EB病毒DNA載量與兒童肝腎損害的研究*

李 迪，李 艷，彭 銳(武漢大學人民醫院檢驗醫學中心，武漢 430060)

EB病毒(epstein-barr virus，EBV)，又稱人類皰疹病毒4型(HHV-4)，主要經呼吸道傳播。在兒童中，被EB病毒感染的患兒起病多隱匿，癥狀輕，大多預后良好。但EB病毒也可引起肝、腎等各組織器官的損害，并產生一系列的臨床表現，特別是當肝、腎功能明顯異常時，患兒常以肝病、腎病前來就診，這不僅會增加臨床醫生對疾病診斷的難度和誤診率，也會耽誤患兒的治療，影響預后[1]。本文旨在對EB病毒相關性肝、腎損害進行研究，探究EB病毒的DNA載量與肝腎損害的關系，協助臨床做出更準確的診斷。

1 材料與方法

1.1 研究對象 在2016年4月～7月收入武漢大學人民醫院的患兒中，收集EB病毒DNA載量>5.00E+3的患兒147例，其中男性87例，女性60例，年齡1～12歲，平均年齡3.64±2.45。健康對照組80例，男性49例，女性31例，年齡1～12歲，平均年齡3.59±2.86歲。患者組與對照組之間性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)。

1.1.1 納入標準：①經PCR檢測后DNA載量>5.00E+3者；②年齡1月～12歲。

1.1.2 排除標準：①細菌、病毒、支原體等其他病原體感染者；②近期服用過有損于肝、腎功能藥物者；③遺傳代謝性疾病；④相關的先天性疾病，如膽道閉鎖；⑤其他肝、腎疾病。

1.2 試劑與儀器 患兒入院后抽取5 ml靜脈血，置于EDTA抗凝管內，室溫下平衡30 min后3 000 r/min離心10 min，取上清液。使用美國ABI 9700型PCR儀及其配套試劑檢測血清中EB病毒DNA載量。采用西門子advia2400全自動生化分析儀及配套試劑檢測血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、總膽紅素(TBil)、尿素(BUN)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)水平。

1.3 方法 按DNA載量的高低將患兒分為低載量組(5.00E+3～5.00E+4)80例，中載量組(5.00E+4～5.00E+5)41例，高載量組(>5.00E+5)26例；按年齡將EB病毒陽性(>5.00E+3為陽性)患兒分為低年齡組(1月～4歲)80例、中年齡組(5～8歲)41例、大年齡組(9～12歲)26例，各年齡組性別差異無統計學意義(P=0.509)。按性別將EB病毒陽性患兒分為男患兒組87例、女患兒組60例，兩組間年齡差異無統計學意義(P=0.191)。以ALT>40 U/L和(或)AST>35 U/L為界判為肝功能異常，將EB病毒陽性患兒分為肝功能正常組99例和肝功能異常組48例；以β2-微球蛋白>2.5 μg/L為界，將EB病毒陽性患兒分為腎功能正常組133例和腎功能異常組14例。

2 結果

2.1 常規生化結果的比較 Mann-WhitneyU檢驗比較患者組和對照組的ALB，GLB，BUN，Cr，UA，結果見表1。

表1 各項生化指標的對比

2.2 EB病毒DNA載量與肝腎功能的關系 Pearson卡方檢驗比較低載量組、中載量組、高載量組肝腎損害率，結果見表2。

表2 EB病毒DNA載量與肝腎功能損傷的關系

注：低、中、高載量組，肝損害率分別為17.50%，43.90%，61.54，卡方值為20.58，P=0.000；腎損害率分別為3.75%，12.2%，37.5%，卡方值為8.38，P=0.015。

2.3 不同年齡組DNA載量的比較 Man-WhitneyU檢驗比較得出，低年齡組DNA載量(4.93±0.75)高于中年齡組(4.60±0.83)和大年齡組(4.63±0.84)，差異具有統計學意義(Z=-2.73，P=0.006)。中年齡組與大年齡組差異無統計學意義(Z=-0.27，P=0.788)。

2.4 不同性別組的DNA載量比較 兩獨立樣本t檢驗比較顯示，女患兒組DNA載量對數(4.55±0.62)低于男患兒組DNA載量對數(4.93±0.86)，差異具有統計學意義(Z=-2.42，P=0.015)。

