腫瘤浸潤T淋巴細胞在乳腺癌原發灶中的表達與預后的關系

鄭益紅 溫美福 葉新橋 鄒欣 鄧儲婷

腫瘤浸潤T淋巴細胞在乳腺癌原發灶中的表達與預后的關系

鄭益紅 溫美福 葉新橋 鄒欣 鄧儲婷

目的 分析腫瘤浸潤T淋巴細胞在乳腺癌原發灶中的表達與預后的關系。方法 對105例乳腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋病理標本進行分析，利用免疫組化檢測患者CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴細胞在乳腺癌原發灶中的表達，利用COX多因素和單因素分析患者總生存率和無病生存率的相關因素。結果 CD8+T淋巴細胞浸潤和SBR分級具有相關性（P＜0.05）。CD4+T淋巴細胞浸潤與HER-2表達、SBR分級有關（P＜0.05），CD3+T淋巴細胞浸潤和淋巴結狀態、HER-2表達、PR表達、ER表達、SBR分級、臨床分期、腫瘤直徑、年齡等無關。結論 CD3+T淋巴細胞浸潤廣泛存在于乳腺癌原發灶中，病變程度受到CD8+T淋巴細胞和CD4+T淋巴細胞浸潤的影響，CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴細胞都關系著乳腺癌的較好預后。

腫瘤浸潤；T淋巴細胞；乳腺癌；原發灶；預后

腫瘤浸潤T淋巴細胞就是從腫瘤組織中分離出的富含腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞，T淋巴細胞是機體重要的抗腫瘤免疫應答細胞，主要介導細胞免疫抑制或殺傷腫瘤細胞[1]。腫瘤浸潤淋巴細胞與患者的生存率和手術治療效果有很大的關系[2]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 對本院2013年3月～2015年3月接收的

100例乳腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋病理標本進行回顧性分析，患者平均年齡（52.61±5.14）歲，所有患者均為原發乳腺癌，手術進行前均沒有進行靶向治療、化療、免疫調節劑治療、放療，都完成了根治乳腺癌的手術，所有資料均完整。

1.2 免疫組化檢測 將所有患者的石蠟包埋病理標本切成4μm厚度的薄片，將其中具有明顯病灶特征的薄片進行烘烤，利用甲苯脫去表層的蠟，利用梯度酒精對其進行水化，然后用高壓將其修復，利用濃度為3%的雙氧水對內源性過氧化物酶進行孵育滅活等。然后再加入鼠抗人CD8+、CD4+、CD3+單克隆抗體（均購自福建邁新公司）作為一抗，并在4℃的溫度下孵育過夜，再進行漂洗、復溫到37℃，加入生物素標記二抗工作液，在溫度為37℃的情況下，孵育30 min，采用PBS緩沖液進行漂洗、蘇木素復染、DAB顯色，在高倍顯微鏡下進行鏡檢，并采用PBS替代一抗進行陰性對照。

1.3 結果判定[3]采取高倍視野，在病灶中隨機選擇五個視野，并保證所選視野分布在病灶的各個部位，CD8+、CD4+、 CD3+染色都定位在淋巴細胞的胞膜之中。（1）對顯色強度進行觀察：深棕色計3分、棕色計2分、淺棕色或黃色計1分、無顯色計0分；（2）對顯色面積進行觀察：對視野淋巴細胞計數，＞50%計3分，25%～50%計2分，＜25%計1分，＜5%計0分。將顯色面積與顯色強度得分相乘，≥2分為陽性，＜2分為陰性。

1.4 統計學方法[4]采用SPSS 19.0統計學進行分析，計量資料用“x±s”表示，等級資料采用秩和檢驗，用Spearman秩對連續變量和分類變量進行相關性分析，Kaplan-Meier法進行生存分析，COX風險比例模型進行單因素分析。α=0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌OS和DFS影響因素COX單因素分析 隨訪期間13例復發，9例死亡，通過Kaplan-Meier法進行分析，5年生存率為84.92%，無病生存率為76.23%。3年生存率為89.93%，無病生存率為81.23%，2年生存率為93.23%，無病生存率為85.45%。將臨床及病理相關因素帶入COX模型作為自變量，以總生存率（OS）與無病生存率（DFS）分別作為因變量，進行單因素分析，結果顯示，OS保護因素為CD8+T淋巴細胞浸潤、CD4+T淋巴細胞浸潤（HR=0.565、0.622，P＜0.05），OS危險因素為淋巴結轉移、HER-2陽性、SBR分級、臨床分期（HR=3.024、4.251、3.562、3.251，P＜0.05）。DFS保護因素為CD8+T淋巴細胞浸潤、CD4+T淋巴細胞浸潤（HR=0.513、0.636，P＜0.05），DFS危險因素為淋巴結轉移、HER-2陽性、SBR分級、臨床分期（HR=2.105、3.025、2.936、2.351，P＜0.05）。

2.2 CD8+、CD4+、CD3+在乳腺癌原發灶的表達與病理特征的關系 105例患者中，71例（67.62%）為CD8+陽性，55例（52.38%）為CD4+陽性，101例（96.19%）乳腺癌原發灶為

CD3+陽性。CD8+T淋巴細胞浸潤和SBR分級具有相關性（P＜0.05）。CD4+T淋巴細胞浸潤與HER-2表達、SBR分級有關（P＜0.05），CD3+T淋巴細胞浸潤和淋巴結狀態、HER-2表達、PR表達、ER表達、SBR分級、臨床分期、腫瘤直徑、年齡等無關。

