甲醛經(jīng)口染毒致小鼠臟器損傷和炎癥反應(yīng)的研究

趙　云,尤會(huì)會(huì),沈世萍,郭　晴,梅宇飛,李金泉,朱雨晴,李瀟瀟,丁書茂,楊　旭(華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,遺傳調(diào)控與整合生物學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北 武漢 430079)

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甲醛經(jīng)口染毒致小鼠臟器損傷和炎癥反應(yīng)的研究

趙云,尤會(huì)會(huì),沈世萍,郭晴,梅宇飛,李金泉,朱雨晴,李瀟瀟,丁書茂,楊旭?(華中師范大學(xué)生命科學(xué)
學(xué)院,遺傳調(diào)控與整合生物學(xué)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,湖北 武漢 430079)

摘要：為探討在單獨(dú)染毒和卵清蛋白(OVA)聯(lián)合致敏的條件下,甲醛灌胃染毒對(duì)小鼠造成的毒性效應(yīng),將雄性Balb/c小鼠隨機(jī)分為7組:對(duì)照組(蒸餾水組);OVA致敏組;2mg/(kg?d) FA(甲醛)組;20mg/(kg?d) FA組;200mg/(kg?d) FA組;200mg/(kg?d )FA+ OVA組;200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT(褪黑素)組,以蒸餾水和不同濃度甲醛溶液灌胃,連續(xù)21d. OVA致敏組,200mg/(kg?d) FA+ OVA組,200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT組在第6,13,20d進(jìn)行腹腔注射OVA致敏;此外,200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT組,每天用1.0mg/mL褪黑素灌胃小鼠(小鼠灌胃劑量10mg/(kg?d)),連續(xù)21d.檢測(cè)肝,腎和肺組織中活性氧自由基(ROS),丙二醛(MDA)和還原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并采用ELISA法檢測(cè)肝組織中IL-4和IFN -γ的水平.結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,甲醛濃度為200mg/(kg?d),小鼠肝臟ROS含量增加(P＜0.05),MDA含量增加以及小鼠腎臟GSH含量降低,均有顯著性差異(P＜0.05).OVA作為致敏劑,甲醛濃度為200mg/(kg?d)時(shí),肝組織中IL-4(Interleukin-4)含量增加(P＜0.01),10mg/(kg?d)褪黑素能夠降低200mg/(kg?d)甲醛+OVA染毒小鼠肝臟內(nèi)ROS含量(P＜0.05).綜上,200mg/(kg?d)甲醛灌胃染毒能使小鼠產(chǎn)生氧化損傷和炎癥反應(yīng), ROS, MDA水平上升(P＜0.05),GSH水平下降(P＜0.05),肝臟中細(xì)胞因子IL-4水平上升(P＜0.01), IFN -γ水平下降(P＜0.05).

關(guān)鍵詞：甲醛；卵清蛋白；小鼠；氧化損傷；炎癥反應(yīng)

