脾虛病證結合動物模型研究進展*

劉玉　陳慧（.天津中醫藥大學，天津　30093；2.天津中醫藥大學第二附屬醫院，天津　30050）

?

脾虛病證結合動物模型研究進展*

劉玉1陳慧2△
（1.天津中醫藥大學，天津300193；2.天津中醫藥大學第二附屬醫院，天津300150）

【摘要】中醫學強調辨證論治，臨床疾病均是病證統一，“證”和“病”相結合能夠更好的探索臨床診治規律，病證結合的動物模型更能體現中醫科研的特點，病證結合動物模型的研究受到越來越廣泛的關注。筆者以脾虛證動物模型為研究對象，概述了近年來不同脾虛類型的病證結合動物模型的制備方法并且進行歸納、分析和總結，以期對今后的研究有所啟迪。

【關鍵詞】脾虛病證結合動物模型綜述

1　脾氣虛病證結合模型

1.1病因造模1）單獨使用證候造模因素。吳慧等［1］采用過食肥甘厚膩的單一因素方法造模，每天喂飼大鼠自制的高蛋白、高熱量飼料，連續7 d，造模后動物食量、便量明顯減少，糞便質細、個小，脂肪球顯著增多，且腹部脹滿，腹圍增大，具有顯著性差異，證實脾虛食積模型成立。禹玉洪等［2］模擬嬰幼兒斷奶前后輔食添加不當、膳食搭配不合理、挑食偏食的狀態，使用特制飼料，連續4周，發現幼齡大鼠食量、體質量、胃液量均顯著降低，血漿膽囊收縮素八肽（CCK-8）含量明顯增高，生長緩慢，且無腹瀉等其他癥狀出現，較符合脾虛厭食證。夏旭婷等［3］采用番瀉葉、限水、控制飲食制備慢傳輸型便秘（STC）小鼠模型，與便秘臨床癥狀相似，首粒黑便傳出時間明顯延長、6 h排便數量和糞便質量明顯減少、血清D-木糖值顯著降低、結腸黏膜無器質性病變，以上現象符合發病的原因、體現了中醫“證”的特點、符合臨床上脾虛型慢傳輸型便秘的客觀標準。周國兒等［4］采用束縛法造成肝郁小鼠模型，在此基礎上，加入長期喂食食醋法造模。結果小鼠逐漸出現懈怠懶動、皮毛疏松拱背、大便時干時溏、身體消瘦等抑郁癥表征。應用小鼠強迫游泳實驗進行行為學檢測同時加入了抑郁癥模型因素，進一步造成了“肝郁脾虛”型抑郁癥小鼠模型。張北華［5］采用母子分離、慢性束縛方法建立肝郁脾虛證，同時采用番瀉葉灌胃復制脾虛證。結果模型大鼠體質量降低、大便不成形，出現脾虛表現，同時內臟高敏感性、腸道通透性增加、細胞和體液免疫功能異常，具有肝郁脾虛的證候特征，并且與IBS-D患者具有部分相同的微觀生物學特征，成功建立了IBS-D肝郁脾虛型大鼠模型。2）證候造模因素與疾病造模因素相疊加。（1）呼吸疾病。