核黃素含量測定的實驗室質量控制

劉丹天津市濱海新區塘沽街新港社區衛生服務中心，天津　300456

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核黃素含量測定的實驗室質量控制

劉丹
天津市濱海新區塘沽街新港社區衛生服務中心，天津300456

［摘要］實驗室的質量控制在實驗室測定中起到重要作用，該次實驗采用960型熒光光度計測定核黃素的熒光強度，通過繪制標準曲線圖，讀出所含核黃素含量的濃度，分別進行精密度分析和準確度分析，進而判定實驗的準確度，精密度符合要求。說明測定VB2藥片中核黃素含量的實驗方法可靠。

［關鍵詞］質量控制；核黃素；測定

在測定VB2藥片的核黃素含量的過程中，由于存在著由某些比較確定的原因引起的系統誤差和各種隨機因素引起的隨機誤差，使測得的結果不可能和真實值完全一致，誤差愈小則結果愈準確。為了保證實驗結果的可靠性，要采取減少誤差的有效措施，并需要用統計學的方法將分析數據予以適當處理，以便能正確地評價分析結果的準確度、精密度。

1　材料與方法

1.1材料

以市售吉林鹿王藥業生產的VB2為待測樣品，測定其中核黃素的含量。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器（1）960型熒光光度計；（2）電子天平。

1.2.2試劑（1）酸性水：取濃硫酸1.5 mL加蒸餾水稀釋至1 000 mL。（2）核黃素標準儲備液（25 mg/L）精密稱取25 mg的核黃素（分析純），然后用酸性水定容至1 000 mL，用棕色瓶盛裝，瓶子外用黑色塑料袋包裹，置于冰箱內冷藏，備用，每間隔兩天重新配制；（3）核黃素標準應用液（1 mg/L）取核黃素標準儲備液4 mL，用酸性水稀釋到100 mL，用棕色容量瓶盛裝，瓶子外用黑色塑料袋包裹，臨用時配制；（4）維生素VB2片待測液取市售吉林鹿王藥業生產的VB2片（5 mg/片），用酸性水稀釋到1 000 mL，置于棕色容量瓶中，外面用黑色塑料袋包裹；（5）低亞硫酸鈉（Na2S2O4）；（6）維生素VB2片吉林鹿王藥業生產。

1.3方法

（1）采用960型熒光光度計，測定各個比色管中核黃素的熒光強度。如①空白品：20 mL酸性水；②標準品：取10 mL應用液稀釋到100 mL后取20 mL。（0.1 mg/L）；③待測品：VB2稀釋到1000 mL（A液），取A液20 mL稀釋到1 000 mL后取20 mL。（0.1 mg/L）；④加標樣品：10 mL標準+10 mL樣品，每天做一個批次，每次兩個平行樣，共做20批次。繪制標準曲線圖，在標準曲線上讀出所含核黃素含量的濃度，分別進行精密度分析和準確度分析，并繪制準確度控制圖與精密度控制圖。

（2）操作步驟。①配制標準系列溶液：取7個50 mL容量瓶，用黑色塑料袋包裹后分別加入1～7 mL的核黃素標準應用液（1 mg/L），用酸性水稀釋到刻度，搖勻。②標準系列的熒光強度測定：嚴格按程序開啟熒光光度計后預熱20 min，依次按照濃度從低到高的順序測量其熒光強度及加入低亞硫酸鈉后的熒光強度。③測定VB2藥片中核黃素含量：a.取8個25 mL的比色管用黑色塑料袋包裹至20 mL刻度線，分別標注空白品、標準品、加標樣品、待測品，分別取平行樣。b.嚴格按程序開啟熒光光度計后預熱20 min，依次測定各個比色管的熒光強度及加入低壓硫酸鈉后的熒光強度。

2　結果

2.1核黃素標準溶液的熒光強度測定值

以標準核黃素濃度為橫坐標、熒光強度為縱坐標繪制的標準曲線（如圖1），VB2片待測液的濃度平均值C（VB2）為0.101 mg/L，則原待測液的濃度C（VB2）原=C（VB2）×100 mL/2 mL=5.05 mg/L。則藥片中VB2的含量就為C（VB2）原×1000 mL=5.05 mg/片。由核黃素標準系列得出回歸方程（r=0.997 52 P＜0.001）。

