妊娠高血壓疾病與HLA-G，KIR相關性的分析

余亮 熊員煥 馮翰

妊娠高血壓疾病與HLA-G，KIR相關性的分析

余亮 熊員煥 馮翰

目的 檢測妊娠高血壓疾患者者外周血KIRs水平和胎盤組織HLA-G的表達情況，進一步探討KIRs在妊娠高血壓疾病發病中的免疫機制。方法 用20例妊娠高血壓疾病和20例正常妊娠產婦（對照組）采用免疫組化技術檢測胎盤組織HLA-G陽性率，酶聯免疫吸附實驗（ELISA)檢測外周血血清KIRs水平，對比分析各指標及其與妊娠高血壓疾病的關系。結果 （1）母體血清KIRs含量與妊娠高血壓疾病相關，并且隨著妊娠高血壓病情的加重母體血清KIRs含量增加；（2）孕婦胎盤組織中的HLA-G表達陽性率及表達強度與妊娠高血壓疾病相關，并且妊高癥組表達陽性率和表達強度隨病情加重而降低；（3）母體血清KIRs含量與胎盤組織中的HLA-G表達陽性率及表達強度相關。結論 外周血清KIRs可以反映妊娠高血壓綜合征病情，胎盤HLA-G的表達降低與妊娠高血壓疾病嚴重程度密切相關。

妊娠高血壓疾病；KIR；胎盤；HLA-G

妊娠期高血壓疾病為妊娠期特有疾病，是產科常見并發癥。表現為妊娠20周以后高血壓，蛋白尿，胎兒生長受限等情況。妊娠高血壓疾病造成的孕產婦死亡率為4.2/10萬，占死亡總數的

9.3 %，圍生兒病死率為2.2%，嚴重威脅母嬰健康，是導致孕產婦和圍產兒病亡的主要原因[1]。其發病機制不清晰，免疫學因素近來越來越受到關注。目前多數學者認為妊娠狀態下母胎界面免疫平衡的破壞，造成一系列的級聯式免疫反應，包括全身的免疫反應，導致病理性妊娠的發生。本文通過檢測妊娠高血壓疾患者者外周血KIRs水平和胎盤組織HLA-G的表達情況的分析，進一步探討妊娠高血壓疾病的免疫學機制中自然殺傷細胞及其KIR受體和配體HLA-G表達的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年9月～2014年5月在景德鎮市第一人民醫院產科住院分娩的PIH患者20例，其中妊娠期高血壓5例，平均年齡（26.20±1.48）歲，平均孕周（39.77±1.11）周；輕度子癇前期10例，平均年齡（27.0±1.0）歲，平均孕周（38.20±1.02）周；重度子癇前期5例，平均年齡（28.70±3.49）歲，平均孕周（38.94±1.54）周。選擇同期住院分娩的健康孕婦20例作為對照組，平均年齡（26.70±2.53）歲，平均孕周（39.67±1.07）周。2組孕婦妊娠前均無高血壓、糖尿病以及肝腎疾病等。

1.2 診斷標準[2]血壓正常的女性孕20周后收縮壓≥0 mmHg，舒張壓≥90 mmHg定義為妊娠期高血壓。子癇前期的標準：妊娠20周后首次出現收縮壓≥140 mmHg或舒張壓≥90 mmHg，蛋白尿即尿蛋白≥0.3 g/24 h、下列標準至少1條符合可診斷為重度子癇前期：臥床休息患者間隔6小時2次收縮壓≥160 mmHg或舒張壓≥110 mmHg；蛋白尿：≥5 g/24 h，或間隔4小時2次尿蛋白；少尿：24小時尿量＜500 mL；大腦或視覺障礙；肺水腫或發紺；上腹部或右上腹疼痛；肝功能受損；血小板減少；胎兒生長受限。

1.3 血標本采集 2組孕婦均在分娩前抽取肘正中靜脈血

3 mL，在室溫條件下離心10 min，轉速2 000。取血清1 mL置于-70℃冰箱保存，成批檢測。操作方法按照美國Edification B＆G公司公司提供的操作說明。

1.4 胎盤組織選取 胎盤娩出30 min內取胎盤母體面約2 cm×2 cm×2 cm標本（避開缺血及鈣化點），鹽水清洗，置10%中性福爾馬林液固定48 h以后，采用常規脫水、浸蠟，石蠟包埋，最后進行4μm連續切片。應用免疫組化S-P法根據陽性細胞數和細胞內染色強度檢測胎盤組織中HLA-G表達強度。應用免疫組化S-P法根據陽性細胞數和細胞內染色強度對胎盤組織中HLA-G表達進行評分，0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），≥4分為強陽性（++）。

