破壁前后的松花粉質量鑒別研究

阮偉萬 陳前進

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破壁前后的松花粉質量鑒別研究

阮偉萬 陳前進

【摘要】目的 對破壁前后的松花粉進行質量鑒別研究。方法 采用物理方法觀察對比破壁前后的松花粉顏色、氣味、味道、狀態以及用電鏡掃描顯微狀況，采用化學方法檢測破壁前后松花粉的總黃酮、總多糖。結果 用物理法水試及顯微鑒別對比兩者明顯特征，可以區別破壁前后的產品，化學方法檢測結果也能明顯區別破壁前后的產品質量。結論 普通消費者可用簡單的水試法快速鑒別破壁前后的松花粉，而對于專業的研究人士則可以通過顯微及化學成分測定法進行鑒別，更具科學性。

【關鍵詞】松花粉；質量鑒別；破壁；黃酮；多糖；顯微鑒別

廣東省臺山市中醫院，廣東江門 529200

松花粉為松科植物馬尾松、油松或同屬數種植物的干燥花粉。春季花剛開時，采摘花穗，曬干，收集花粉，除去雜質所得。松花粉營養物質非常豐富，含有人類所需的各種氨基酸、維生素物質以及豐富的多糖類、黃酮化合物、甾醇等，同時，也是目前市場上唯一可以食用的非蜂源性天然花粉。與其他種類來源的植物花粉相比，松花粉口感好，氣味也有淡淡的松子香味，且易于接受。松花粉從幾千年開始，就是人類最喜愛的、老少皆宜的益智長壽型特殊營養食品之一。中國衛生管理部門在早期也確認了松花粉為新資源食品。據相關研究報道[1]，松花粉在增強人體抵抗力、改善心腦血管疾病、保護肝臟、促進人體皮膚新陳代謝、抗衰老、抗氧化等方面具有顯著的效果。因此，松花粉的市場需求逐年增大。但是由于松花粉特有的結構，功效營養物質被包含在堅實的細胞壁內，要充分利用松花粉的所有營養成分，必須將其外壁破壞。由于破壁需要特殊的設備以及破壁帶來成本的增加，某些不法廠商因此常常以未破壁產品冒充已破壁產品，欺騙消費者。對于普通消費者來說，在僅有的非專業知識情況下，如何準確判別兩者，非常重要。筆者從宏觀、微觀方法及特征成分含量檢測對破壁前后的松花粉進行鑒別研究，主要目的為普通消費者和中藥專業鑒定工作者提供一種更全面的鑒別方法。

1 儀器與試劑

1.1 試劑 松花粉，購自廣州中藥飲片廠。蘆丁：中國藥品生物制品檢定所，批號100080-201409；D-無水葡萄糖：中國藥品生物制品檢定所，批號110833-201205；水合氯醛，苯酚、硫酸、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純。

1.2 儀器 紫外-可見分光光度計：島津UV-1240；天平（精確度為0.1 mg）；生物顯微鏡，帶掃描功能：奧林巴斯CX41RF；BRAND移液槍。

2 實驗方法

2.1 物理鑒別[2]外形：取樣品，平攤于白色底板上目測觀察；顏色：取樣品，平攤于白色底板上目測觀察；性狀：將花粉團在手里輕輕搓；氣味：取樣品，鼻聞口嘗；水試：取樣品，輕輕放入一杯純水中，觀察記錄現象。

2.2 顯微鑒別 樣品加水，配制成1:100的溶液，于漩渦混合器上振蕩均勻。取干凈載玻片，用移液槍吸取少量液體，加1滴10%的水合氯醛于酒精燈上加熱透化，然后加甘油適量蓋上蓋玻片，置光學顯微鏡下觀察。

2.3 化學鑒別

2.3.1 多糖測定[3]標準曲線的制備：分別精密量取0.1 mg/ml的無水葡萄糖對照品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 ml，置10 ml具塞試管中，用純水補足至余量2.0 ml。然后分別加水補至2.0 ml，精密加入5%苯酚溶液l ml（現配），搖勻，迅速精密加入98%濃硫酸5 ml，搖勻，顯色放置10 min，于40 ℃水浴中保溫15 min，取出后置冰水中冷卻至室溫，以相應的試劑為空白對照，按照紫外-可見分光光度法，在490 nm的波長處測定吸光度值，以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。

2.3.2 樣品的測定 取待測樣品1.0 g，精密稱定，加乙醚100 ml，加熱回流1 h，靜置，放冷，小心棄去乙醚液，殘渣置水浴上揮盡乙醚。加入100 ml 80%乙醇，100 ℃加熱回流1 h，離心過濾，離心沉淀與濾渣及過濾器用熱80%乙醇30 ml分次洗滌，最終藥渣連同濾紙置250 ml圓燒瓶中，加入純水150 ml，100 ℃回流提取2 h。提取完后濾過，用少量熱水洗滌過濾器，合并濾液與洗液，放冷，用純水定容至250 ml，搖勻后適量稀釋，精密量取稀釋液l ml，置具塞試管中，加水1.0 ml，按照標準曲線項下方法，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量（mg)，計算，即得。

