兩種方法驗證乙型肝炎病毒標志物室間質量控制結果分析

吳　飛

(蘭陵縣中醫醫院檢驗科，山東臨沂 277700)

?

·論著·

兩種方法驗證乙型肝炎病毒標志物室間質量控制結果分析

吳飛

(蘭陵縣中醫醫院檢驗科，山東臨沂 277700)

摘要:目的對比酶聯免疫吸附法(ELISA)和膠體金免疫層析法(GIGA)檢測乙肝五項指標的結果差異，驗證HBV標志物室間質量控制的方法選擇。方法使用ELISA檢測試劑和GIGA試條對420份標本檢測乙肝五項指標，并對兩種方法檢測均陽性的標本做1∶256倍稀釋后檢測相關抗原抗體，對結果進行統計學分析。結果兩種方法結果除乙肝表面抗原結果無顯著差異外，其他指標均有顯著差異，稀釋后結果差異更加明顯。結論GIGA法檢測乙肝五項指標較ELISA法靈敏度低，有一定的漏檢率，不適用于室間質量控制檢測，應用ELISA法加以確證。

關鍵詞:酶聯免疫吸附法；膠體金免疫層析法；乙肝五項；質量控制

乙型肝炎病毒(HBV)是嚴重危害人類健康的常見傳染病之一，我國又是乙型肝炎(以下簡稱“乙肝”)乙肝大國，官方報導感染率約10%，全國將近1億人感染乙肝病毒[1]。乙肝五項指標的檢查是現在普遍應用的確診和療效觀察指標，也是室間質量控制的基本檢測項目。目前，用于乙肝五項檢測的方法主要有凝集試驗、放射免疫測定(RIA)、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、免疫層析測定以及化學發光免疫測定(TR-FLA)等，其中又以膠體金免疫層析法(GIGA)和ELISA應用最為廣泛[2]，特別是一些基礎條件較差的實驗室，這兩種方法的應用較有普遍性。在檢測靈敏度和特異度方面，ELISA 已被臨床所公認是較可靠且可以信賴的方法[3]，而GIGA法因具有操作簡便、結果快速、特異度較高、試劑保存方便有效期長和不需特殊儀器等優點，被臨床檢驗科室廣泛應用[4]。本院在乙肝五項檢測中，曾長時間應用GIGA法，但是在參加室間質量控制后，成績一直不理想，經常會質控不達標。后應用ELISA法參加室間質控活動，獲得了滿意的效果，由此可以看出GIGA法在檢測乙肝五項的過程中存在一定的偏差，GIGA法不能單獨應用于HBV標志物的室間質量控制[5]。本研究用ELISA法和GIGA法聯合檢測乙肝五項，以驗證GIGA法檢測乙肝五項的可靠性，現報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源血清標本420份，來自本院2014年門診及住院患者，部分為乙肝患者及乙肝病毒攜帶者，部分為常規體檢者，均檢測了乙肝五項指標。其中男286例，占68.1%，女134例，占31.9%，年齡8～52歲。

1.2儀器與試劑膠體金測試卡采用廈門英科新創科技有限公司生產，ELISA試劑采用北京萬泰生物藥業股份有限公司產品，兩種試劑均在有效期內，且包裝完好。儀器采用上海科華ST-360酶標儀。

1.3方法兩種方法均嚴格按照試劑使用說明書操作，420份血清標本兩種方法平行測定，考慮到室間質控品制備時會有不同程度稀釋，特將兩種方法檢測都為陽性的標本用無菌生理鹽水做了稀釋，早期1∶10和1∶20倍稀釋后，差異無統計學意義(P>0.05)，為減少工作量增加同時增加操作的可比性，后統一做1∶256倍比稀釋，再次用兩種方法檢測，分別統計比較分析。

1.4統計學處理采用SPSS19.0軟件進行數據處理及統計分析，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

兩種方法檢測不稀釋血清420份，檢測結果見表1。GIGA法檢測乙肝五項陽性率均小于ELISA法，與ELISA陽性符合率分別為：HBsAg 98.1%、HbsAb 85.7%、HbeAg 86.4%、HbeAb 92.1%和HbcAb 87.1%，除HBsAg陽性率差別無統計學意義外(P>0.05)，其他各項指標差異均有統計學意義(P<0.05)。

對上述兩種方法檢測均為陽性的標本做1∶256倍比稀釋，檢測結果見表2。

表1　　兩種方法檢測結果比較(原倍血清)

表2　　兩種方法檢測結果比較(1∶256稀釋)

由表2看出，經過稀釋的血清標本，GIGA法檢測乙肝五項各指標陽性率均大幅度下降，與ELSIA法陽性符合率降為：HBsAg 82.4%、HbsAb 65.8%、HbeAg 78.2%、HbeAb 59.7%和HbcAb 75.4%，各指標差異均有統計學意義(P<0.05)。