1.5 統計學方法 采用SPSS 17.0對全部數據進行統計處理，計量資料采用獨立因素樣本均數方差分析，兩變量間的相關性分析采用Spearman等級資料的相關性分析方法。

2 結果

2.1 臨床特征 見表1。

表1 孕婦臨床特征（±s）

表1 孕婦臨床特征（±s）

臨床觀察指標妊娠高血壓組輕度子癇前期組重度子癇前期組對照組（n=5）（n=10）（n=5）（n=20）年齡（歲）26.43±0.5426.8±0.4627.96±0.7425.63±0.51分娩孕周（周）38.02±1.1137.07±1.0236.94±1.5438.61±1.07新生兒體質量（kg）3278.00±60.023075.00±61.34 2960.00±52.453292.00±60.29

2.2 2組孕婦外周血外周血KIRs水平測定結果 隨著妊娠高血壓病情的加重母體血清KIRs含量增加，重度子癇前期患者較正常妊娠組差異有統計學意義（P<0.01）。見表2。

表2 孕婦外周血KIRs水平（s）

表2 孕婦外周血KIRs水平（s）

組別例數平均值妊娠高血壓組5 14.96±2.03輕度子癇前期組10 53.21±2.38重度子癇前期組5114.77±7.00對照組20 7.32±0.99

2.3 2組孕婦胎盤組織中的HLA-G表達陽性率及表達強度比較 妊高癥組表達陽性率明顯低于對照組，并且妊高癥組表達強度隨病情加重而降低，差異有統計學意義（P<0.01）。

2.4 KIRs水平與胎盤中HLA-G蛋白表達水平相關性分析 血清中表達KIRs水平與胎盤中HLA-G蛋白表達水平呈負相關(r=0.909，P＜0.05)。

3 討論

妊娠高血壓疾病是妊娠期特有疾病，是導致孕產婦死亡的六大獨立因素之一[3]，其發病機制未完全闡明。子癇前期被認為與炎癥、血管內皮功能障礙以及母胎間免疫不耐受密切相關。胎兒滋養細胞表達的HLA-G在子癇前期血管重鑄的免疫調節中的作用受到越來越多的關注[4]。研究表明HLA-G可與NK細胞表面抑制性受體KIR結合，向細胞內傳遞抑制信號，抑制NK細胞的細胞毒作用。目前妊娠高血壓與NK細胞、KIR、HLA-G關系機制研究集中在外周血和母胎界面中數量、功能、基因檢測等多方面[5-8]。目前鑒定出與受體HLA-G結合的配體只有KIR2DL4。通過酶聯免疫吸附實驗（ELISA)檢測外周血血清KIR水平表明，妊娠高血壓患者KIR水平較正常孕婦組升高，并且其水平與妊娠高血壓疾病程度正相關，表明KIR參與妊娠高血壓疾病的發生和發展。KIR2DL4不僅是抑制性受體，抑制NK細胞的細胞毒作用，保護滋養細胞免受蛻膜NK細胞殺傷。

研究表明正常妊娠時母胎界面以天然免疫系統起主導作用，HLA-G與蛻膜NK細胞的抑制性受體KIR2DL4結合，刺激NK細胞分泌細胞毒性因子和免疫調節因子，與子宮螺旋動脈重鑄中起作用的血管生成因子共同發揮作用。正常孕婦蛻膜NK細胞高水平表達KIR2DL4。本研究通過免疫組化技術檢測妊娠高血壓患者胎盤HLA-G，證實妊娠高血壓患者胎盤HLA-G表達低于對照組孕婦。考慮HLA-G降低與其結合的受體KIR2DL4減少，對NK細胞的抑制信號減弱，導致NK細胞的殺傷活性增強，刺激NK細胞分泌細胞因子減少，滋養細胞的浸潤性下降，胎盤淺著床，螺旋小動脈管腔相對狹窄，造成胎盤血液循環阻力增加，子宮胎盤灌注量減少胎盤供血不足，胎盤滋養細胞缺血缺氧，產生大量細胞因子，進而引起血管內皮細胞損傷，炎癥介質釋放，導致全身各系統反應及臨床表現[9]。

綜上所述，自然殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)通過識別滋養細胞表面的人類白細胞抗原G(HLA-G),向自然殺傷(NK)細胞傳遞抑制性信號，研究表明NK細胞及其受體KIR和配體HLA-G參與了妊娠高血壓疾病的發病機制，無論是全身免疫失衡還是局部母胎界面免疫紊亂均與妊娠高血壓疾病的發病及病理生理變化密切相關。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.36.010

江西省自然科學基金（20122BAB205091）

江西 330006 南昌大學研究生院醫學部 （余亮） 江西省人民醫院婦產科 （熊員煥） 333000 江西景德鎮市第一人民醫院婦產科 （余亮馮翰）