圖1　核黃素標準曲線圖

2.220批次不同樣品的濃度

依次測定空白品，標準品，如標樣品，待測品，并記錄數值。見表1。

表1　20批次不同樣品的濃度（mg/L）

2.3精密度分析

通過精密度控制圖分析該次實驗精密度是否符合要求。精密度控制圖的繪制：記錄20批次樣品測定值，求出平均值）、標準差（S），并計算出中心線是縱坐標為的、平行于橫軸的直線；分別為上下控制限；與-2S分別為上下警告限；以測定值為縱坐標、樣品測定序號為橫坐標繪圖。

2.4準確度分析

通過待測樣品中核黃素含量的加標回收率來判定該次實驗中準確度是否在控制之中。平均回收率=101.83%。經測定1號樣品加標回收率為100%，2號樣品加標回收率為103.5%，3號樣品加標回收率為103.55，4號樣品加標回收率為103.3%，5號樣品加標回收率為103.4%，6號樣品加標回收率為100%，7號樣品加標回收率為100%，8號樣品加標回收率為100%，9號樣品加標回收率為103.3%，10號樣品加標回收率為103.4%，11號樣品加標回收率為103.4%，12號樣品加標回收率為103.4%，13號樣品加標回收率為96.5%，14號樣品加標回收率為95.6%，15號樣品加標回收率為100%，16號樣品加標回收率為100%，17號樣品加標回收率為104.9%，18號樣品加標回收率為105.8%，19號樣品加標回收率為103.2%，20號樣品加標回收率為103.4%。

3　討論

實驗室的質量控制雖然會增加一定的工作量，但它所換來的是數據可信性。所以要建立較全面的質量控制，把所做的實驗都加以控制，數據準確性就十分有把握。樣品總標準差S（0.004 6）＜目標值W（0.101），加標樣總標準差S（0.004 9）＜目標值W（0.005）；標準品總標準差S（0.005 5）＞目標值W（0.005），但標準品總均方S2（0.3×10-4）/目標值W2（0.0052）＜F（19，∝），所以加標樣和標準品、樣品的精密度均符合要求，平均加標回收率為101.83%，在95%～105%之間。由準確度控制圖可看出各點的分布情況：18個點的位置在中心線附近、上下控制限的區域內浮動，說明測定工作的質量處于較好控制水平；其中有2個點的位置在下警告限之外，但仍在下控制限的區域內，提示可能存在誤差，但樣品測定結果尚可保留，準確度符合要求。由精密度控制圖可看出各點的分布情況：20個點的位置在中心線附近、上下警告限之間的區域內浮動，說明測定工作的精密度符合要求。實驗中出現的可能影響核黃素熒光強度的因素：

①溶劑：該次實驗所用溶劑為酸性水，主要考慮到核黃素極易分解，其在酸性條件下比較穩定。

②溫度影響：在該次實驗過程中，實驗室配有遮陽窗簾，所用到的容器都已用黑色塑料袋包裹，避免實驗過程中核黃素的分解，避光措施較好。

③激發光的照射對熒光強度的影響：實驗測定過程中，要在放入比色皿前打開蓋門，放入后立即讀數，以減少核黃素受激發光照射的時間，取出后立即關閉蓋門。

④溶液的pH值：該次實驗所用的酸性水由于所需劑量較大，故如果多次配制易產生誤差，使酸性水的pH有所改變，會影響到測定結果。因此在該次實驗中，實驗前應配好足夠的酸性水，保持酸性水的pH在5.6。由于濃硫酸比較粘稠，吸取濃硫酸時要盡量讓刻度吸管里的濃硫酸全部流下后再移走刻度吸管，以免濃硫酸殘留，影響測定結果。

⑤樣品濃度的影響：熒光分析應在低濃度溶液中進行。

⑥試劑的配制對熒光強度的影響：由于實驗中需要配制大量的溶液，故溶液配制的是否準確直接影響到實驗結果。能否準確無誤地配制溶液，就需要實驗人員具有良好的操作技能及耐性。

4　結語

由準確度控制圖、精密度控制圖可看出，實驗的準確度、精密度符合要求。說明測定VB2藥片中核黃素含量的實驗方法可靠、測定結果具有一定的準確性和可靠性。

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［中圖分類號］R927.2

［文獻標識碼］A

［文章編號］1672-5654（2016）03（b）-0108-03

DOI：10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.08.108

收稿日期：（2015-12-19）