microRNA—130a抑制KGN細胞FOXL2基因的表達及對細胞增殖的影響

李亞玲 張偉 梁惠宇 周陸陸 姚永明 唐勝建

[摘要]目的：研究外源性microRNA-130a在卵巢顆粒細胞KGN中過表達對FOXL2基因表達的影響，探索microRNA-130a對KGN細胞增殖的影響。方法：人工設計合成靶向FOXL2基因的microRNA-130a模擬物，脂質體法將microRNA-130a模擬物轉染入KGN細胞中，Trizol法和RIPA蛋白裂解法分別獲取高純度的細胞總RNA和總蛋白，實時熒光定量聚合酶聯反應（FQ-PCR）檢測microRNA模擬物轉染后細胞中FOXL2基因mRNA表達水平，Western Blot檢測FOXL2蛋白表達水平，四甲基偶氮唑鹽法（MTT）檢測microRNA-130a轉染后KGN細胞的增殖情況。 結果：成功轉染KGN細胞后，陰性對照組FOXL2基因mRNA和蛋白的表達水平與空白對照組相比無明顯的差異（P>0.05），miR-130a轉染組能顯著抑制FOXL2 mRNA和蛋白的表達，與空白對照組和陰性對照組相比均有統計學差異（p<0.05）。MTT法檢測各組KGN細胞的OD值及細胞增值率，microRNA-10a轉染后能明顯促進KGN細胞的增殖，與與空白對照組和陰性對照組相比均有統計學差異（P<0.05）。結論：外源性的miR-130a對FOXL2基因mRNA和蛋白表達有明顯的抑制作用，且能明顯促進KGN細胞的增殖。

[關鍵詞] miR-130a；轉染；KGN細胞：FOXL2；基因表達調控；細胞增殖

[中圖分類號]Q813.1

[文獻標志碼]A [文章編號]1008-6455（2016）01-0030-04

FOXL2是叉頭框轉錄因子家族成員之一，主要表達在眼周、卵巢和垂體細胞中，該基因最早由Crisponi作為小瞼裂綜合征（BPES，Blepharophimosis Syndrome，MIM： 110100）及卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）的候選基因被克隆定位Ⅲ。小瞼裂綜合征是一種常染色體顯性遺傳病，臨床上以瞼裂狹小，上瞼下垂，反向性內眥贅皮和內眥遠距為主要征象，BPES根據是否存在卵巢早衰分為兩型，I型合并有卵巢早衰（premature ovarianfailure，POF），II型只表現為眼瞼畸形，超過2/3的BPES患者攜帶有FOXL2的基因內突變，此外FOXL2的雜合突變還能導致卵巢功能早衰和女性不孕。FOXL2作為轉錄因子功能的發揮需要FOXL2基因本身的磷酸化激活，發生FOXL2基因突變的體細胞FOXL2功能失活，研究證實FOXL2基因突變能夠促進細胞的增殖，以及抑制細胞的凋亡。