山東省濰坊地區水貂阿留申病血清流行病學調查

葛愛民+崔曉娜+李汝春+朱俊平

摘要： 用對流免疫電泳方法對山東省濰坊地區8個水貂規模化養殖場和13個養殖戶的682個送檢樣品進行阿留申病檢測。結果顯示：該地區水貂阿留申病平均陽性率為32.8%，說明濰坊地區水貂阿留申病的感染比較嚴重。其中規模化養殖場平均陽性率為33.3%，散養戶陽性率為32.3%，二者差異不顯著；來自諸城市的269個血清檢樣陽性率為48.7%，明顯高于其他地區，說明諸城市為水貂阿留申病的主要流行地區；對幼齡水貂和成年水貂的陽性檢出率進行比較的結果顯示，水貂阿留申病的感染率未見明顯的差異。

關鍵詞： 山東濰坊地區；水貂阿留申病；流行病學調查；對流免疫電泳

中圖分類號： S858.92 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2016）03-0260-02

水貂阿留申病是由阿留申病毒引起的一種慢性傳染病，特征是終生病毒血癥、持續感染、全身淋巴細胞增生、血清 γ-球蛋白增多、腎小球腎炎、動脈炎和肝炎[1]，我國動物檢疫中屬三類動物疫病[2]。自從上世紀40年代發現該病，國內外檢測陽性率普遍較高，有的地區甚至可達80%[3]。水貂阿留申病可引起水貂死亡，影響種貂繁殖性能和造成毛皮質量下降。

山東省濰坊地區近幾年水貂養殖規模逐年擴大，在很多縣區已成為農民增收、致富的主要養殖項目之一，形成了一重大產業，既有規模化的養殖場，也有管理粗放的小規模散養戶。在大規模、爆發式擴種形勢下，存在著市場波動、品種不良、管理水平差、繁殖性能低等問題，其中水貂阿留申病的危害在本地自養殖水貂開始就一直存在，嚴重影響水貂養殖效益[4]。

阿留申病常用檢測方法有碘凝集試驗、對流免疫電泳試驗、免疫復合物檢測法、PCR方法等。本研究采用對流免疫電泳方法對濰坊地區水貂群進行阿留申病檢測，以了解當地阿留申病的感染情況及危害程度，為養殖場水貂引種檢疫提供參考依據，指導當地水貂阿留申病的防控。

1 材料與方法

1.1 病料來源

山東省濰坊地區8個水貂規模化養殖場和13個養殖戶的682個隨機血清樣本。具體采樣情況見表1。

1.2 儀器與器材

電泳儀（北京市六一儀器廠，DYY-5型）、臺式離心機（長沙英泰儀器有限公司，TD4型）、電泳槽（上海天能科技有限公司，HE-120型）、塑料毛細采血管、微量可調移液器及配套吸頭、打孔器等。

1.3 試劑

診斷試劑：水貂阿留申病對流免疫電泳試驗抗原（批號：20130915）購自吉林特研生物技術有限公司，標準陽性血清、陰性血清均由農業部動物檢疫所提供；電泳緩沖液：巴比妥鈉緩沖液（三羥甲基氨基甲烷6.005 g，巴比妥鈉10.31 g，疊氮鈉0.2 g，各加入適量二級水溶解后，用鹽酸將pH值調至 8.5～8.6，最后用二級水定容至1 000 mL）；0.8%瓊脂糖：稱取瓊脂糖（電泳級）0.8 g，加入50 mL蒸餾水中，水浴煮沸溶化，再加入Tris-巴比妥鈉緩沖液50 mL，趁熱注板。

1.4 血清采集

趾尖采血，用塑料毛細管收集血液，經3 000 r/min離心 3～5 min，獲得待檢血清。

1.5 對流免疫電泳試驗

根據SN/T 1314—2003《水貂阿留申病對流免疫電泳操作規程》[5]進行操作。

1.5.1 鋪板 吸取已溶化并冷卻到70 ℃左右的0.8%瓊脂糖緩沖液，均勻地鋪于玻璃板上，瓊脂厚度約為3 mm。

1.5.2 打孔與封底 將已凝固的瓊脂糖凝膠板放在打孔模板上打孔，孔徑為3 mm，孔間距為4 mm。將打好孔的凝膠板在乙醇燈外焰上加熱封底。

1.5.3 加樣 將被檢血清按照編號順序用移液器從左向右逐份加到靠陽極端孔內，陰極端孔加入抗原，均以加滿孔但不外溢為度。同時，每塊板須設陽性和陰性血清對照。

1.5.4 電泳 將電泳槽兩側加滿電泳緩沖液，將加樣完畢的瓊脂糖凝膠板平放于電泳槽架上，接通電源電泳，電壓在 90 V 左右，電泳30～60 min后判定結果。

2 結果與分析

2.1 規模化場與散養戶水貂被檢血清的檢測結果對比

表2數據顯示，規模化養殖場水貂阿留申病陽性率為18%～52%，平均陽性率為33.3%，散養戶陽性率為32.3%，經統計分析，規模化場與散養戶差異不顯著（P>0.05），說明水貂阿留申病的感染率與飼養規模大小無關。

2.2 不同地區水貂被檢血清的檢測結果

由表3可知，諸城市水貂養殖場和散養戶阿留申病陽性率為48.7%，其他縣區陽性率在16.7%～28%之間，經統計分析，諸城與安丘、昌邑、坊子、奎文、臨朐5地相比水貂阿留申病血清陽性率差異顯著（P<0.05），說明諸城市為水貂阿留申病的主要流行地區。

