胃癌患者外周血骨髓干細胞水平變化的初步研究

聶魯愚，朱海濤，謝敏

(1.南京醫科大學鼓樓臨床醫學院 普外科，江蘇 南京　210008； 2.馬鞍山十七冶醫院 普外科，安徽 馬鞍山　243000； 3.江蘇省腫瘤醫院 普外科，江蘇 南京　210009)

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胃癌患者外周血骨髓干細胞水平變化的初步研究

聶魯愚1，2，朱海濤3，謝敏1

(1.南京醫科大學鼓樓臨床醫學院 普外科，江蘇 南京210008； 2.馬鞍山十七冶醫院 普外科，安徽 馬鞍山243000； 3.江蘇省腫瘤醫院 普外科，江蘇 南京210009)

[摘要]目的:比較胃癌患者與對照者之間外周血骨髓干細胞水平的差異及其在胃癌患者手術前后的變化，為胃癌診治提供新的診斷指標。方法:收集12例胃癌患者術前以及術后第7天的外周血，以同期12例腹腔鏡膽囊切除患者的外周血作為對照組。采用流式細胞術測定骨髓干細胞占單核細胞的百分比，觀察胃癌患者循環骨髓干細胞水平以及根治術前后循環骨髓干細胞水平的變化。結果:外周血骨髓干細胞水平胃癌組明顯高于非胃癌的對照組(P<0.05)，根治性胃癌切除手術后明顯下降，差異有統計學意義(P<0.05)。 結論:骨髓來源干細胞在癌癥生長、侵襲、轉移等過程中起著重要作用，而外周血骨髓干細胞水平有望成為胃癌診斷、評估治療療效的重要參考指標。

[關鍵詞]胃癌； 外周血； 骨髓干細胞

1971年Folkman[1]首次提出了腫瘤生長依賴血管新生的假說，1997年Asahara等[2]首次從外周血分離出一類源自骨髓的干細胞，它能夠分化為成熟的血管內皮細胞從而構建新生血管。從此骨髓來源干細胞在人類癌癥生長、侵襲、轉移的潛在作用及臨床意義得到大量關注。本研究對胃癌患者手術前后循環骨髓干細胞水平進行檢測，做對照研究，探討循環骨髓干細胞水平測定在胃癌診斷、療效評估中的作用，以期推動胃癌的診治水平。

1資料和方法

1.1一般資料

病例系鼓樓醫院普外科2015年3月至2015年6月行胃癌根治性切除手術的患者，共12例，術前均未行放化療，術后經病理學證實為胃癌。選擇同期的擇期腹腔鏡膽囊切除患者12例作為對照組。所有患者均排除他汀類藥物使用史，均無冠心病、腦血管病史。所有患者均自愿并簽署知情同意書。

1.2試劑

鼠抗人CD45- PECyTM7、CD34- FITC、VEGFR2- Alexa Fluor 647、紅細胞裂解液購自BD Biosciences公司，單克隆抗體CD133- PE購自Miltenyi Biotec公司，BD FACS Aria Ⅱ型流式細胞儀。

1.3研究方法

流式細胞儀檢測循環骨髓干細胞占外周血單個核細胞百分比：兩組患者均清晨抽安靜狀態下空腹外周靜脈血2 ml，置于EDTA抗凝管中，4 ℃保存，2 h內送檢。細胞表面標志選用CD45-、CD34+、CD133+、 VEGFR2+。取干凈試管分別加抗體：CD45 3 μl,CD34、CD133各5 μl，VEGFR2 10 μl，同型對照組只加CD45 3 μl。加入50 μl抗凝血，震蕩混勻避光孵育20 min。加入1 ml紅細胞裂解液，震蕩混勻避光10 min后離心(1 500 r·min-1，共5 min)。棄上層液體，加1 ml磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)，再次震蕩混勻后離心(1 500 r·min-1，共5 min)，再次倒掉上層液體，加入200 μl PBS后上機檢測。胃癌組患者術后第7天再次檢測循環骨髓干細胞水平。

1.4統計學處理

2結果

胃癌組與對照組循環骨髓干細胞占外周血單個核細胞百分比分別為(0.046485±0.033518)%和(0.023104±0.015192)%，兩組比較差異有統計學意義(t=2.201，P=0.039)。

胃癌組患者手術前后循環骨髓干細胞占外周血單個核細胞百分比分別為(0.046485±0.033518)%和(0.023864±0.011903)%，兩組比較差異有統計學意義(t=2.880，P=0.015)。

3討論

胃癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，在我國胃癌的發病率已位居惡性腫瘤發病率的第2位，死亡率居第3位[3]。我國早期腫瘤發現率<5%，絕大多數患者初診時已是進展期，5年生存率僅為30%～50%[4]。CA242、CA19- 9等經典的腫瘤標志物在胃癌診斷、治療效果、復發轉移中的判斷作用一直備受爭議。