2.3.3 黃酮的測定[4]標準曲線的制備：精密量取0.2 mg/ml的蘆丁對照品溶液0、1、2、3、4、5、6 ml，分別置于25 ml容量瓶中，各加水至6.0 ml，加5%亞硝酸鈉溶液1 ml，混勻，放置6 min后再各加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，放置6 min加1%氫氧化鈉試液10 ml，最后加水至刻度，搖勻，放置15 min。于510 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，對照品濃度（mg/ml）為橫坐標，繪制標準曲線，并求出標準線性方程。

樣品黃酮含量的測定：精密量取1.0 ml樣品溶液（若試樣中的黃酮濃度高則應適當稀釋再取1.0 ml用于顯色測定），置25 ml容量瓶中，按照標準曲線制備項下方法，依法測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中含蘆丁的重量（μg），計算，即得。

3 結果

3.1 物理鑒別 外觀性狀對比結果見表1。破壁前顏色淺黃色，破壁后淺較深，偏褐色。半年期存放的與剛破壁后的樣品，顏色無區別。破壁前樣品為淺黃色細粉末，手搓有滑膩感，較為松散，在白板上流動性比較好；而破壁后的松花粉稍有黏附性，易吸潮，不能飛散。在氣味方面，破壁前樣品有松花粉特有的香味，和松子的味道比較相似。但是，自然條件下存放半年以上產品稍有酸敗味；破壁后產品氣味較濃，破壁后半年以上產品酸敗味較濃烈。水試對比結果見表1。破壁產品懸浮水中，攪拌后現象更明顯，部分沉于水底。破壁前產品則飄浮水上面、攪拌懸浮很少、停止攪拌后立即浮于水面。

表1 物理鑒別結果

3.2 顯微鑒別結果 結果顯示，破壁前后在放大500倍情況下，有非常明顯的區別。未破壁的自然松花粉是類圓形，細胞體兩端各上附著1個膨大氣囊。經破壁后的樣品，只可見細胞碎片（圖1～3）。

圖1 破壁前（500倍）

圖2 破壁前（1000倍）

圖3 破壁后（500倍）

3.3 化學鑒別 從表2可以看出，破壁前后多糖及黃酮含量差別明顯。同樣的產品，在不同存放時期內，含量會稍有變化，主要是由于產品暴露在空氣中時，有效成分發生氧化分解反應，含量隨之而降低。

表2 黃酮、多糖檢測結果

4 討論

因為破壁只是用物理或化學破壞細胞壁的過程，對其他成分則無影響，所以破壁前后的的松花粉在營養物質種類是一致的，但是在人體生物利用度上有所區別。有關松花粉的研究揭示，天然松花粉進行破壁處理后，能使其中的營養成分得以充分、快速釋放。所以，破壁后的松花粉營養吸收更加快捷，吸收率更高。破壁松花粉由于細胞壁被完全破碎，細胞內部的有效成分多糖黃酮等暴露，其顏色較細胞壁表面深，所以破壁粉的顏色偏淡黃褐色。

由于顏色、氣味、外觀主觀能動性大，專業人士在沒有對比的情況下，很難做出明確的判斷。但是，用水試法鑒別：破壁后的松花粉放入水中攪拌后基本懸浮在水中；而沒有破壁的松花粉放入水中攪拌后靜置1～5 min后會漂浮在水面上，在水的中間及底部基本沒有花粉。根據這一特點，普通消費者可輕易的鑒別出破壁與否。造成這種現象發生的主要原因是破壁同時將松花粉細胞兩端的氣囊破碎緣故。而專業的研究人士則可以通過檢測有效成分或顯微鑒別，來區分鑒別兩者。

松花粉中活性多糖是近年來的研究重點，其主要具有抗腫瘤、抗氧化等功能。松花粉中黃酮類化合物同樣含量豐富，主要為黃酮、黃酮醇類、二氫黃酮醇類和少量黃院醇類，此類化合物具有抗炎、抗氧化等作用。所以，通過檢測這兩者成分，可以更確切了解破壁前后的產品質量。

參考文獻

[1] 鄧倩,童珊珊,丁麗霞.松花粉活性成分分析方法及藥理作用的研究進展[J].藥物分析雜志,2012,32(1):173-178.

[2] 肖安菊.松花粉摻偽鑒別[J].黃石理工學院學報,2010,26(2): 40-42.

[3] 魏凱.泰山松花粉多糖的提取及其免疫增強功能的研究[D].泰安:山東農業大學,2011:12-60.

[4] 陳勝發,彭修娟.松花粉中總黃酮含量測定方法的研究[J].科技視界,2014(16):32-32.

作者簡介：阮偉萬（1980.10-），主管中藥師。E-mail：rww8010@163.com

【中圖分類號】R927.11

【文獻標志碼】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.03.004