2.3 成年貂與幼年貂血清檢測結果

由表4可知，356只成年貂檢出陽性貂120只，陽性率為33.7%，326只幼齡貂檢出陽性貂104只，陽性率為31.9%。經統計分析，成年貂與幼齡貂差異不顯著（P>0.05），說明水貂阿留申病在不同年齡階段感染率無明顯差別。

3 討論

通過對濰坊地區部分水貂養殖場和散養戶的阿留申病毒感染情況調查，結果發現該地區水貂阿留申病平均陽性率為32.8%，這與我國其他一些地方報道的陽性水平相比略微偏高，但相差不是非常明顯，比如2005年薛強等對青島一家水貂場進行檢測，440只種貂檢出陽性水貂117只，陽性率為26.6%[6]；2014年陳超然等對威海榮成的2家水貂場用碘凝集試驗檢測，“+ + +”以上強陽性的占總數的25.3%[7]，說明我國水貂養殖集中區域阿留申病普遍存在，而且陽性率均不低。

調查研究水貂規模化養殖場和散養戶阿留申病的陽性率，可以了解阿留申病在規模化飼養與管理水平相對較高的散養情況下的感染差別，結果表明二者差別不大，說明在目前的引種狀況、疫病防控水平下，阿留申病的傳播與飼養規模大小無關。

諸城市在水貂養殖規模上處于濰坊地區的領先地位，本次阿留申病檢測結果顯示，A、B、C 3個規模化養殖場陽性率明顯高于其他地區，且散養戶的陽性率也很高，這恰好反映了前幾年諸城地區水貂引種、炒種的混亂局面，同時也體現了我國目前水貂養殖現狀，即養殖密度越大的地區，環境污染越嚴重，疫病防控越困難，造成的經濟損失也越大。

本次調查在采樣階段刻意均衡了各場成年水貂與幼齡水貂的數量，以達到充分了解水貂阿留申病在不同年齡階段的感染差異，結果顯示，雖然幼齡水貂較成年水貂陽性率偏低，但差異并不明顯，這說明水貂阿留申病的垂直傳播不可忽視。從而，無論本場自留種貂還是外場引種，嚴格檢疫、及時淘汰陽性種貂至關重要。同時，雖然成年水貂生長期長，但養殖場（戶）在成年階段一般會對阿留申病癥狀明顯的病貂及早淘汰，也是差異不明顯的一大原因。

在檢測方法的選擇上，目前廣泛使用碘凝集試驗法和對流免疫電泳法。碘凝集試驗要求條件低，方便、經濟，但由于凡是造成丙種球蛋白增多的疾病都可以發生碘凝集反應，所以為非特異性方法，與其他方法相比有一定的欠缺，但在基層大規模篩查時為比較適合的檢測方法[8-9]。對流免疫電泳法要求的檢測設備相對簡單，便于操作，檢測成本也較低，準確率高，目前被普遍使用[10]。PCR方法成本太高，無法用于較大樣本數檢測，檢測結果就不可能反映實際感染情況[10]。

本試驗調查結果表明，濰坊地區水貂阿留申病的感染率較高，造成的直接或間接經濟損失較大，說明大規模擴種，大量新養殖戶涌入，使得對水貂阿留申病的危害認識不足，不清楚阿留申病檢測及淘汰陽性種貂的重要性。由于水貂阿留申病無有效治療方法，現階段疫苗免疫效果也不是很理想，建議每年定期檢疫2次，特別是在10、11月份檢測，陽性貂可隨季節皮一起取皮淘汰，需要3～5年的凈化，逐漸培養出無阿留申病健康水貂群。

本次檢測在重點養殖區域、采樣數量及年齡結構方面進行綜合考慮，旨在充分了解濰坊地區水貂阿留申病的感染分布與危害程度，為水貂養殖業的健康發展提供指導，為水貂阿留申病的科學防控提供依據。

參考文獻：

[1]徐鳳宇，王樹志. 水貂阿留申病概述[J]. 經濟動物學報，2006，10（2）：106-111.

[2]楊廷桂，陳桂先. 動物防疫與檢疫技術[M]. 北京：中國農業出版社，2011：67.

[3]邵西群，肖家美，趙元楷，等. 水貂阿留申病的防制[J]. 經濟動物學報，2001，5（1）：12-15.

[4]宋月峰，宋曉東，王曉龍. 水貂阿留申病的防治[J]. 中國動物保健，2013，15（4）：69.

[5]國家認證認可監督管理委員會. SN/T 1314—2003 水貂阿留申病對流免疫電泳操作規程[S]. 北京：中國標準出版社，2003.

[6]薛 強，郭紹聰. 水貂阿留申病的檢測技術及應用效果[J]. 當代畜牧，2006（12）：40-41.

[7]陳超然，溫建新.威海某地區水貂阿留申病的診斷與調查[J]. 天津農業科學，2014，20（4）：17-20.

[8]姚 彬，杜 杰，劉倩宏，等. 水貂阿留申病碘凝集反應與對流免疫電泳對比試驗[J]. 吉林農業科技學院學報，2014，23（2）：14-16.

[9]王克祥，劉永逵，孫宏磊.水貂阿留申病的研究進展[J]. 中國畜牧獸醫，2010，37（12）：223-225.

[10]肖家美，程世鵬，趙 艷.水貂阿留申病診斷方法的研究進展[J]. 特產研究，2007，29（2）：70-72.