王宇等［6］等采用飲食不節、過度疲勞和苦寒泄下（大黃）等多種因素建立脾氣虛大鼠模型，共21 d，脾氣虛造模成功后，再采用卵蛋白致敏和激發的方法，結果大鼠出現鼻部癥狀（鼻癢、噴嚏、清涕）、鼻分泌物及血中嗜酸粒細胞（EOS）明顯，變應性鼻炎模型復制成功，且研究發現在同樣的致敏原作用下，脾氣虛動物較正常動物更易于造成變應性鼻炎模型。苗蘭英等［7］采用上述方法建立脾虛哮喘模型，以激發時大鼠出現呼吸喘促、點頭、腹肌抽動等呼吸困難癥狀提示造模成功。林麗珠等［8］以小承氣湯瀉下法加隔日游泳配合高脂飲食建立脾虛小鼠模型，在小鼠右腋皮下接種1×107個Lewis肺癌細胞。結果小鼠Lewis細胞接種成瘤、腹水并伴有顯著脾虛證表現。（2）消化疾病?！捌㈤_竅于口”，中醫認為復發性口腔潰瘍主要是脾胃虛弱，中氣下陷，虛火上炎。龍惠珍［9］采用限制飲食、過度勞倦法和腹腔注射甲氨蝶呤（MTX）成功制備小鼠脾虛型口腔潰瘍模型，小鼠口腔黏膜色蒼白，無光澤，潰瘍面多呈圓形或橢圓形。朱萱萱等［10］采用N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍（MNNG）和40%乙醇灌胃，同時采用耗氣瀉下，饑飽失常和疲勞（訓練大鼠跑步30min）雙重造模的方法成功建立慢性萎縮性胃炎（CAG）脾氣虛證大鼠模型，隨著造模時間的延長動物胃部病變的進程是從正常胃黏膜-慢性胃炎-萎縮性胃炎-腸上皮化生-不典型增生-胃癌前病變的表現。（3）婦科疾病。俞丕超［11］采用力竭游泳和飲食失節兩方面因素塑造脾虛證動物模型，血清D-木糖含量下降，均有顯著性差異，提示脾虛證模型造模成功。在此基礎上借鑒目前成熟的卵巢過度刺激綜合征（OHSS）造模方法，通過孕馬血清促性腺激素（PMSG）、注射用絨毛膜促性腺激素（HCG）復制OHSS大鼠模型。（4）皮膚疾病。朱卉雯等［12］首先復制慢性濕疹小鼠模型，采用腹部涂抹2，4二硝基氯苯（DNCB）溶液致敏和耳部激發方法。第12日起加入灌服番瀉葉脾虛造模程序，結果小鼠耳部表皮角化過度，出現皮膚明顯增厚、粗糙、干燥，其病理變化基本符合慢性濕疹病理改變。郭姍姍［13］在制備脾虛模型的同時進行銀屑病造模，將大黃和己烯雌酚注射液作為小鼠的選擇用藥，結果小鼠血清褪黑激素（MT）水平低于空白組，脾虛造模成功。單霄［14］采用勞倦及束縛方式復制肝郁脾虛模型，限制大鼠食量使其脾氣虛弱。同時釆用背部紫外線照射和兩股內側注射黃體酮，發現皮膚增厚、皮膚廣泛的褐色斑點斑片，說明脾虛黃褐斑大鼠模型復制成功。