* 責(zé)任作者, 教授, yangxu@mail.ccnu.edu.cn

環(huán)境中甲醛的主要污染來(lái)源是有機(jī)合成,化工,合成纖維,染料,木材加工及制漆等行業(yè)排放的廢水,廢氣等.某些有機(jī)化合物在環(huán)境中降解也產(chǎn)生甲醛,如氯乙烯的降解產(chǎn)物也包含甲醛.流行病學(xué)和動(dòng)物研究表明,甲醛暴露均可使機(jī)體產(chǎn)生多種毒理效應(yīng),包括免疫毒性,神經(jīng)毒性,生殖毒性,遺傳毒性[1-4].甲醛還可導(dǎo)致呼吸道和眼部刺激作用,致敏作用,免疫毒性和各組織器官氧化損傷[5].氧化損傷是機(jī)體在暴露于毒性物質(zhì)后,產(chǎn)生過(guò)量的活性氧自由基,過(guò)量的自由基直接攻擊生物大分子產(chǎn)生的損傷[6].甲醛的氧化損傷作用主要體現(xiàn)在其對(duì)抗氧化系統(tǒng)的抑制作用,使機(jī)體內(nèi)的自由基不能及時(shí)清除而堆積,最終對(duì)機(jī)體產(chǎn)生廣泛的損害作用[7].活性氧ROS在炎癥部位誘導(dǎo)組織產(chǎn)生損傷,與氣道炎癥的發(fā)病密切相關(guān). Reidel等[8]研究表明,豚鼠連續(xù)超過(guò)5d的0.4mg/kg甲醛暴露,顯著促進(jìn)了吸入卵清蛋白(OVA)過(guò)敏原的致敏作用.Tarkowski等[9]發(fā)現(xiàn)經(jīng)OVA滴鼻致敏的小鼠持續(xù)10d暴露于1.6mg/kg甲醛能夠增加OVA特異性抗體IgE的產(chǎn)生.經(jīng)口暴露途徑往往因?yàn)槠湓谌梭w的多種暴露途徑中并非十分重要而常被忽視,但是由于食品中含有的甲醛可能使很多人經(jīng)口腔攝入甲醛,因而甲醛的經(jīng)口暴露途徑對(duì)人體健康的危害絕不能被低估.雖然上述實(shí)驗(yàn)對(duì)吸入甲醛致機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷及炎癥反應(yīng)進(jìn)行研究,但通過(guò)甲醛經(jīng)口染毒致小鼠臟器損傷及產(chǎn)生過(guò)敏性體質(zhì)的相關(guān)研究尚未見報(bào)道.干擾素γ(IFN-γ)和白細(xì)胞介素4(IL-4)分別是Th2型和Th1型過(guò)敏性炎癥反應(yīng)的細(xì)胞因子,測(cè)定肝臟中的IL-4和IFN-γ的含量,可反映甲醛對(duì)小鼠造成的過(guò)敏性炎癥反應(yīng).本實(shí)驗(yàn)以雄性Balb/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,采用灌胃和腹腔注射的方法進(jìn)行甲醛和OVA聯(lián)合染毒,測(cè)定肝,腎和肺組織中活性氧自由基(ROS),丙二醛(MDA)和還原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并采用ELISA法檢檢測(cè)肝組織中IL-4和IFN-γ的含量,以期為進(jìn)一步探討通過(guò)消化道途徑進(jìn)入機(jī)體的甲醛所造成的危害及其毒作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù).

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用湖北省疾病控制中心供給的SPF級(jí)雄性Balb/c小鼠[5～6周齡,(22±1.5) g].購(gòu)買后飼養(yǎng)于華中師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心的屏障環(huán)境中,給予充足的飲水和飼料,料購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心.5d適應(yīng)性飼養(yǎng)之后進(jìn)行實(shí)驗(yàn).

1.2試劑與儀器

試劑包括甲醛(FA)原液(Sigma, 4%),卵清蛋白(OVA, Sigma),氫氧化鋁膠體(Sigma,分析純),褪黑素(Melatonin, MT,國(guó)奧聯(lián)信),硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid, TBA,分析純,國(guó)藥集團(tuán)),2’, 7’-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA 熒光染料, 99.9%,Sigma),微量還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒(南京建成),福林酚試劑盒(南京建成),小鼠IL-4酶聯(lián)免疫試劑盒(eBioscience, USA),IFN-γ試劑盒(eBioscience, USA).儀器包括全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(Bio-Tek, USA),-70℃冰箱,低溫冷凍離心機(jī)(Eppendorf-5415R),FL×800熒光酶標(biāo)儀(Bio-Tek, USA),三用電熱恒溫水箱,超聲處理器.

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1溶液配制甲醛溶液:每天給小鼠灌胃的甲醛溶液體積(mL)與其體重(g)比值為0.01,灌胃濃度為2mg/(kg?d),20mg/(kg?d),200mg/(kg?d).經(jīng)計(jì)算,用蒸餾水將4%甲醛原液分別稀釋200,20,2倍可得以上濃度的甲醛染毒液;OVA致敏液: 1.67mg OVA+58.4mg Al(OH)3+10mL生理鹽水,超聲溶解;生理鹽水:0.9% NaCl溶液;褪黑素(MT):小鼠灌胃劑量10mg/(kg?d).稱取一定量的褪黑素粉末,用2%的無(wú)水乙醇助溶,再用生理鹽水定容至一定體積,褪黑素溶液濃度為1mg/mL,現(xiàn)用現(xiàn)配.