3 討論

T淋巴細胞主要由重要TILs組成，并且各亞群在腫瘤免疫中都發揮著重要作用[5]。CD8+T淋巴細胞對殺死和溶解腫瘤細胞、微生物、異體細胞有直接的作用，是機體細胞免疫的一種主要力量[6]。CD4+T淋巴細胞在乳腺癌灶內的作用對抗腫瘤免疫有很大的幫助作用，并和CD8+T淋巴細胞的表達相符[7]。在大腸癌組織中，CD8+T淋巴細胞浸潤與組織分型、臨床分期等有關，其惡性程度越高，CD8+細胞的表達越高，CD8+T淋巴細胞浸潤程度越高，預后也相應的越好[8]。

本研究結果顯示，OS保護因素為CD8+T淋巴細胞浸潤、CD4+T淋巴細胞浸潤（HR=0.565、0.622，P＜0.05），OS危險因素為淋巴結轉移、HER-2陽性、SBR分級、臨床分期（HR=3.024、4.251、3.562、3.251，P＜0.05）。DFS保護因素為CD8+T淋巴細胞浸潤、CD4+T淋巴細胞浸潤（HR=0.513、0.636，P＜0.05），DFS危險因素為淋巴結轉移、HER-2陽性、SBR分級、臨床分期（HR=2.105、3.025、2.936、2.351，P＜0.05）。CD8+T淋巴細胞浸潤和SBR分級具有相關性（P＜0.05）。CD4+T淋巴細胞浸潤與HER-2表達、SBR分級有關（P＜0.05），CD3+T淋巴細胞浸潤和淋巴結狀態、HER-2表達、PR表達、ER表達、SBR分級、臨床分期、腫瘤直徑、年齡等無關。

綜上所述，CD3+T淋巴細胞浸潤廣泛存在于乳腺癌原發灶中，病變程度受到CD8+T淋巴細胞和CD4+T淋巴細胞浸潤的影響，CD3+T、CD4+T、CD8+T淋巴細胞都關系著乳腺癌的較好預后。

[1] 于海明,焦順昌,楊俊蘭,等.乳腺癌原發灶T淋巴細胞浸潤與預后的關系[J].中國醫學科學院學報,2013，35(2)：199-206.

[2] 于海明,楊俊蘭,焦順昌,等.乳腺癌原發灶B淋巴細胞浸潤與預后的關系[J].南方醫科大學學報,2013，33(5)：750-755.

[3] 爭鳴,張欣,郭慧芳,等.CD147介導CD4+腫瘤浸潤淋巴細胞促進乳腺癌進展[J].細胞與分子免疫學雜志,2015，31(7)：961-964.

[4] 何建明,黃湛,吳家豪,等.CD8+腫瘤浸潤淋巴細胞與乳腺癌預后的關系[J].中國普通外科雜志,2013，22(11)：1475-1478.

[5] 任偉民,張友元,董軍明,等.老年女性原發乳腺浸潤性導管癌中FoxP3表達與淋巴結轉移的相關性[J].中國老年學雜志,2014，34(2)：385-387.

[6] 薛聰,彭柔君,安欣,等.CD8+淋巴細胞浸潤對可手術乳腺癌預后的影響[J].臨床腫瘤學雜志,2014，19(10)：896-900.

[7] 于海明,楊俊蘭,焦順昌,等.增殖誘導配體在乳腺癌原發灶表達及與預后的關系[J].南方醫科大學學報,2015，35(2)：185-190.

[8] 付云霞,王弦,朱敬鳳,等.乳腺癌間質中腫瘤相關性巨噬細胞和T細胞浸潤及其臨床病理意義[J].實用醫學雜志,2015，31(2)：256-258.

Objective To analyze the relationship between the expression of tumor inf i ltrating T lymphocytes in breast cancer and prognosis. Methods The clinical data of 100 patients with breast cancer

from March 2013 to March 2015 were analyzed. The expression of CD3+T, CD4+T, CD8+T lymphocytes in the primary foci of breast cancer were detected by immunohistochemistry. The correlation factors were analyzed by COX multiple factors and single factor analysis. Results CD8+T lymphocyte inf i ltration and SBR classif i cation had correlation (P＜0.05). CD4+T lymphocyte inf i ltration and HER -2 expression, SBR grade (P＜0.05), CD3+T lymphocyte inf i ltration and lymph node status, HER-2 expression, PR expression, ER expression, SBR grading, clinical staging, tumor diameter, age, etc. Conclusion CD3+T lymphocyte inf i ltration was found in the primary foci of breast cancer, and the extent of lesion was affected by the inf i ltration of CD8+T lymphocytes and CD4+T lymphocytes, CD3+T, CD4+T, and CD8+T lymphocytes were related to the prognosis of breast cancer.

Tumor inf i ltration; T lymphocyte; Breast cancer; Primary tumor; Prognosis

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.32.009

探討應用免疫組化標記檢測乳腺髓樣癌周邊淋巴細胞亞群及臨床意義 (G220142SF274)

江西 341000 江西省贛州市市立醫院病理科 （鄭益紅）342700 江西省贛州市石城縣人民醫院普外科 （溫美福） 341000 江西贛州市立醫院胸外科（葉新橋） 贛州市立醫院病理科（鄒欣 鄧儲婷）