淺談臨床定量PCR實驗室的質量控制

王秀麗 徐振興

（廈門中醫院檢驗科，福建 廈門 361009）

淺談臨床定量PCR實驗室的質量控制

王秀麗 徐振興

（廈門中醫院檢驗科，福建 廈門 361009）

定量PCR；質量控制

PCR聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction）自問世以來以其高靈敏性、高特異性、高效性在某些疾病如感染性疾病、腫瘤、法醫學、及科學研究等領域得到了廣泛的應用。PCR的高敏感性和高特異性已經體現了其臨床診療價值，正因如此，對其檢測中的錯誤也會有放大作用，往往引起嚴重的后果。在醫患矛盾較為突出的今天，做好PCR檢驗質量控制，發出正確的PCR檢測結果尤為重要。本文對實踐工作中的心得和體會進行了總結，對PCR檢驗的各個環節進行質量控制，探討PCR檢驗分析中的質量控制方法及實驗效果。

1 分析前的質量控制

1.1 實驗室環境：嚴格遵守“各區獨立、注意風向”，禁止使用中央空調。

1.2 儀器設備的管理：儀器設備的正確使用、維護和校準是保證PCR結果準確的前提，對實驗室中的儀器設備如擴增儀、離心機、加樣器、真空泵、生物安全柜等建立一套規范化、標準的操作程序。

1.3 試劑的貯存與比對：試劑一般貯存在-20 ℃以下。通過肉眼觀察試劑盒應完整無破損，標識清楚——廠家名稱、批準文號、生產日期、有效期等；在更換不同批號的試劑時，本實驗室還建立了不同批次試劑間的比對程序；試劑現用現配，避免提前配好。

1.4 檢驗者素質：PCR都是微量操作，要想獲得穩定可靠的檢測結果，操作人員就需要一定的專業技術知識與經驗，要盡可 能做到知其然又知其所以然。從實際工作上來看，不同的操作者所獲得的測定結果往往差異也很大，因此，人員培訓相當重要，尤其是內部針對性的培訓[1]。

1.5 標本的采集、運送、接收及編號：標本采集、運送、接收及編號是準確發放報告的基礎。有些患者特別是肝病患者很多都需要長期治療和定期復查，經濟負擔非常重，有時會出現冒用醫保卡的現象，這就需要相關人員嚴格執行對各類標本的查對。

2 分析中的質量控制

2.1 PCR儀器的保養和校正：PCR儀是PCR擴增的關鍵儀器，儀器的保養是PCR儀能正常工作的前提。實驗室建立了標準化操作程序，本實驗室采用的是羅氏LightCycler480實時熒光PCR儀，嚴格按照儀器的說明書及儀器的標準操作程序進行日、周、月保養。儀器是否處于一個良好的工作狀態是檢驗結果正確與否的重要保障。

2.2 主要污染來源與防污染措施：做好PCR最重要的工作就是防治污染。實驗室中主要的污染來源：①實驗室樣本中含有的待測微生物；②PCR擴增產物引起的殘留污染。PCR擴增引起擴增產物累積增加，如果不采取有效的防污措施，在很短的時間內累積的氣溶膠化的擴增產物就會污染實驗室中的耗材、試劑和儀器設備等，造成嚴重的后果。污染重在預防，為了避免實驗室污染，獲得準確、可靠的檢測結果，實驗室應制定一套具體可行的污染防護措施并嚴格執行。防污措施：①嚴格實驗室分區及嚴格遵守實驗室工作制度，不同分區的物品如加樣器、筆等不得混用，建立外來人員登記程序；②在每次實驗后可使用10%次氯酸鈉清洗實驗室包括工作臺面、加樣器、離心機等，然后再用70%乙醇或清水洗去殘留次氯酸鈉。本實驗室每次實驗結束后都將實驗操作板放入10%次氯酸鈉溶液中浸泡1 h，而且盛有次氯酸鈉的容器還要定期更換，本實驗室曾經有段時間陰性對照曲線總是有抬頭，經多方查找原因，確定是沒有及時更換浸泡實驗操作板的容器引起的；③紫外線照射。

2.3 室內質控：室內質控可以監測與控制實驗室工作的精密度，提高常規檢驗工作中批內、批間樣本檢驗結果的一致性，是用以確定檢驗結果是否可靠、可否發出的一項重要工作[2]。儀器、試劑、耗材、核酸提取操作等因素都會影響質控品的檢測[3]。在每次實驗過程中按照本實驗室的室內質控要求測定陰性質控，高、低值2種濃度的質控血清。質控樣本的擺放順序在每一次擴增檢驗時都相應順延，以保證核酸提取和擴增中所有檢測結果都符合質控要求。

2.4 室間質控：室間質量控制是實驗室質量控制體系中重要組成部分，是保證患者的檢驗結果及其報告的準確性和可靠性，以及各個實驗室間檢測結果的可比性的重要手段。隨著PCR技術的發展與普及，PCR檢測的室間質控越來越重要。本實驗室每年都積極參加省臨檢中心和衛生部的室間質評，并對反饋回來的室間質評成績進行認真分析和總結，及時改正存在的問題。

2.5 利用患者就診資料進行質控比對：檢測結果與臨床情況的相關性如何，需要掌握患者的主要臨床情況，包括患者的病情與變化情況；檢測項目和其他項目的相關性，如大三陽患者在未經抗病毒治療下DNA很少陰性；前后檢測結果的對比，將本次檢測結果與上幾次檢測結果進行比較等，都是可行的方法[4]。這些可以通過醫師或者患者的溝通來做到，或者通過LIS檢驗系統的“報告查詢”功能來實現，從而保證實驗結果的正確發出。

3 分析后的質控

這一階段質量保證的主要工作如下：檢驗結果的正確發出，咨詢服務，以及對檢驗樣品的保存及處理[5]。

3.1 報告單的及時發出：檢驗報告單要求及時、準確、完整地發出，保證醫師能夠及時的獲得檢驗結果。同時需要有報告簽發和審核程序。檢驗者還應切記保護患者隱私。

3.2 咨詢服務：實驗室應主動的努力做好咨詢服務這項工作，在解釋檢驗結果時應耐心、細致、有理有據。

3.3 檢驗樣品的保存和處理：每天實驗結束后，每份樣本吸取0.5mL血清到離心管中，放入2～8 ℃冰箱內保存7 d。后由衛生人員集中處理。

[1] 李金明.實時熒光PCR技術[M].北京:人民軍醫出版社,2012:143.

[2] 李金明.感染性疾病免疫測定的室內質量控制[J].醫學檢驗與臨床,2007,18(1):3-6.

[3] 陳松.法醫DNA實驗室的DNA污染和防范[J].刑事技術,2007(3): 16-20.

[4] 徐忠玉.發光免疫分析的質量控制[J].檢驗醫學與臨床,2010,7 (3):280-281.

[5] 葉應撫,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.南京:東南大學出版社,2006:113.

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