1.3.2染毒方案將49只Balb/c小鼠隨機(jī)分為7組,每組7只,分別為:A.蒸餾水(DI water)組; B. OVA致敏組;C. 2mg/(kg?d) FA組;D. 20mg/(kg?d) FA組;E. 200mg/(kg?d) FA組;F. 200mg/(kg?d) FA+ OVA組;G. 200mg/(kg?d) FA+ OVA + MT組(圖1).采用灌胃法,分別用蒸餾水和不同濃度甲醛溶液對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃,連續(xù)染毒21d. OVA致敏組, 200mg/(kg?d)FA+OVA組,200mg/kg/d FA+ OVA +MT組小鼠分別在第6,13,20d通過(guò)腹腔注射OVA致敏;200mg/(kg?d) FA+ OVA +MT組小鼠用濃度為1mg/mL褪黑素灌胃,即小鼠每日攝入褪黑素劑量為10mg/(kg?d),連續(xù)21d.灌胃容量為0.01mL/g.

圖1　實(shí)驗(yàn)分組及染毒流程Fig.1　Experiment groups and exposure process

1.3.3組織勻漿制備第22d采用脫頸法處死小鼠,立即摘取肝、腎、肺3個(gè)臟器,在冰冷的PBS (PH7.5)中漂洗,以去除表面血跡.在定型濾紙上拭干,稱重,加入一定量PBS(pH 7.5),用玻璃勻漿器在冰上制成10%的組織勻漿,將勻漿液離心(10000r/min, 10min,4℃),取上清,將上清液分裝后凍存于-70℃冰箱,用于指標(biāo)的測(cè)定.

1.3.4各項(xiàng)生物學(xué)指標(biāo)的測(cè)定ROS含量的測(cè)定:取一定量10%勻漿液,加入適量PBS稀釋,肝,腎組織勻漿稀釋2倍,肺組織勻漿不稀釋; DCFH-DA熒光染料用PBS稀釋1000倍.取100μL稀釋液于酶標(biāo)板中排列,并加入100μL DCFH-DA熒光染料染色,避光反應(yīng)10min. DCFH-DA能轉(zhuǎn)化生成DCFH,在活性氧的存在條件下,DCFH 被氧化成熒光物質(zhì)DCF,用FL× 800熒光酶標(biāo)儀在激發(fā)波長(zhǎng)488nm和發(fā)射波長(zhǎng)525nm下檢測(cè)DCF的吸光值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出ROS的含量.MDA含量的測(cè)定:MDA含量的測(cè)定采用硫代巴比妥酸(TBA)法,MDA 可與TBA 縮合,形成紅色產(chǎn)物,且在532nm處有最大吸收峰.取100μL 10%的勻漿液,加入400μL 0.6%TBA溶液,沸水浴15min.取上清液,離心(10000r/min,10min,4℃),取上清液200μL于酶標(biāo)板,用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè),分別在450、532和600nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,按照公式C=[6.45 (OD532nm-OD600nm)-0.56OD450nm]/prot計(jì)算出MDA含量(μmol/mg prot).GSH含量的測(cè)定:用還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒來(lái)檢測(cè)各組織中的濃度,具體做法按照試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行操作.IL-4和IFN-γ含量的測(cè)定:通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)肝臟組織中的IL-4和IFN-γ含量,靈敏度分別為4pg/mL和15pg/mL.具體做法按照ELISA試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行操作.

1.3.5統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示.Origin 6.1,Graphpad Prism5統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,應(yīng)用單因素方差分析(one-way ANOVA)檢驗(yàn)組間均值的差異,之后采用LSD檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較,顯著水平α定為P＜0.05.

2　結(jié)果

2.1體重變化及臟體比

圖2　各組小鼠體重變化Fig.2　Weight changes of mice in different groups

2.1.1體重變化如圖2所示,與對(duì)照組相比,OVA組,2FA組和20FA組的小化,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);200FA組和200FA+OVA組小鼠體重隨著染毒時(shí)間增長(zhǎng)降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05).

2.1.2臟體比如圖3所示,與對(duì)照組相比,OVA 組,2FA組和20FA組的小鼠肺、肝、腎三個(gè)臟器的臟體比沒(méi)有明顯差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05); 而200FA組和200FA+OVA組小鼠肺的臟體比增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01),肝的臟體比增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);腎臟體比無(wú)明顯變化,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05).