3討論

HBV是威脅人類健康的重要病原體，我國的HBV感染情況尤為嚴重，在臨床實踐中，各科均對HBV的檢測有較高的要求希望快速準確地得到HBV檢測結果。乙肝五項作為臨床常用的診斷治療HBV的檢測指標，具有重要的應用價值[6-7]，目前，各級實驗室都有開展[8]。在室間質量控制中，條件較好的實驗室已應用放射免疫和化學發光等更敏感的實驗方法，但以ELISA應用較普遍，部分實驗室依然應用GIGA法檢測。GIGA法檢測乙肝五項，以其快速、簡便、不需特殊儀器、可單人份檢測、便于保存、特異度和準確度較高等優點，廣泛應用于臨床對乙型肝炎的初篩、急診和無償獻血等場所，為各級實驗室，特別是實驗條件較差的初級實驗室所廣泛采用。但是由于方法學和制造工藝等因素，GIGA法又有其自身的缺點，如檢測底限為1 ng/mL，較ELISA法底限的0.1 ng/mL檢測靈敏度差，特別是對一些抗原抗體滴度不高的標本，容易造成漏檢[9]。在室間質評活動中，因質控品的制備方法和使用基質等問題，各抗原抗體的滴度都會有不同程度的稀釋，更易造成結果的假陰性，測定中應與普通血清標本相區別，實踐證明，用GIGA法做室間質控不能得到滿意結果[10]。ELISA法以其成熟的技術，超高的檢測靈敏度等優點，彌補了GIGA法的不足，建議在臨床試驗過程中，不應單純以GIGA法結果判定患者感染情況，應以ELISA法或更靈敏的如化學發光等方法加以驗證，為臨床提供更確切的診斷依據。

參考文獻

[1]丁善龍,王杰,魯鳳民.乙型肝炎研究及我國防治現狀[J].傳染病信息，2013,26(6)：369-372.

[2]余大孝,李侃.對檢測乙型肝炎方法的研究[J].醫學信息(上旬刊),2010,6(6):1964.

[3]田昌銀.ELISA法檢測乙肝五項的影響因素初探[J].中國中醫藥咨訊，2011，3(7):281-282.

[4]陳佑明,黃敬,劉京平，等.兩種方法檢測乙型肝炎病毒表面抗原的比較[J].檢驗醫學與臨床,2010,6(4):495-496.

[5]張小麗，王貝晗，張景，等.膠體金檢測乙肝病毒血清標志物的實驗研究[J].武警醫學，2011，22(5)：404-405.

[6]劉運周,胡衛紅,張薇.三種檢測乙肝兩對半常用方法的比較[J].中國醫師進修雜志，2012,35(4):452-453.

[7]丁邦盛,潘建.金標法和ELISA法檢測乙型肝炎病毒血清標志物的比較[J].臨床輸血與檢驗，2012,3(3):225-228.

[8]郭鑫.關于乙肝五項檢測臨床意義的探討[J].中國中醫藥咨訊，2011,10(1):99-100.

[9]周積滿.金標快速法與ELISA法檢測HBV的對比分析[J].中外醫療,2012，1(1):174-175.

[10]周玲,呂定.金標法檢測乙肝表面抗原漏檢原因分析[J].檢驗醫學與臨床，2014，17(2):268-269.

Analysis of external quality control results of two methods for verifying HBV markers

WuFei

(DepartmentofClinicalLaboratory,LanlingCountyHospitalofTraditional

ChineseMedicine,Linyi,Shandong277700,China)

Abstract:ObjectiveTo compare the difference of hepatitis B 5-index results detected by the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and colloidal gold immunochromatographic assay (GIGA) for verifying the method selection of HBV markers inter-laboratory quality control.MethodsThe ELISA reagent and GIGA strip were used to detect five indexes in 420 samples.The positive samples detected by both two methods were diluted by 1:256 times were performed the related antigen and antibody detection.The detection results were analyzed statistically.ResultsExcept the result of hepatitis B surface antigen had no significant difference,other indexes all had significant differences,the result differences were more significant after dilution.ConclusionThe GIGA method for detecting hepatitis B 5 indexes has lower sensitivity than the ELISA method and has certain missed diagnosis rate,and is unsuitable for the detection of the external quality control,the ELISA method should be used to confirm.

Key words:enzyme linked immuno sorbent assay;colloidal gold immunochromatographic;hepatitis B five indexes；quality control

(收稿日期：2015-07-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.020

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)01-0047-02

作者簡介：吳飛，男，主管技師，主要從事醫學檢驗研究。