鮑曼不動桿菌耐藥性及其耐藥基因分析

摘要：目的 探討我院鮑曼不動桿菌對常用抗菌藥物的耐藥性及耐藥基因情況。方法 對我院2012年11月～2013年5月臨床痰標(biāo)本分離到的40株鮑曼不動桿菌，使用全自動鑒定及藥敏系統(tǒng)進行鑒定和藥敏試驗。用PCR技術(shù)檢測從ICU病房分離的26株鮑曼不動桿菌耐藥基因OXA-23、OXA-24、OXA-58、IMP、VIM、SIM、NDM-1、OXA-51。結(jié)果 40株鮑曼不動桿菌對頭孢哌酮/舒巴坦、多粘菌素B、米諾環(huán)素有較高敏感率，對亞胺培南和美羅培南耐藥率達50%，對其余10種抗生素耐藥率均超過70%。ICU病房分離的26株鮑曼不動桿菌均檢出OXA-51，19株檢出OXA-23。結(jié)論 鮑曼不動桿菌耐藥性強，特別是ICU病房的分離株。OXA-23型基因是我院ICU鮑曼不動桿菌對碳氫酶烯類抗菌藥物耐藥的主要原因。

關(guān)鍵詞：鮑曼不動桿菌；耐藥性；耐藥基因

鮑曼不動桿菌為醫(yī)院獲得性感染的主要病原菌之一，在我國其臨床分離率位居革蘭陰性非發(fā)酵菌的首位[1]。它常常引起院內(nèi)獲得性肺部感染、尿路感染、皮膚及軟組織感染和血流感染等[2]。本文對我院分離出的鮑曼不動桿菌耐藥性進行統(tǒng)計分析，并對ICU分離株進行耐藥基因檢測。

1資料與方法

1.1一般資料 2012年11月～2013年5月我院臨床痰標(biāo)本分離出的鮑曼不動桿菌40株。

1.2儀器 全自動細菌鑒定藥敏儀，珠海迪爾公司；PTC-200 PCR擴增儀及Gel Doc XR+凝膠成像分析系統(tǒng)，美國Bio-Rad公司；SAV-570電泳儀，美國Savant公司。

1.3試劑 全自動細菌鑒定藥敏試劑，珠海迪爾公司；PCR反應(yīng)體系和DNA maker DM2000，北京康為世紀(jì)生物科技公司；核酸染料Goldview，賽百盛公司；MO Bio UltraClean微生物DNA提取試劑盒，法國梅里埃公司。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853，購自衛(wèi)生部臨檢中心。

1.4細菌鑒定及藥敏試驗 用全自動細菌鑒定藥敏儀進行細菌鑒定及藥敏試驗。藥敏結(jié)果判斷和解釋參照CLSI2012年抗菌藥物敏感試驗執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 PCR檢測耐藥基因 從Gen Bank中獲得鮑曼不動桿菌基因OXA-23、OXA-24、OXA-58、OXA-51、IMP、VIM、SIM和NDM-1，參照文獻[3]設(shè)計引物序列，見表1。由上海英駿公司合成。用煮沸法提取模板DNA。各靶基因PCR擴增體系為20ul，包括2xTaq MasterMix 10ul，ddH2O6ul，10umol/L上、下游引物各1ul，模板2ul。擴增參數(shù)：94℃預(yù)變性3min。94℃變性1min，IMP、VIM退火溫度55℃，SIM、NDM-1、OXA-51退火溫度58℃，OXA-23退火溫度60℃，OXA-24退火溫度45℃，OXA-58退火溫度53℃，退火時間均為30s，72℃延伸30s，30個循環(huán)；72℃6min。擴增產(chǎn)物行10g/L瓊脂糖凝膠電泳，凝膠成像分析系統(tǒng)成像。

2結(jié)果

2.1 40株鮑曼不動桿菌在不同科室的分布 ICU病房占65%，神經(jīng)外科占15%，呼吸內(nèi)科占7.5%，心血管內(nèi)科占5%，內(nèi)分泌科占5%，兒科占2.5%。

2.2 ICU病區(qū)26株鮑曼不動桿菌耐藥基因檢測結(jié)果 26株均檢出OXA-51，19株檢出OXA-23，OXA-24、OXA-58、IMP、VIM、SIM和NDM-1耐藥基因均未檢出。

2.3 40株鮑曼不動桿菌對15種抗菌藥物的藥敏試驗結(jié)果 見表2。

3討論

本實驗結(jié)果表明，鮑曼不動桿菌呈現(xiàn)高度多重耐藥，特別是ICU分離株。鮑曼不動桿菌對頭孢類耐藥率高達92%，對喹諾酮和氨基糖甙類耐藥率達80%，對碳氫酶烯類耐藥率50%，與2013年中國CHINT細菌耐藥性監(jiān)測公布的數(shù)據(jù)接近[4]。其原因主要為：①細菌耐藥性基因自發(fā)性突變；②抗菌藥物選擇造成的環(huán)境壓力，使耐藥基因不斷的遺傳和傳播；③手衛(wèi)生的執(zhí)行率低，導(dǎo)致耐藥基因的相互傳播。多重耐藥鮑曼不動桿菌臨床感染科室主要為ICU、神經(jīng)外科和呼吸內(nèi)科，主要是因為這些科室患者病情較重，且大部分有侵襲性插管、住院時間長、長期臥床、長期使用激素和免疫抑制劑等使患者抵抗力下降，在一定程度上造成多重耐藥鮑曼不動桿菌的定植與傳播。長期大劑量使用抗生素也誘導(dǎo)了耐藥菌的產(chǎn)生。鮑曼不動桿菌的耐藥情況與抗菌藥物的使用率、總使用強度、β內(nèi)酰胺類藥物和喹諾酮類藥物的使用強度呈正相關(guān)[5]。

從ICU病房分離到的26株藥鮑曼不動桿菌均檢出攜帶OX-51基因，19株檢出重要耐藥基因OXA-23。OXA-51基因高表達與ISAbal有關(guān)，導(dǎo)致對碳青霉烯類產(chǎn)生耐藥[6]。重視院內(nèi)感染的監(jiān)測，加強環(huán)境消毒，減少接觸性傳播，分組隔離已感染患者是控制多重耐藥菌的有效措施。

參考文獻：

[1]胡付品，朱德妹，汪復(fù)，等.2013年中國CHINET細菌耐藥性監(jiān)測[J].中國感染與化療雜志。2014，14（5）：365-374.

[2]吳麗麗，王賀永，鄭瑞娟，等.多重耐藥鮑曼不動桿菌臨床分布與耐藥性分析[J].河北醫(yī)藥。2014，36（19）：3006-3007.

[3]鐘敏，黃文芳，劉華，等.多重耐藥鮑曼不動桿菌碳青霉烯耐藥基因和同源性分析[J].臨床檢驗雜志。2012，30（5）：367-370.

[4]胡付品，朱德妹，汪復(fù)，等.2013年中國CHINET細菌耐藥性監(jiān)測[J].中國感染與化療雜志。2014，14（5）：365-374.

[5]許弄章，金忠華.鮑曼不動桿菌耐藥率與抗菌藥物使用情況的相關(guān)性分析[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2013，16（10）：3391-3393.

[6]張瓊.泛耐藥鮑曼不動桿菌耐藥機制研究進展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9（8）：13-14.

編輯/許言