刺五加提取物在抑制乳腺癌細胞增殖和遷移的同時促進其凋亡研究

徐麗偉

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刺五加提取物在抑制乳腺癌細胞增殖和遷移的同時促進其凋亡研究

徐麗偉

【摘要】目的 研究刺五加提取物在抑制乳腺癌細胞增殖、遷移及促細胞凋亡的價值。方法 對乳腺癌細胞系MCF-7進行培養(yǎng)并用刺五加提取物處理，用MTT法檢測在乳腺癌細胞生長中刺五加的抑制作用；用TUNEL法檢測在細胞凋亡中刺五加的促進作用；用劃痕實驗檢測刺五加在細胞遷移中的作用。結果 MTT結果顯示，實驗組細胞增殖抑制作用較為明顯；TUNEL法結果顯示，實驗組細胞凋亡；劃痕實驗結果顯示，實驗組細胞遷移速度緩慢。結論 在抑制乳腺癌細胞增殖、遷移中刺五加提取物有良好的抑制作用。

【關鍵詞】刺五加提取物；乳腺癌；細胞增殖；遷移；凋亡

乳腺癌是現(xiàn)階段發(fā)生率不斷提高的一種惡性腫瘤，且呈現(xiàn)出年輕化趨勢，對患者生活質(zhì)量威脅較大，死亡率高［1-2］。本文主要分析刺五加提取物在抑制乳腺癌細胞增殖、遷移以及促癌細胞凋亡中的作用，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

MCF-7細胞、刺五加根莖（由黑龍江北國技術開發(fā)有限公司提供）、刺五加提取物（自行制備）；DNEN低糖細胞培養(yǎng)基、胎牛血清、MTT檢測試劑盒、TUNEL檢測試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 在37℃環(huán)境下將MCF-7細胞培養(yǎng)在DNEN低糖細胞培養(yǎng)基內(nèi)（含有10％胎牛血清），培養(yǎng)箱中二氧化碳濃度保持為5％；實驗組用不同濃度的刺五加提取物對細胞進行處理，而對照組采用等體積去離子水處理細胞。

1.2.2 MTT法 將MCF-7細胞放置在有96孔細胞培養(yǎng)板上進行培養(yǎng)，并用刺五加提取物對細胞處理24 h后將培養(yǎng)基吸凈，每孔內(nèi)添加新鮮培養(yǎng)液100 μl，再將20 μl的MTT試劑加入，繼續(xù)進行4 h培養(yǎng)。隨后將孔內(nèi)培養(yǎng)液吸凈，加入DMSO 100 μl，低速震蕩10 min，結晶物分解后用Synergy4多功能微孔板檢測儀測量每孔吸光值。為了保證檢測準確性，可分別用刺五加提取物對MCF-7細胞處理24 h、48 h、72 h后重復上述操作，測量每孔吸光值。

1.2.3 TUNEL法 根據(jù)試劑盒說明書操作，檢測細胞凋亡情況，結果采用熒光顯微鏡進行拍照記錄。

1.2.4 劃痕實驗 在24孔板上接種MCF-7細胞，在37℃、濃度為5％的二氧化碳的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，隨后用10 μl吸頭在每孔中央劃一無細胞劃痕區(qū)，寬度3～5 mm。將1 ml的DMEM完全培養(yǎng)液計入實驗組細胞內(nèi)，并加刺五加提取物加入；對照組加入等體積的培養(yǎng)液；均繼續(xù)在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。劃痕實驗完成后48 h在顯微鏡輔助下觀察劃痕寬度變化情況并進行拍照記錄。

2 結果

2.1 在乳腺癌細胞增殖中刺五加的抑制作用分析

結果顯示，生長狀態(tài)良好的MCF-7細胞經(jīng)DMEM培養(yǎng)至細胞匯合度為80％，將刺五加提取物加入培養(yǎng)24 h后，其MCF-7細胞生長形態(tài)出現(xiàn)變化，細胞體細長，細胞生長密度變細，其中有少量細胞出現(xiàn)死亡。

2.2 在乳腺癌細胞凋亡中刺五加的作用分析

結果顯示，對細胞增殖影響中刺五加提取物濃度越高，效果越明顯。對細胞采用藥物濃度為2 mg/ml進行處理后檢測，細胞核位置由DAPI染色顯示，凋亡的細胞由TUNEL染色顯示，對照組細胞數(shù)量多且屬于TUNEL染色陰性細胞；經(jīng)刺五加處理過的實驗組細胞適量少，TUNEL染色有散在陽性點，由此可知，刺五加提取物可促使MCF-7細胞核內(nèi)DNA斷裂，最終凋亡。