血管新生是腫瘤的重要特性之一，研究[5]表明，骨髓干細胞在腫瘤血管發生中起主要的決定性作用。外周血中骨髓來源干細胞濃度已成為一個有前途的和有效的檢測標志，它可以更準確、更直接地反映腫瘤血管生成活性。Ho等[6]比較了80例肝細胞癌和14名健康受試者的循環骨髓干細胞水平，發現其在肝癌患者中顯著升高。近來大量研究顯示，外周循環中骨髓干細胞水平在肺癌[7]、卵巢癌[8]、腎癌[9]、結腸癌[10]中明顯升高。但也有研究[11]認為，惡性腫瘤患者與正常人循環骨髓干細胞水平無統計學差異。由于許多混雜因素如心血管疾病、糖尿病、生活方式(包括吸煙、鍛煉身體等)、口服他汀類藥物等可能會影響研究結果，因此，驗證外周循環中骨髓來源干細胞水平的診斷價值，對癌癥患者和健康對照組的選擇標準須嚴格。在本研究中，我們選擇的患者均排除他汀類藥物使用史，均無冠心病、腦血管病史。

Yang等[9]發現，腎癌患者術后3個月的循環骨髓干細胞水平明顯低于術前水平，但也有研究發現癌癥患者術后循環骨髓干細胞濃度與術前水平比較無明顯變化[10]。這種矛盾的結果可能是由多種因素造成的，如手術后骨髓中干細胞動員并向手術損傷部位聚集、手術損傷引起的應激反應等。因此，本研究均在術后第7天抽血復查循環骨髓干細胞水平，以避免手術創傷對研究結果的影響。

本研究結果顯示，胃癌患者循環骨髓干細胞水平較對照組明顯升高，根治性切除術后胃癌患者循環骨髓干細胞水平明顯下降。說明循環骨髓干細胞水平可以作為診斷胃癌及判斷胃癌手術治療效果的一個重要指標。然而由于循環骨髓干細胞水平受多種因素影響,而流式細胞技術又相對復雜，限制了流式細胞技術檢測循環骨髓干細胞水平在臨床中的應用；另外循環骨髓干細胞水平與腫瘤浸潤程度、放化療效果及遠期生存率等指標是否相關，尚需進一步研究證實。

[參考文獻]

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Study of circulating bone marrow stem cells content change in patients with gastric cancer

NIE Lu- yu1，2，ZHU Hai- tao3，Xie Min1

(1.DepartmentofGeneralSurgery，DrumTowerHospital，NanjingMedicalUniversity，Nanjing210008，China2.DepartmentofGeneralSurgery，MaanshanShiqiyeHospital，Maanshan243000，China； 3.DepartmentofGeneralSurgery，JiangsuCancerHospital，Nanjing210009，China)

[Abstract]Objective： To compare the levels of circulating bone marrow stem cells between patients with gastric cancer and controls，observe its change in gastric cancer patients before and after radical resection in order to provide a new diagnostic index for the diagnosis and treatment of gastric cancer. Methods: Peripheral blood of 12 patients with gastric cancer before operation and 7 d after operation were collected. The peripheral blood of 12 patients with laparoscopic cholecystectomy were used as control group. The percentage of bone marrow stem cells of monocyte was detected by flow cytometry，the level of circulating bone marrow stem cells and its change in patients with gastric cancer before and after radical resection were observed. Results: The level of the circulating bone marrow stem cells in the gastric cancer group was significantly higher than that of control group(P<0.05)，and it was significantly decreased after radical resection(P<0.05). Conclusion: Bone marrow stem cells play a great role in cancer growth，invasion and metastasis，and the level of the circulating bone marrow stem cells has the important reference index for the diagnosis and treatment of gastric cancer．

[Key words]gastric carcinoma; peripheral blood; bone marrow stem cells

doi：10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.02.018

[中圖分類號]R604

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671- 6264(2016)02- 0226- 03

[通信作者]謝敏E- mail：M- xie0828@medmail.com.cn

[作者簡介]聶魯愚(1979-)，男，安徽馬鞍山人，主治醫師，在讀碩士研究生。E- mail：28640967@qq.com

[基金項目]江蘇省自然基金(BK20131438);江蘇省人事廳第十一批次六大人才高峰項目基金(WSW- 036，WSW- 038);南京醫科大學附屬腫瘤醫院院基金資助項目

[收稿日期]2015- 10- 07[修回日期] 2015- 11- 27

[引文格式] 聶魯愚，朱海濤，謝敏.胃癌患者外周血骨髓干細胞水平變化的初步研究[J].東南大學學報:醫學版，2016,35(2):226- 228.

·論著·