1.2病理造模杜中平等［15］采用腹腔注射利血平的方法制作脾虛動物模型，14 d后采用膠原誘導性關節炎（CIA）。結果大鼠關節紅腫程度和關節損傷程度明顯加重，并且出現十分接近中醫脾虛證的癥狀特點，成功建立類風濕性關節炎（RA）脾虛證病證結合動物模型。章學林等［16］將大鼠麻醉后，切除回腸腸管長約400 mm、結腸腸管長約50 mm，建立脾氣虛證模型。術后3 d左右，大鼠表現出腹瀉、體質量下降或增長緩慢、少動無力、腹脹、腹圍指數增大、進食少、貧血、大便中水份含量升高等。切除部分小腸、大腸，大鼠出現穩定的脾氣虛證改變，可作為一種新的脾氣虛證模型，但其相關病證結合動物模型未見文獻報道。

2　脾陽虛病證結合模型

2.1病因造模脾陽虛多由脾氣虛進一步發展而致，飲食失節、勞倦過度達到傷脾氣，進而采用苦寒瀉下法致傷脾陽。張蕓［17］研究發現，用番瀉葉灌胃造模的脾陽虛大鼠的血清內，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細胞介素-1β（IL-1β）含量均顯著高于正常大鼠，兩者在血清中含量的升高與脾陽虛導致的腹痛癥狀高度相關。蔣鶴飛［18］采用飲食失節、勞倦過度同時加苦寒瀉下（番瀉葉）的因素傷脾陽，用冰乙酸溶液對脾陽虛大鼠模型進行腹腔注射。大鼠扭體反應的次數愈發頻繁并且持續時間顯著延長，表明脾陽虛腹痛大鼠模型制作成功。2.2病理造模陳樺等［19］采用肩胛骨間棕色脂肪組織（BAT）切除術，加上寒冷環境刺激，衰其陽氣，術后以高脂飼料喂養、隔日寒冷環境刺激，模擬“肥甘厚膩”“寒傷中陽”導致脾虛，使脾虛和陽虛癥狀同時具備，從而制備了脾陽虛大鼠模型。第22日開始皮下注射腦垂體后葉素，結果大鼠有類似于冠心病血脂升高、心肌缺血損傷、心功能不全以及脾陽虛證形寒肢冷、納少、消瘦、便溏及腹瀉表現。此外，大鼠膽堿酯酶（CHE）水平顯著降低，為脾陽虛定性和定位提供了參考依據?！瓣柼摬幻隆笔鞘叩牟C之一，如果脾陽不足，清陽不升，胃失和降，“胃不和則臥不寧”。韋祎等［20］采用“BAT切除術”亦成功制備脾陽虛證動物模型，再通過氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射，結果導致大鼠覺醒時間增長，白天夜晚活動不停，成功建立了脾陽虛失眠動物模型。

3　脾陰虛病證結合模型（病因造模）

戰麗彬等［21］采用飲食不節、勞倦過度聯合耗傷陰液的復合因素造模方法建立脾陰虛證模型。實驗第1～15日為脾氣虛階段，第16～24日為脾陰虛階段，在脾氣虛的基礎上每日增加傷陰藥（吳茱萸、制附子、肉桂）每只1 mL/100 g，連續灌服。符合脾陰虛標準的模型大鼠繼續建立癡呆模型:將凝集態β-淀粉樣蛋白1-40 （β-Amyloid1-40，Aβ1-40）定位注射到雙側海馬。結果大鼠反應期延長，錯誤次數增多，學習記憶力降低，還可見易激惹、咬斗，體質量下降明顯，肛溫升高，飲水量增加、大便干燥等陰虛內熱的表現，說明脾陰虛癡呆模型建立成功。消渴與脾陰虛關系密切，中醫學認為消渴以“陰虛為本，燥熱為標”，而脾陰為太陰，為三陰之長，故傷陰者脾陰首當其。梁麗娜等［22］先采用高脂飲食加注射小劑量鏈脲佐菌素（STZ）建立糖尿病模型（72 h后隨機血糖＞16.7 mmol/L的大鼠確定為糖尿病模型），在此基礎上采用上述飲食不節、勞倦過度聯合耗傷陰液的復合因素造模方法成功建立脾陰虛糖尿病大鼠模型。

4　脾虛濕阻病證結合模型（病因造模）

李姿慧等［23］采用疲勞、控制飲食、潮濕環境、三硝基苯磺酸（TNBS）誘導法的多因素制備脾虛濕困潰瘍性結腸炎（UC）動物模型。動物房溫度保持18～25℃，每日將大鼠置于2 cm深的水中8 h，控制睡眠8 h，單日禁食，并給予冰水灌胃1次，雙日供應充足飼料并給予豬油灌胃1次，連續20 d。第21日，禁食不禁水24 h，將TNBS與乙醇復合物注入大鼠腸內，提起大鼠尾部，持續倒置1 min，自由飲食2～3 d。結果大鼠出現黏液膿血便，肛周污穢、消瘦、豎毛、懶動及炎癥反應皆符合UC的表現，說明模型復制成功。

