骨刺平片質量標準的研究

摘要：目的 制定骨刺平片的質量控制標準。方法 采用TLC法鑒別兩面針、獨活、威靈仙；用HPLC法測定原兒茶酸的含量。結果 TLC色譜中可明顯鑒別兩面針、獨活、威靈仙。原兒茶酸在0.05331～1.3328μg范圍內呈良好的線性關系，平均回收率為99.7%。結論 所建立的方法可準確、快速的對骨刺平片進行定性、定量檢測，可用于該制劑的質量控制。

關鍵詞：骨刺平片；原兒茶酸；質量標準；TLC；HPLC

骨刺平片由兩面針、獨活、威靈仙等12味中藥組成，具補精壯髓，壯筋健骨，通絡止痛等功效。用于骨質增生（包括肥大性腰椎炎，胸椎炎，頸椎綜合癥，四肢骨節增生）。該藥品質量標準收載于《衛生部藥品標準中藥成方制劑》第11冊，原標準中僅有2個化學鑒別及通則項下的檢測項目，難以控制該藥品質量，曾有文獻對其處方中雞血藤、骨碎補、熟地黃進行TLC法鑒別[1]及骨碎補中柚皮苷含量的研究[2]，本文參照有關文獻[3-6]，采用TLC法鑒別兩面針、獨活、威靈仙。用HPLC法測定原兒茶酸的含量，為有效控制該制劑的質量提供了依據。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 HPLC色譜儀 ，島津G135十萬分之一天平；水為I級純化水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。硅膠G（青島海浪硅膠干燥劑廠）；兩面針對照藥材（121014-200302）；氯化兩面針堿對照品（110848-200502）；獨活對照藥材（120940-200507）；威靈仙對照藥材（121189-200101）；齊墩果酸對照品（110709-200505）含量94.9%；原兒茶酸對照品（110809-200503）含量99.9%，均購自中國藥品生物制品檢定所。骨刺平片（廣東新峰藥業股份有限公司，規格100片/瓶，批號分別為140203；140509；130804）；陰性藥材均經鑒定并按原標準的制法制成陰性對照樣品。

2 試驗方法與結果

2.1TLC鑒別

2.1.1獨活 取本品20片，去包衣，研細，加乙醚15ml，超聲處理15min，濾過，濾液濃縮干，殘渣加氯仿5ml溶解作為樣品溶液；另取獨活對照藥材及缺獨活的陰性樣品同法制成對照藥材和陰性對照樣品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各10μl，點于同一硅膠G預制板上，石油醚（30～60℃）-乙酸乙酯（1：1）為展開劑，展開，晾干，紫外光燈（365nm）下檢視。樣品色譜圖中，在與對照藥材色譜相對應位置上，顯相同斑點，陰性樣品溶液在相對應的位置上未顯相同斑點，色譜圖見圖1。

2.1.2兩面針 取本品20片，去糖衣，研碎，加氨水0.5ml濕潤，加氯仿20ml，超聲處理30min，過濾，水浴上蒸干濾液，加甲醇1ml溶解作為樣品溶液；另取兩面針對照藥材及缺兩面針的陰性樣品按上述方法制成對照藥材和陰性對照樣品溶液；另取氯化兩面針堿對照品加乙醇制成每1ml含1mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述4種溶液各5μl，點于同一硅膠G預制板上，以甲苯～乙酸乙酯～甲醇～濃氨試液（25：2：2：0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇液，在100℃加熱至斑點清晰，置紫外光燈（365nm）下檢視。樣品色譜圖中，在與對照藥材和對照品色譜相應位置上，顯相同斑點，陰性樣品溶液在相應的位置上未顯相同斑點，色譜圖見圖2。

2.1.3威靈仙[7] 取本品20片，去包衣，研細，加乙醇50ml，加熱回流2h，濾過，濾液濃縮至20ml，加鹽酸3ml，加熱回流1h，加水10ml，放冷，加石油醚（60～90℃）25ml，振搖提取，石油醚蒸干，加甲醇5ml溶解，作為樣品溶液；另取威靈仙對照藥材及缺威靈仙樣品同法制成對照藥材和陰性對照樣品溶液；另取齊墩果酸對照品3mg加甲醇3ml溶解作為對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述4種溶液各5μl，點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯～乙酸乙酯～甲酸（10：2：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品溶液在相應的位置上未顯相同顏色的斑點，色譜圖見圖3。

