姬松茸多糖對(duì)糖尿病大鼠血清炎癥因子和免疫功能的影響

呂　娟　白　甫　曹蘭秀

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥教研室，陜西　咸陽(yáng)　712046)

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姬松茸多糖對(duì)糖尿病大鼠血清炎癥因子和免疫功能的影響

呂娟白甫曹蘭秀1

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥教研室，陜西咸陽(yáng)712046)

摘要〔〕目的探討姬松茸多糖對(duì)糖尿病(DM)大鼠血清炎癥因子和免疫功能的影響。方法成年大鼠48只，按DM大鼠模型建模，按質(zhì)量分層隨機(jī)分為對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組12只，分別以生理鹽水、240 mg/kg、300 mg/kg和375 mg/kg濃度姬松茸多糖灌胃給藥，持續(xù)1 w，末次給藥2 h后處死大鼠，對(duì)比觀察四組一般情況、體重和血糖、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、腫瘤壞死因子(TNF)-α、C反應(yīng)蛋白(CRP)和白細(xì)胞介素(IL)-6。結(jié)果中藥各劑量組體重均較對(duì)照組顯著增加，血糖顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，體重增加和血糖降低的更顯著(P<0.05)；中藥各劑量組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均較對(duì)照組增加，其中中劑量組和高劑量組顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)； 中藥各劑量組CD4+、CD8+均較對(duì)照顯著增加(P<0.05)，且高劑量組CD4+、CD8+均顯著高于低劑量組，中劑量組CD4+顯著高于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中藥各劑量組炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6均較對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6降低越明顯(P<0.05)。結(jié)論姬松茸多糖能改善DM大鼠臨床癥狀，降低血糖和炎癥反應(yīng)，增強(qiáng)免疫功能。

關(guān)鍵詞〔〕姬松茸多糖；糖尿病；炎癥因子；免疫功能

1方劑教研室

第一作者：呂娟(1977-)，女，在職碩士，講師，主要從事中藥學(xué)的教學(xué)工作，中西醫(yī)結(jié)合臨床治療糖尿病研究。

姬松茸是一種食藥兼用的珍稀蕈菌〔1〕，其所含的多糖在增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、抗腫瘤、抗病毒、補(bǔ)腎護(hù)肝等方面均具有作用，具有廣泛的藥理活性〔1～4〕。多往對(duì)姬松茸多糖在糖尿病(DM)方面的研究較少，本研究通過建立DM大鼠模型，探討了姬松茸多糖不同給藥劑量對(duì)DM大鼠體重、血糖、炎癥因子腫瘤壞死因子(TNF)-α、C反應(yīng)蛋白(CRP)、白細(xì)胞介素(IL)-6及免疫功能的影響。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物8周齡成年大鼠48只，雌雄各半，體重220～240 g，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2姬松茸多糖由陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥教研室自制姬松茸多糖，制作工藝步驟為：姬松茸粗多糖溶液制備、截留率膜超濾、截留液過陰陽(yáng)離子樹脂交換柱、凍干后得姬松茸多糖蛋白多糖精粉、根據(jù)要求配置濃度。

1.1.3其他試劑和儀器鏈脲佐菌素購(gòu)自Sigma公司，AUY120電子分析天平購(gòu)自日本島津公司，血糖試劑盒購(gòu)自上海申索佑福醫(yī)學(xué)診斷用品有限公司，流式細(xì)胞儀由美國(guó)Beckman Coulter公司提供，TNF-α、CRP和IL-6酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)自上海寶曼生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1建模禁食12 h，一次性腹腔注射60 mg/kg滅菌鏈脲佐菌素。3 d后隨機(jī)3次測(cè)量血糖，血糖≥16.7 mmol/L即為DM大鼠模型建模成功。

1.2.2分組和給藥按質(zhì)量分層隨機(jī)分為對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組12只，分別以生理鹽水、240 mg/kg、300 mg/kg和375 mg/kg濃度姬松茸多糖灌胃給藥，1次/d，持續(xù)1 w，末次給藥2 h后處死大鼠。

1.3觀察指標(biāo)一般情況：包括大鼠癥狀、建模是否成功以及死亡情況。體重和血糖：末次給藥前禁食12 h，末次給藥2 h后處死前稱體重，測(cè)量血糖水平。脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù):處死大鼠并解剖，摘取胸腺和脾臟，擦干表面殘留血跡，用天平稱其重量。脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)：臟器質(zhì)量(mg)/體重量(g)的比值。免疫功能指標(biāo):處死前眼球后靜脈叢毛細(xì)管取血，肝素抗凝，流式細(xì)胞儀測(cè)定CD4+、CD8+，計(jì)算CD4+/CD8+。炎癥因子:取血方法同上，離心取上清液，炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1一般情況四組均建模成功，大鼠均表現(xiàn)出“三多一少”、反應(yīng)遲緩、精神萎磨、毛豎而晦暗、弓背蛇體等DM癥狀。對(duì)照組和高劑量組各死亡1只，中劑量組死亡2只。