圖3　各組小鼠臟體比Fig.3　Organ-body ratios of mice in different groups

2.2臟器氧化損傷

圖4　各組小鼠臟器ROS含量Fig.4　The ROS content in different organs in different groups

2.2.1ROS含量變化如圖4所示,不同實(shí)驗(yàn)組小鼠各臟器ROS含量變化趨勢(shì)相同,均隨染毒劑量增加而上升.與對(duì)照組相比,小鼠肺部各不同處理組間ROS含量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05).在小鼠肝臟中,甲醛單獨(dú)染毒組20FA組,ROS含量無(wú)顯著變化(P＞0.05);OVA組,200FA+OVA和200FA+OVA+MT組與對(duì)照組相比,ROS含量增加(P＜0.01),200FA組ROS含量增加(P＜0.05),在小鼠腎臟中, 200FA,200FA+OVA組ROS含量增加(P＜0.01), OVA組,200FA+OVA+MT組ROS含量增加(P＜0.05).與OVA組相比,200FA+OVA組小鼠腎臟中ROS含量增加(P＜0.01).與200FA+ OVA組相比,200FA+OVA+MT組的小鼠肝臟內(nèi)ROS含量下降(P＜0.05),腎臟內(nèi)ROS含量下降(P＜0.01).

圖5　各組小鼠臟器MDA含量Fig.5　The MDA content in different organs in different groups

2.2.2MDA含量變化如圖5所示,不同處理組小鼠各臟器MDA含量的變化趨勢(shì)基本一致.與對(duì)照組相比,OVA致敏組小鼠肺部MDA含量上升(P＜0.05),肝臟MDA含量增加(P＜0.01); 200FA組小鼠肺部和肝臟MDA含量高于對(duì)照組(P＜0.05);200FA+OVA組中,小鼠各臟器MDA含量均高于對(duì)照組(P＜0.05),肝臟MDA含量極顯著增加 (P＜0.01);200FA+OVA+MT組中,小鼠各臟器MDA含量均高于對(duì)照組,但只有肝臟含量增加具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05).相比于200FA+OVA 組,給予MT的小鼠臟器內(nèi)MDA含量有所下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與OVA致敏組相比,200FA+OVA組MDA含量無(wú)明顯增加(P＞0.05).

圖6　各組小鼠臟器GSH 含量Fig.6　The GSH content in different organs in different groups

2.2.3GSH含量變化結(jié)果如圖6所示,與ROS 和MDA含量相比,不同處理組小鼠各臟器內(nèi)GSH含量變化呈相反趨勢(shì).其中對(duì)照組含量最高,OVA致敏組小鼠肝,腎GSH含量低于對(duì)照組(P＜0.05);與對(duì)照組相比,2FA組肺和肝臟內(nèi)GSH含量無(wú)明顯變化(P＞0.05);200FA組小鼠肺部GSH含量降低(P＜0.05),肝臟GSH含量降低(P＜0.05);200FA+OVA組小鼠肺和肝臟GSH含量均低于對(duì)照組(P＜0.05),腎臟GSH含量低于對(duì)照組(P＜0.01);與OVA致敏組相比,200FA+OVA組小鼠肺部GSH含量降低(P＜0.05).與200FA+OVA組相比,200FA+OVA+MT組小鼠臟器內(nèi)GSH含量沒(méi)有顯著變化(P＞0.05).

圖7　各組小鼠肝臟IL-4、IFN-γ 含量Fig.7　The IL-4and IFN-γ content in the liver of mice in different groups

2.3肝臟中細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ的含量變化IL-4結(jié)果見圖7a,與對(duì)照組相比,OVA致敏組, 200FA 組,200FA+OVA組,200FA+OVA+MT組小鼠肝臟IL-4含量顯著增高(P＜0.01);200FA+ OVA組小鼠肝臟IL-4含量高于OVA致敏組(P＜0.05);與200FA+OVA組相比,200FA+ OVA+ MT組的小鼠臟器內(nèi)IL-4含量有所下降,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05). IFN-γ結(jié)果見圖7b,與對(duì)照組相比,各不同處理組小鼠肝臟內(nèi)IFN-γ含量無(wú)顯著變化(P＞0.05);與OVA致敏組相比, 200FA+ OVA組小鼠肝臟IFN-γ含量變化無(wú)顯著變化(P＞0.05);相比于200FA+OVA組,200FA+ OVA+ MT組小鼠肝臟IFN-γ含量變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05).