5　脾不統血病證結合模型

鄔燕文［24］單獨使用證候造模因素，采用食醋灌胃塑造大鼠醋酸脾虛模型，每天10 mL/kg食醋灌胃，連續10 d，“過食酸味”可誘發大鼠脾虛，食酸灌胃后期出現明顯的精神萎靡、拱背、扎堆、毛發豎立黯淡等脾虛現象；同時由于醋酸對胃腸道系統的刺激和損傷，產生機體消化吸收障礙，大鼠進食進水量減少，體質量降低，體溫下降，大便干燥且出現血便，到造模第10日諸癥最重，從而成功塑造脾不統血（便血）醋酸脾虛證模型。

6　討論

脾虛證動物模型的造模方法有中醫病因法和西醫病理法，中醫病因法:其一，飲食失調法，如饑飽不勻或過食肥甘厚膩；其二，勞倦耗氣法，如過度游泳、疲勞儀訓練跑步；其三，苦寒瀉下法，如大黃、番瀉葉、大小承氣湯；其四，制造肝郁法，肝氣過旺，克制脾土過度，耗傷脾氣而致脾虛；其五，通過外部環境，如冷水濕身、久居潮濕之地等；其六，食醋灌胃法。西醫病理法:藥物或手術切除法，如利血平腹腔注射、BAT手術切除、切除部分小腸、大腸等。

近年來醫學工作者為了更好地模仿臨床常見的脾虛證相關疾病，以脾虛病證結合動物模型為研究對象，對其制作方法和病理表現進行了很多研究，取得了一定進展，但也仍有其不足之處。比如，脾虛各種證型與何種疾病結合更適合；“病”的動物模型制備有較明確的方法、特異的理化指標驗證模型的制備是否成功，而“脾虛證”的動物模型制備方法及特異的理化指標有待進一步解決。

參考文獻

［1］吳慧，趙文龍，單國順，等.生、熟白術之枳術丸對脾虛食積模型鼠作用的比較研究［J］.中成藥，2013，35（10）:2093-2097.

［2］禹玉洪，張國偉，楊曉寧.丁桂兒臍貼聯合用藥對幼齡大鼠厭食模型的影響［J］.中藥藥理與臨床，2013，29（6）:134-137.

［3］夏旭婷，樊俊陽，王碧玉，等.脾虛證慢傳輸型便秘小鼠模型構建方法的比較研究［J］.湖南中醫藥大學學報，2014，34（12）:7-9.

［4］周國兒，吳靜，黃云娟，等.“肝郁氣滯”及“肝郁脾虛”型抑郁癥動物模型建立初探［J］.中華中醫藥學刊，2014，32（5）: 1035-1038.

［5］張北華.IBS-D肝郁脾虛型病證結合大鼠模型的建立與評價［D］.北京:中國中醫科學院，2013.

［6］王宇，嚴道南.脾氣虛與變應性鼻炎模型大鼠相關機理的研究［J］.南京中醫藥大學學報，2011，27（2）:140-143.

［7］苗蘭英，郭雋馥，趙丹玉，等.培土生金法對脾虛哮喘模型大鼠NF-κB表達的影響［J］.沈陽藥科大學學報，2014，31 （3）:208-212.

［8］林麗珠，王淑美，周京旭.益氣除痰方對脾虛Lewis肺癌小鼠腫瘤生長、生存期及PRDX-1、PRDX-6表達的影響［J］.中國中西醫結合雜志，2011，31（1）:99-103.

［9］龍惠珍.補中益氣湯對脾虛型復發性口腔潰瘍小鼠IL-2、IFN-γ表達的影響［J］.中華中醫藥學刊，2010，28（3）: 523-525.

［10］朱萱萱，史淋峰，吳旭彤，等.實驗性慢性萎縮性胃炎脾氣虛證模型的建立及不同時期病理形態學的改變［J］.中華中醫藥學刊，2012，30（2）:231-233.

［11］俞丕超.脾虛OHSS大鼠模型的建立與中西醫結合治療的臨床觀察［D］.濟南:山東中醫藥大學，2013.

［12］朱卉雯，田靜，陳家惠，等.健脾養血祛風方對脾虛型濕疹小鼠ICAM-1及VCAM-1的影響［J］.中國皮膚性病學雜志，2015，29（2）:86-89.