2.3 在降低乳腺癌細胞遷移中刺五加的作用

劃痕36 h后對照組MCF-7細胞劃痕將兩側(cè)逐漸向中心遷移愈合；實驗組遷移速度緩慢，造成劃痕愈合速度也下降，表示刺五加提取物能夠一定程度抑制癌細胞遷移，有良好的抗癌能力。

3 討論

刺五加屬于野生植物的一種，屬于常見的野生蔬菜及中草藥，也可進行人工栽培，各部位化學成分不同，生理活性強，有保健、營養(yǎng)及藥用等價值［3-4］。刺五加的抗腫瘤作用已經(jīng)越來越受相關學者關注［5］。研究顯示［6-7］，刺五加葉皂苷對HepG2細胞株的VEGF mRNA表達有良好抑制作用，說明可利用刺五加抑制VEGF介導血管的腫瘤血管新生來抑制腫瘤細胞生長、增殖及轉(zhuǎn)移。且刺五加水提取物對巨噬細胞、NK細胞有良好的激活作用，所以在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時，還能抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移［8］。

本研究以乳腺癌細胞系MCF-7細胞為基礎從細胞增殖、遷移及凋亡等方面分析刺五加提取物在抗乳腺癌中的作用。結果表明，刺五加對乳腺癌細胞增殖、轉(zhuǎn)移有良好的抑制作用，從而可減緩癌細胞生長、轉(zhuǎn)移，并促進癌細胞凋亡。

參考文獻

［1］ 梅冬.超聲檢查在乳腺癌篩查中的臨床應用價值［J］.中國繼續(xù)醫(yī)學教育，2015，7（23）：49-50．

［2］ 靳祎，劉超，范林林，等.刺五加多糖對人宮頸癌HeLa細胞體外增殖和凋亡作用的實驗研究［J］.中成藥，2014，36（1）：162-164．

［3］ 賈丹，張苗苗，李楠，等.艾迪注射液中刺五加提取物對斑蝥素的減毒增效作用［J］.蘇州大學學報（醫(yī)學版），2012，32（3）：343-348．

［4］ 趙丹江.刺五加的藥用價值［J］.中醫(yī)藥信息，2011，28（5）：115-117．

［5］ 臺玉萍，黃新輝，李新忠，等.刺五加的化學成分分析及其藥用價值［J］.化工時刊，2012，26（8）：37-40．

［6］ 王正麗.刺五加注射液配合帕羅西汀治療腦卒中后抑郁癥的應用研究［J］.山東醫(yī)學高等專科學校學報，2015，37（2）：135-137．

［7］ 張娜，楊曉丹，劉樹民，等.刺五加多糖對2、4 -二硝基氟苯（DNFB）誘發(fā)的超敏反應作用及初步機制研究［J］.中醫(yī)藥信息，2015（3）：26-28．

［8］ 武均宜，肖鋒，王恩軍，等.刺五加注射液對人乳腺癌細胞體外抑制的實驗研究［J］.中國民族民間醫(yī)藥，2015（11）：14，16．

Acanthopanax Extracts Inhibit Breast Cancer Cell Proliferation and Migration While Promoting Apoptosis Research

XU Liwei Department of Tumor and Hematology，Changchun University of Chinese Medicine，Changchun Jilin 130117，China

【Abstract】Objective To study the acanthopanax extracts inhibit breast cancer cell proliferation，migration and apoptosis of value.Methods MCF-7 breast cancer cell lines were cultured and treated with siberian ginseng extract，inhibition of cell growth in breast cancer in acanthopanax by MTT assay，by TUNEL assay of apoptosis in acanthopanax promotion，role in cell migration by scratch assay ciwujia.Results MTT results showed that the experimental group was more pronounced in cell proliferation.TUNEL assay showed that the experimental group apoptosis，scratch test results showed that the experimental group cell migration is slow.Conclusion The inhibition of breast cancer cell proliferation，migration siberian ginseng extract has a good inhibition．

【Key words】Acanthopanax extract，Breast cancer，Cell proliferation，Migration，Apoptosis

【中圖分類號】R242

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）07-0130-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．100

作者單位：長春中醫(yī)藥大學腫瘤血液科，吉林 長春 130117