚-乙酸乙酯（80：20）和正己烷-乙醚（80：20）這兩種展開劑青蒿素溶解性好，比移值適中，且青蒿素斑點上方最近斑點和下方最近斑點的比移值與青蒿素斑點之間可以有效區分，將其作為柱層析洗脫劑考察青蒿素的回收率和純度，再對兩種溶劑進行比較，最終確定石油醚-乙酸乙酯（80：20）作為洗脫劑的良好效果。

參考文獻：

[1]胡淼，錢國平，蘇寶根，等.硅膠柱層析純化青蒿素[J].華西藥學雜志，2005，20（4）：283-285.

[2]劉碗暉，嚴銘銘，趙大慶.硅膠薄層層析展開劑構成的變化對不同極性成分值的影響[J].長春中醫藥大學學報，2007，23（3）：20-22.

[3]劉俊梅，胡耀輝.薄層層析在多元醇檢測中的應用 [J].食品苦科技，2007，27（6）：224-225.

[4]劉紀紅，嚴守雷.蓮藕多酚薄層層析分離鑒定研究[J].安徽農業科學，2008，36（15）：6308-6309.

[5]徐偉，范志誠，馬思慧.柱層析分離紅曲色素及其組分的抑菌性對比[J].釀酒，2010，37（6）：50-52.編輯/王海靜