3 討論

EB病毒是一種以人為感染對象的皰疹病毒，故稱之為人類皰疹病毒4型(HHV-4)，也是首個被報道與腫瘤發生有關的病毒，世界范圍內約95%的人血清學陽性[2]。EBV-DNA定量是診斷EB病毒感染較好的方法[3]。臨床上，首次感染EB病毒的患兒常隱匿起病，多為自限性；少部分患兒EB病毒可持續存在并發展為慢性活動性EB病毒感染，臨床上多表現為持續或反復的傳染性單核細胞增多癥。據報道，在慢性活動性EB病毒感染中，EB病毒可通過各種機制刺激宿主細胞，使CD4+/CD8+比值下降，并產生細胞毒性T淋巴細胞反應而損害肝臟，長期的肝細胞破壞與再生成為肝癌的病理基礎。曲熙波等[4]發現肝臟是EB病毒的主要靶器官之一，與其他病毒引起的肝炎相比，其臨床表現雖相似，但更為嚴重。EB病毒相關腎損害并不少見，在EB病毒感染的患兒中發病率約10%，病理類型以間質性腎炎多見，某些特定類型的腎損害也與其有關，如膜增生性腎小球腎炎。Joanne等[5]利用原位PCR，在EB病毒相關腎損害患兒的近端小管上皮細胞中檢測到EB病毒DNA，并利用免疫組化檢測到EB病毒CD21受體。張曙冬等[6]發現EB病毒感染肝損害及嚴重程度與外周血中T細胞亞群有一定相關性。

本文研究的EB病毒感染的147例患兒中，肝損害48例，占32.65%；腎損害14例，占9.52%。肝、腎損害的發生率與EB病毒DNA載量有關，并隨著DNA載量的升高而升高。結合已有的研究推測可能與Th1/Th2比例失衡及細胞毒性T淋巴細胞過度激活有關。提示高EB病毒DNA載量陽性的患兒，有發生肝腎損害的風險；而低DNA載量時若有肝損害應首先考慮由其他因素造成，這對于疾病的診斷具有指導意義。EB病毒DNA載量隨著年齡的升高而降低，差異具有統計學意義，表明隨著機體的發育和免疫系統的不斷完善，其抵抗外來病原體的能力明顯增強。而4～8歲組與9～12歲組相比DNA載量差異無統計學意義，提示一次感染可獲得較強免疫力。不同性別對EB病毒的抵抗力不同，男患兒感染EB病毒時其DNA載量比女患兒高，差異具有統計學意義。提示男性兒童對EB病毒的抵抗力更低，病毒復制更活躍，該原因有待進一步研究。與對照組相比，患兒的清蛋白顯著下降，這可能與EB病毒相關肝損害和(或)發病后患兒飲食不規律有關；而尿素、肌酐、尿酸與對照組相比差異無統計學意義，可能與腎的代償有關，側面反映出β2-微球蛋白是反映腎功能的靈敏指標。個別患兒尿素、肌酐、β2-微球蛋白正常，而尿酸輕度升高，可能與高嘌呤飲食有關。

小兒EB病毒感染，癥狀缺乏特異性，給疾病的診斷帶來很大難度。患兒感染EB病毒可引起肝炎，甚至暴發性肝衰竭；也可引起間質性腎炎、IgA腎病、腎病綜合征，甚至參與了腎衰竭的進展。臨床上應高度重視EB病毒相關性肝腎損害，特別是對病因未知的肝或(和)腎功能異常，診斷時應將EB病毒感染納入考慮對象，避免漏診、誤診。

[1] 李鑫靜，曲利娟，鄭雄偉，等．慢性活動性EB病毒性肝炎的臨床病理特征[J]．世界華人消化雜志，2013，21(23)：2325-2330．

Li XJ，Qu LJ，Zheng XW，et al．Clinicopathologic features of chronic active Epstein-Barr virus hepatitis[J]．World Chinese Journal of Digestology，2013，21(23)：2325-2330．

[2] Ali A，Al-Shraim M，Al-Hakami AM，et al．Epstein-Barr virus：clinical and epidemiological revisits and genetic basis of oncogenesis[J]．The Open Virology Journal，2015，9(1)：7-28．

[3] 肖 波，毛金娥，陳萬新．外周血細胞形態學檢查與EBV-DNA定量分析在小兒傳染性單核細胞增多癥早期診斷中的價值[J]．現代檢驗醫學雜志，2016，31(3)：114-116，120．

Xiao B，Mao JE，Chen WX．Value of detecting peripheral blood cell morphology combined with EBV-DNA quantity in the initial diagnosis for infants patients with infectious mononucleosis[J]．J Mod Lab Med，2016，31(3)：114-116，120．

[4] 曲熙波，王永梅．EB病毒感染所致肝損傷105例臨床特征分析[J]．肝臟，2015，20(5)：423-424．

Qu XB，Wang YM．Clinical analysis of 105 cases of liver damage caused by EB virus[J]．Chinese Hepatology，2015，20(5)：423-424．

[5] Becker JL，Miller F，Nuovo GJ，et al．Epstein-Barr virus infection of renal proximal tubule cells：possible role in chronic interstitial nephritis[J]．J Clin Invest，1999，104(12)：1673-1681．

[6] 張曙冬，張 歐，楊 潔，等．兒童EB病毒感染肝損傷與外周血淋巴細胞亞群的相關性[J]．世界臨床醫學，2016，10(10)：153．

Zhang SD，Zhang O，Yang J，et al．Relationship between liver damage and lymphocyte subsets in peripheral blood of children with EB virus infection[J]．The World Clinical Medicine，2016，10(10)：153．