3　討論

3.1致敏劑的選擇

OVA作為一種常見的過(guò)敏原,被廣泛應(yīng)用于多種動(dòng)物模型中[10].很多研究中,OVA用來(lái)構(gòu)建動(dòng)物哮喘模型.Qiao等[13]利用OVA免疫大鼠成功構(gòu)建了Wistar大鼠哮喘模型,進(jìn)而探究氣態(tài)甲醛的佐劑作用; Liu等[14]在Qiao的工作基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探討了甲醛對(duì)OVA構(gòu)建的哮喘小鼠超敏反應(yīng)的佐劑效應(yīng).楊劍婷等[13]用OVA構(gòu)建的小鼠致敏模型作為陽(yáng)性對(duì)照,對(duì)白果蛋白過(guò)敏動(dòng)物模型進(jìn)行試驗(yàn)研究.本研究也選取了OVA這種常見致敏劑用以構(gòu)建Balb/c小鼠致敏模型.

3.2甲醛的氧化損傷作用

甲醛本身及代謝過(guò)程中均可產(chǎn)生活性氧自由基ROS,ROS可直接與DNA分子發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致DNA鏈斷裂,堿基修飾和DNA蛋白交聯(lián)等氧化損傷[5].同時(shí)甲醛能夠抑制超氧化物歧化酶(SOD)活性,使過(guò)量自由基不能及時(shí)清除,間接損傷生物大分子和組織[14].正常情況下,機(jī)體存在完善的自由基清除系統(tǒng),使體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與消除處于動(dòng)態(tài)平衡中,若機(jī)體受到外在刺激,例如甲醛導(dǎo)致發(fā)生氧化應(yīng)激,從而自由基不能被及時(shí)清除,過(guò)量的自由基攻擊靶分子,可造成組織,器官及機(jī)體不同程度的損傷[14-15].本實(shí)驗(yàn)中,高濃度甲醛造成小鼠體重下降,說(shuō)明甲醛對(duì)小鼠的機(jī)體造成一定程度的損傷.過(guò)量的ROS可攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸,引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用并形成脂質(zhì)過(guò)氧化物,而MDA則是脂質(zhì)過(guò)氧化最終的分解產(chǎn)物[16].ROS還可以與還原性谷胱甘肽(GSH)結(jié)合形成硫代半縮醛,導(dǎo)致GSH損竭,使機(jī)體抗氧化能力顯著降低[15].本研究表明高濃度甲醛(200mg/(kg?d))可以使小鼠肝臟中ROS含量大大增多,而在200FA+OVA組中含量達(dá)到最大,并顯著高于OVA組,可見高濃度甲醛不僅造成小鼠肝臟氧化損傷,還能加重已有的損傷,MDA的含量變化也呈現(xiàn)類似結(jié)果,GSH測(cè)定結(jié)果恰好相反,其含量隨染毒濃度增高而下降,反映出機(jī)體抗氧化能力顯著降低.

3.3甲醛的致敏作用

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,OVA致敏組的IL-4含量顯著增加,而對(duì)該組小鼠給予高濃度甲醛[200mg/(kg?d)]的小鼠,IL-4含量增加極顯著,而同樣條件下,IFN-γ的含量沒(méi)有明顯的變化.這樣的結(jié)果表明,甲醛的暴露更多導(dǎo)致的是Th2型反應(yīng),并且能夠促進(jìn)和增強(qiáng)OVA已致敏小鼠產(chǎn)生Th2型反應(yīng).ROS被視為一種能造成組織損傷的炎癥介質(zhì),可能參與干擾炎癥細(xì)胞,諸如嗜酸性粒細(xì)胞Th1/Th2型過(guò)敏反應(yīng)的平衡[17].實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,200FA+OVA組小鼠肝臟中ROS含量最高,同時(shí)IL-4的含量也最高.該結(jié)果表明,ROS含量的增加可能會(huì)導(dǎo)致Th2型細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào).