2.2四組體重和血糖比較中藥各劑量組體重均較對(duì)照組顯著增加，血糖顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，體重增加和血糖降低的更顯著(P<0.05)。見表1。

2.3四組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較中藥各劑量組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均較對(duì)照組增加，其中中劑量組和高劑量組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表1　四組體重和血糖比較±s)

與對(duì)照組比較:1)P<0.05；與低劑量組比較，2)P<0.05；與中劑量組比較:3)P<0.05；表3，表4同

表2　四組脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)比較(mg/g)

與對(duì)照組比較:1)P<0.05

2.4四組免疫功能指標(biāo)比較中藥各劑量組CD4+、CD8+均較對(duì)照顯著增加(P<0.05)，且高劑量組CD4+、CD8+均顯著高于低劑量組，中劑量組CD4+顯著高于低劑量組(P<0.05)，四組CD4+/CD8+比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3　四組免疫功能指標(biāo)比較±s)

2.5四組炎癥因子比較中藥各劑量組炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6均較對(duì)照組顯著降低(P<0.05)，且隨著給藥劑量的增加，炎癥因子TNF-α、CRP和IL-6降低越明顯(P<0.05)。見表4。

表4　四組炎癥因子比較±s)

3討論

DM是臨床最常見的內(nèi)分泌疾病，主要以糖脂代謝紊亂為特征。DM臨床主要表現(xiàn)為高血糖，出現(xiàn)多飲、多尿、多食以及消瘦“三多一少”癥狀。胰島素分泌缺陷或(和)其生物作用受損是DM發(fā)病的主要原因，受環(huán)境和遺傳共同作用〔5〕。DM患者長(zhǎng)期處于高血糖狀態(tài)，會(huì)引起各種組織出現(xiàn)慢性損害和功能障礙，嚴(yán)重威脅患者身體健康。DM的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，近年來(lái)有研究認(rèn)為炎癥反應(yīng)和免疫功能紊亂會(huì)加速DM發(fā)展，加重病情〔6〕。DM傳統(tǒng)治療方法以控制血糖為主，效果不盡如人意，抗感染和免疫調(diào)節(jié)可能成為DM治療的新思路，是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)話題。

從姬松茸子實(shí)體中提取的姬松茸多糖，是一種具有芳香氣味和多種藥理功效的活性成分。姬松茸多糖藥理活性廣泛，在增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、抗腫瘤、抗病毒、補(bǔ)腎護(hù)肝等方面均具有作用〔1～4〕，然而其在降血糖方面的作用一直未明確。本研究結(jié)果表明，姬松茸多糖具有降血糖的作用且給藥劑量越大，降血糖效果越明顯。胰島素吸收缺失和胰島素抵抗是DM損害的重要原因，保護(hù)胰島β細(xì)胞、消除胰島素抵抗是治療DM的關(guān)鍵。姬松茸多糖降血糖的可能機(jī)制為〔7〕：松茸多糖能促進(jìn)胰島素的排泄，并增強(qiáng)胰島素的愚鈍性，從而遏制胰島細(xì)胞對(duì)高血糖素的吸收，另外，姬松茸多糖還能加速葡萄糖肝內(nèi)代謝，保護(hù)胰島β細(xì)胞。

免疫功能紊亂在DM的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用，免疫器官重量能一定程度上反映機(jī)體非特異性免疫功能，脾臟中富含巨噬細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞，能有效抵抗外來(lái)致病因素，參與了免疫反應(yīng)中；胸腺能分泌胸腺素和產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)功能。T細(xì)胞包括不同的亞群，CD4+、CD8+是T細(xì)胞中最主要的兩類，正常情況下，CD8+、CD4+兩類T細(xì)胞處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，發(fā)揮特異性細(xì)胞免疫和免疫調(diào)節(jié)功能，DM發(fā)生時(shí)，平衡被打破，細(xì)胞免疫功能下降、免疫調(diào)節(jié)失衡，容易引起感染。本研究結(jié)果表明，姬松茸多糖還具有增強(qiáng)免疫功能的作用，且給藥劑量越大，增強(qiáng)免疫功能效果越明顯。

有學(xué)者發(fā)現(xiàn)〔8〕，高濃度炎癥因子會(huì)加重DM病程和增加并發(fā)癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。TNF-α、CRP和IL-6是三種常見的炎癥因子，本研究結(jié)果表明，姬松茸多糖還具有抗感染效果，且給藥劑量越大，抗感染效果越明顯。姬松茸多糖可能的抗感染機(jī)制為〔9〕：姬松茸多糖能抑制前列腺素E的生物合成和釋放，且能抑制緩激肽、5-羥色胺和組胺等癥介質(zhì)的生成和釋放。

參考文獻(xiàn)4

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〔2015-05-16修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

中圖分類號(hào)〔〕R587.1〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2016)01-0044-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.020