2.2含量測定

2.2.1色譜條件 色譜柱：Gemini C18 110A（4.6mm×250mm，5μm），流動相：乙腈-1%冰醋酸溶液（5：95）；波長：260nm，取缺狗脊外的陰性對照樣品同法制成陰性對照溶液，依法測定，陰性樣品無干擾，色譜圖見圖4。

2.2.2 溶液的制備 ①對照品溶液，取減壓干燥至恒重的原兒茶酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含原兒茶酸53.31μg/ml的溶液；②樣品溶液，取本品20片，去糖衣，研細，取1g 精密稱定，置25ml容量瓶中，精密加甲醇10ml，稱定重量，超聲60min，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，即得。

2.2.3線性關系的考察 取上述原兒茶酸對照溶液，分別進樣1、5、10、15、20、25μl，按上述條件測定，以進樣量（μg）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，計算回歸方程。回歸方程：Y=6615.6X+3.0294，r=0.9997。原兒茶酸在0.05331～1.3328μg范圍內呈良好的線性關系。

2.2.4精密度試驗 取上述原兒茶酸對照溶液10.00μl，連續進樣6次，原兒茶酸對照溶液峰面積RSD分別為0.77%。

2.2.5穩定性試驗 取供試品溶液（140203）10.00μl，在0、2、6、12、18、24 h分別進樣，原兒茶酸對照溶液峰面積RSD為1.1%。說明供試品溶液在24h內穩定。

2.2.6重現性試驗 精密稱取同一批樣品（140203）6份，各約1g，按2.2.2項下的方法制備供試品溶液，測定，原兒茶酸平均含量為0.1216mg/g，RSD分別為0.7%。

2.2.7加樣回收試驗 精密稱取已知含量的同一批樣品（140203）6份約0.5g，加入上述原兒茶酸對照品溶液1.20ml，按2.2.2項下的方法制備供試溶液，測定，計算回收率，原兒茶酸對照溶液回收率為99.7%，RSD為1.7%。

2.2.8樣品測定 取3批樣品，按2.2.2項下的方法制備供試品溶液，測定，結果分別為（批號140203、140509、130804，平均片重分別為：0.2337g、0.2379g、0.2469g）0.1216mg/g、0.1331mg/g、0.0784mg/g。

3 討論

3.1流動相的選擇 試驗比較了甲醇～磷酸，甲酸～冰醋酸，乙腈～磷酸，乙腈～冰醋酸的，以乙腈-1%冰醋酸[8]溶液（5：95）分離最好且基線噪音干擾最小。

3.2提取溶劑選擇 試驗表明，用甲醇或50%甲醇超聲處理60min，均能提取比較完全，但以甲醇提取的的溶液對主成分的干擾較小，不需要純化處理。故選擇用甲醇超聲60min。

3.3含量方法建立原因 試驗結果表明不同批次樣品中，原兒茶酸的含量相差有點大，有必要建立原兒茶酸的含量測定方法和標準來控制藥品的質量。

3.4定量成分的選擇 試驗過程中，對原兒茶醛的含量也進行了考察，但原兒茶醛的含量過低，有的樣品檢測不出，所以未將其作為需控制的有效成分。

3.5波長的選擇 經紫外掃描，原兒茶酸在260nm處有最大吸收峰，且干擾峰較少，峰形良好，故采用260nm對原兒茶酸的含量進行準確檢測。

3.6含量限度的確定 2010年版中國藥典規定狗脊藥材含原兒茶酸應不得少于0.020%、《衛生部藥品標準中藥成方制劑》第11冊中骨刺平片原質量標準的制法、中藥制劑工藝10%的浸膏收率計算，含量限度骨刺平片含狗脊以原兒茶酸（C7H6O4）計，應不得少于1.00mg/g。

3.7方法的優勢 本文建立的薄層色譜方法簡便且專屬性強，建立了HPLC法測定原兒茶酸含量方法，該法簡便快速，結果準確，重現性好，可作為該制劑的質量控制方法。

參考文獻：

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編輯/馮焱