［13］郭姍姍.健脾解毒湯對脾虛證銀屑病樣小鼠ET-1、E-selectin、PCNA影響的研究［D］.烏魯木齊:新疆醫科大學，2012.

［14］單霄，翟曉翔.葆青口服液對肝郁脾虛型黃褐斑大鼠模型MDA、SOD及皮膚黑色素細胞的影響［D］.南京:南京中醫藥大學，2014.

［15］杜中平，趙宏艷，肖誠，等.類風濕性關節炎脾虛證病證結合動物模型的建立［J］.世界科學技術:中醫藥現代化，2012，14（2）:1384-1392.

［16］章學林，顧宏剛，沈平，等.部分腸切除大鼠“脾氣虛”證模型的建立及以方測證研究［J］.上海中醫藥大學學報，2007，21（3）:52-54.

［17］張蕓.附子粳米湯對脾陽虛模型大鼠血中白介素1β、腫瘤壞死因子α的影響［J］.貴陽中醫學院學報，2009，31（3）: 78-79.

［18］蔣鶴飛.大建中湯對脾陽虛腹痛大鼠下丘腦Bax、Bcl-2基因影響的實驗研究［D］.貴陽:貴陽中醫學院，2013.

［19］陳樺，唐漢慶，李曉華，等.冠心病心脾陽虛證動物模型的建立及附子理中湯的反證效果［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（23）:224-227.

［20］韋祎，唐漢慶，李克明，等.脾陽虛證失眠大鼠模型的建立和附子理中湯的干預效應［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（16）:289-292.

［21］戰麗彬，劉莉，路小光.滋補脾陰方藥對脾陰虛癡呆大鼠海馬蛋白質組影響的研究［J］.世界科學技術:中醫藥現代化，2011，13（3）:480-487.

［22］梁麗娜，胡守玉，戰麗彬，等.滋補脾陰方藥對脾陰虛糖尿病大鼠海馬胰島素抵抗影響的實驗研究［J］.中國中西醫結合雜志，2012，32（3）:356-361.

［23］李姿慧，王鍵，王又聞，等.參苓白術散對脾虛濕困型潰瘍性結腸炎大鼠血清EGF、SOD、MDA的影響［J］.世界華人消化雜志，2012，20（5）:56-59.

［24］鄔燕文.醋酸脾虛證模型大鼠腸道菌群分析［D］.上海:上海交通大學，2009.

·綜述·

中圖分類號:R285.5

文獻標志碼:A

文章編號:1004-745X（2016）01-0099-03

doi:10.3969/j.issn.1004-745X.2016.01.033

*基金項目：國家自然科學基金項目（81373689）；天津中醫藥管理局中醫、中西醫結合科研專項課題（13091）

通信作者△（電子郵箱：hippo007@126.com）脾虛病證結合動物模型，既有西醫疾病的特點，又有中醫脾虛證候的特征。西醫疾病模型是通過藥物或病理因素制備。中醫“脾虛證”模型的復制方法，其研究多集中在脾氣虛證型及脾陽虛證型:一是病因模型，以中醫理論和臨床病因為依據，如《素問·痹論》之“飲食自倍，腸胃乃傷”，《脾胃論》之“勞倦傷脾”“苦寒之藥損其脾胃”；《素聞·生氣通天論》之“味過于酸，肝氣以津，脾氣乃絕”；《素問·至真要大論》已有“諸濕腫滿，皆屬于脾”的認識；二是病理模型，在中醫理論指導下，借用西藥或西醫處理方法，對在脾虛證過程中所出現的一系列病理變化進行模仿，從而制備出類似脾虛的癥狀。目前脾虛病證結合模型的造模多采用證候造模因素與疾病造模因素相疊加，另外也有單獨使用證候造模因素，作為疾病與證候共同的造模因素制備病證結合模型的方法。筆者以中醫不同脾虛證的造模方法為分類標準，對脾虛病證動物模型制備方法進行歸納、分析和總結。現綜述如下。

收稿日期（2015-08-15）