3.4 褪黑素的抗氧化作用

褪黑素是生物體內(nèi)一種常見的分子,具有多種功能,最重要的特點(diǎn)之一即是一種良好的抗氧化劑[18].實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,甲醛和OVA聯(lián)合染毒的小鼠灌胃褪黑素能夠使小鼠各臟器內(nèi)ROS和MDA含量下降,而使GSH含量上升,變化不顯著可能是因?yàn)楸敬螌?shí)驗(yàn)當(dāng)中使用的褪黑素濃度不高所致.其發(fā)揮抗氧化作用可能是因?yàn)镸T吲哚環(huán)上的5-甲氧基極大增強(qiáng)了MT捕獲自由基的能力,而N-乙酰基則保護(hù)了MT不被單胺氧化酶降解,上述兩個(gè)基團(tuán)是MT清除包括氧自由基在在內(nèi)的活性氧的必需基團(tuán)[15].同時(shí),可能由于褪黑素減少了自由基的產(chǎn)生,相對(duì)增加了組織中GSH濃度,自由基的減少使SOD和GSH- PX的消耗減少,相應(yīng)提高了SOD和GSH- PX的活性,而SOD和GSH- PX活性的提高又可以進(jìn)一步清除自由基,降低自由基對(duì)機(jī)體的損傷,這樣形成一個(gè)良性循環(huán)[13].

4　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,高濃度甲醛[200mg/ (kg?d)]暴露可對(duì)小鼠臟器造成明顯的氧化損傷,并提高小鼠肝臟IL-4表達(dá)水平(P＜0.01),能夠引發(fā)Th2型過(guò)敏性炎癥反應(yīng);對(duì)于OVA致敏小鼠,高濃度甲醛[200mg/(kg?d)]可以顯著性地加重其臟器的氧化損傷程度以及Th2型炎癥反應(yīng);小鼠不同臟器對(duì)甲醛暴露產(chǎn)生的損傷和過(guò)敏反應(yīng)程度不同,其中肝臟,腎臟較為嚴(yán)重;褪黑素在一定程度上可以保護(hù)機(jī)體,減弱機(jī)體因甲醛暴露所致的損傷.

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李克強(qiáng):加大環(huán)境治理力度 重拳治理大氣霧霾

2016年3月5日上午9時(shí),十二屆全國(guó)人大四次會(huì)議在人民大會(huì)堂開幕,國(guó)務(wù)院總理李克強(qiáng)作政府工作報(bào)告.

李克強(qiáng)在報(bào)告2016年重點(diǎn)工作時(shí)指出,加大環(huán)境治理力度,推動(dòng)綠色發(fā)展取得新突破.治理污染、保護(hù)環(huán)境,事關(guān)人民群眾健康和可持續(xù)發(fā)展,必須強(qiáng)力推進(jìn),下決心走出一條經(jīng)濟(jì)發(fā)展與環(huán)境改善雙贏之路.

重拳治理大氣霧霾和水污染.今年化學(xué)需氧量、氨氮排放量要分別下降2%,二氧化硫、氮氧化物排放量分別下降3%,重點(diǎn)地區(qū)細(xì)顆粒物(PM2.5)濃度繼續(xù)下降.著力抓好減少燃煤排放和機(jī)動(dòng)車排放.加強(qiáng)煤炭清潔高效利用,推進(jìn)以電代煤、以氣代煤.全面實(shí)施燃煤電廠超低排放和節(jié)能改造.加快淘汰不符合強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的燃煤鍋爐.增加天然氣供應(yīng),完善風(fēng)能、太陽(yáng)能、生物質(zhì)能等發(fā)展扶持政策,提高清潔能源比重.鼓勵(lì)秸稈資源化利用,減少直接焚燒.全面推廣車用燃油國(guó)五標(biāo)準(zhǔn),淘汰黃標(biāo)車和老舊車380萬(wàn)輛.在重點(diǎn)區(qū)域?qū)嵭写髿馕廴韭?lián)防聯(lián)控.全面推進(jìn)城鎮(zhèn)污水處理設(shè)施建設(shè)與改造,加強(qiáng)農(nóng)業(yè)面源污染和流域水環(huán)境綜合治理.加大工業(yè)污染源治理力度,對(duì)排污企業(yè)全面實(shí)行在線監(jiān)測(cè).強(qiáng)化環(huán)境保護(hù)督察.新修訂的環(huán)境保護(hù)法必須嚴(yán)格執(zhí)行,對(duì)超排偷排者必須嚴(yán)厲打擊,對(duì)姑息縱容者必須嚴(yán)肅追究.

大力發(fā)展節(jié)能環(huán)保產(chǎn)業(yè).擴(kuò)大綠色環(huán)保標(biāo)準(zhǔn)覆蓋面.支持推廣節(jié)能環(huán)保先進(jìn)技術(shù)裝備,廣泛開展合同能源管理和環(huán)境污染第三方治理.加大建筑節(jié)能改造力度,加快傳統(tǒng)制造業(yè)綠色改造.開展全民節(jié)能、節(jié)水行動(dòng),推進(jìn)垃圾分類處理,健全再生資源回收利用網(wǎng)絡(luò),把節(jié)能環(huán)保產(chǎn)業(yè)培育成我國(guó)發(fā)展的一大支柱產(chǎn)業(yè).

加強(qiáng)生態(tài)安全屏障建設(shè).健全生態(tài)保護(hù)補(bǔ)償機(jī)制.停止天然林商業(yè)性采伐,實(shí)行新一輪草原生態(tài)保護(hù)補(bǔ)助獎(jiǎng)勵(lì)政策.推進(jìn)地下水超采區(qū)綜合治理試點(diǎn),實(shí)施濕地保護(hù)與恢復(fù)工程,繼續(xù)治理荒漠化、石漠化和水土流失.保護(hù)環(huán)境,人人有責(zé).每一個(gè)社會(huì)成員都要自覺(jué)行動(dòng)起來(lái),為建設(shè)美麗中國(guó)貢獻(xiàn)力量.

摘自中國(guó)環(huán)境網(wǎng)

2016-03-05

Organ injure and inflammatory response of mice induced by oral exposure of formaldehyde.

ZHAO Yun, YOU Hui-hui, SHEN Shi-Ping, GUO Qing, MEI Yu-fei, LI Jin-quan, ZHU Yu-qing, LI Xiao-xiao, DING Shu-mao, YANG Xu*. (Hubei Key Laboratory of Genetic Regulation and Integrative Biology, College of Life Science, Central China Normal University, Wuhan 430079, China). China Environmental Science, 2016,36(3)：935～942

Abstract：To explore the effects on mice through administration of formaldehyde (FA) by gavage with or without ovalbumin (OVA), which lead to the inflammation in body, the male Balb/c mice were randomly divided into 7groups: the control group (distilled water group), OVA group, 2mg/(kg?d) FA (formaldehyde) group, 20mg/(kg?d) FA group, 200mg/(kg?d) FA group, 200mg/(kg?d) FA+OVA group and 200mg/(kg?d)FA+OVA+ MT (melatonin) group. Mice were gavaged with distilled water and different concentrations of FA solution respectively for 21 days. The mice in OVA group, 200mg/(kg?d) FA+OVA group and 200mg/(kg?d) FA+OVA+MT group were sensitized with OVA in day 6, 13, 20 by intraperitoneal injection, and the mice in 200mg/(kg?d) FA+OVA+MT group were also challenged with 1mg/mL MT by gavage for 21 days. The contents of ROS, MDA and GSH in liver, kidney and lung tissue homogenate were determined. IL-4and IFN-g concentrations in liver were measured by ELISA kits. The results showed that compared with control group, the livers ROS of mice in 200mg/(kg?d) FA group reached a significant level (P＜0.05), and MDA increased significantly (P＜0.05); GSH content in kidneys decreased significantly (P＜0.05). IL-4 content in livers of mice in 200mg/(kg?d) FA+OVA group significantly increased (P＜0.01). In 200mg/(kg?d) FA+OVA group, the administration of 10mg/(kg?d) MT can reduce ROS in the livers significantly (P＜0.05). In a word, the gavage of 200mg/(kg?d) FA would induce oxidative damage and inflammation in mice. ROS, MDA in 200mg/(kg?d) FA group reached a significant level (P＜0.05), on the contrary, GSH content decreased significantly (P＜0.05). In 200mg/(kg?d) FA+OVA group, IL-4 content in livers of mice significantly increased (P＜0.01), while IFN-g content had no significant change (P＞0.05).

Key words：formaldehyde；ovalbumin；mice；oxidative stress；inflammation

作者簡(jiǎn)介：趙云(1992-),女,山西長(zhǎng)治人,華中師范大學(xué)碩士研究生,研究方向?yàn)樯锘瘜W(xué)與分子毒理學(xué).

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(51136002)

收稿日期：2015-06-19

中圖分類號(hào)：X503.22

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-6923(2016)03-0935-08