健胃消食片HPLC指紋圖譜研究

達(dá)娃卓瑪　尕藏卓瑪

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，西藏　拉薩　850000

健胃消食片HPLC指紋圖譜研究

達(dá)娃卓瑪尕藏卓瑪

西藏自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，西藏拉薩850000

【摘要】目的：對(duì)10家生產(chǎn)企業(yè)的29批健胃消食片采用HPLC法建立指紋圖譜，為其質(zhì)量控制提供有效的依據(jù)。方法：采用Kromasil C18柱，以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)指紋圖譜相似度計(jì)算軟件，確定指紋圖譜共有峰，計(jì)算相似度。結(jié)果：通過(guò)對(duì)10家生產(chǎn)企業(yè)29批次樣品的色譜圖進(jìn)行考察，發(fā)現(xiàn)之間差異較大；16批健民健胃消食片的色譜圖相似，能建立指紋圖譜，共確定了7個(gè)共有峰，其相似度均大于0.90。結(jié)論：29批次的樣品無(wú)法共同建立指紋圖譜進(jìn)行評(píng)價(jià)；所建立的HPLC指紋圖譜具有較好的精密度和重現(xiàn)性，可以有效表示健民健胃消食片的質(zhì)量特點(diǎn)，能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜；健胃消食片；指紋圖譜

健胃消食片為常用中藥片劑，是國(guó)家的基本藥物。是由太子參、陳皮、山藥、麥芽(炒)和山楂5味藥制成的復(fù)方制劑[1]，臨床用于脾胃虛弱所致的食積，癥見不思飲食、噯腐酸臭、脘腹脹滿；消化不良見上述證候者。處方收載于2010年版《中國(guó)藥典》一部以及國(guó)家食品藥品監(jiān)督局頒的各類標(biāo)準(zhǔn)中。現(xiàn)行質(zhì)量方法中，僅采用高效液相色譜法測(cè)定指標(biāo)成分橙皮苷的含量，無(wú)法較全面地分析健胃消食片的質(zhì)量。指紋圖譜能夠較好地反映中藥復(fù)雜的化學(xué)成分及其相對(duì)比例，是一種綜合的、量化的分析手段，借以鑒別真?zhèn)危u(píng)價(jià)原料藥材，半成品和成品質(zhì)量的均一性和穩(wěn)定性[2]。陳華等[3]對(duì)江中藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的健胃消食片進(jìn)行了指紋圖譜的研究。為了更好地對(duì)生產(chǎn)企業(yè)的健胃消食片進(jìn)行質(zhì)量控制，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對(duì)該品種的指紋圖譜進(jìn)行考察。

1儀器與材料

1.1儀器美國(guó) Waters 2695高效液相色譜儀(Empower工作站)，2998 PDA檢測(cè)器。Mettler XP205型(精密度為十萬(wàn)分之一)和Mettler XP504(精密度為萬(wàn)分之一)電子天平。

1.2材料橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：110721-200613，中國(guó)藥品生物制品檢定所)。磷酸(分析純，天津化學(xué)試劑三廠)，乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2方法和結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Kromasil (5μm，250mm×4.6mm) C18柱；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；柱溫：30℃；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脫(見表1)；流速：1.0ml/min。

表1　流動(dòng)相梯度洗脫條件

2.2對(duì)照品溶液的制備分別取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇溶解制成每1ml含橙皮苷40μg的對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備取健胃消食片適量，研細(xì)，取約 2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水40ml，稱定質(zhì)量，超聲處理35min，放冷，再稱定質(zhì)量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，離心，精密量取上清液20ml，置分液漏斗中，用水飽和正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液。再用正丁醇飽和水洗滌3次，每次15ml，棄去水液。分取正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶液溶解并定容至10ml容量瓶中，搖勻，經(jīng)0.45微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4方法學(xué)考察

2.4.1穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品(批號(hào)：130118)溶液，分別于 0、2、4、8、12、24、48h 進(jìn)樣，考察各共有峰與內(nèi)參比峰(橙皮苷 6號(hào)峰)的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積比值的一致性，結(jié)果各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD 0.99%～2.83%，相對(duì)峰面積比值RSD 0.95%～2.62%，表明供試品溶液在48h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.2精密度試驗(yàn)取同一供試品(批號(hào)：130118)溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，考察各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積比值的一致性，結(jié)果各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD 0.76%～2.13%，相對(duì)峰面積比值RSD 0.92%～2.32%，符合指紋圖譜要求，精密度良好。

2.4.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)(批號(hào)：130118)的供試品溶液6份，進(jìn)行測(cè)定，考察各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積比值的一致性，結(jié)果各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD 0.76%～2.11%，相對(duì)峰面積比值RSD 0.89%～2.37%，結(jié)果表明方法的重復(fù)性良好。

2.5指紋圖譜的建立依據(jù)上述色譜條件和提取方法，對(duì)全國(guó)10家生產(chǎn)企業(yè)涉及的26批次的健胃消食片進(jìn)行了指紋圖譜的考察，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品中出現(xiàn)的色譜峰的液相色譜圖和紫外光譜圖進(jìn)行逐一分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各廠家之間樣品的色譜峰差異較大，無(wú)法建立共同指紋圖譜。經(jīng)分析顯示，16批武漢健民集團(tuán)隨州藥業(yè)有限公司抽取的樣品色譜圖較相近，因此對(duì)其進(jìn)行特征指紋圖譜研究。結(jié)果共選出包括橙皮苷(6號(hào)峰，內(nèi)參比峰)在內(nèi)的7個(gè)共有峰，其中2個(gè)超過(guò)總峰面積10%的色譜峰作為指紋圖譜特征峰，建立該樣品的指紋圖譜。各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間數(shù)據(jù)見表2。

表2　各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間

2.6特征指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)將16批樣品色譜圖導(dǎo)入國(guó)家藥典委員會(huì)頒布的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)研究版(2004A)”，經(jīng)校準(zhǔn)后，生成“對(duì)照譜圖”。經(jīng)軟件分析建立的樣品色譜圖和生成的對(duì)照譜圖見圖1-2。經(jīng)軟件分析得的相似度數(shù)據(jù)結(jié)果見表4。

表3　16批樣品和對(duì)照?qǐng)D譜的相似度數(shù)據(jù)

S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10S11S12S13S14S15S16RS110.9410.9690.9120.9530.9570.9030.9060.9110.9210.9230.9260.9250.9190.9440.9670.914S20.94110.9590.9070.9570.9090.9070.9250.9220.960.9410.9370.9510.9560.9250.9380.946S30.9690.95910.9200.9580.9090.9070.9260.9240.9090.9150.9250.9230.9260.9250.9240.944S40.9060.9970.92410.9250.9230.9260.9250.9240.9440.9150.960.9410.9370.9510.9610.967S50.9530.9570.9580.93010.9450.9670.9390.9070.9450.9220.9660.9430.9370.9570.9560.922S60.9570.9090.9090.9220.94510.9570.9090.9270.9050.9280.9450.9430.9270.9510.9330.954S70.9030.9070.9070.9310.9670.95710.9070.9250.9220.960.9410.9370.9510.9710.9630.954S80.9060.9250.9260.9340.9390.9090.90710.9090.9170.9260.9240.9090.9150.9250.9710.963S90.9110.9220.9240.9250.9070.9270.9250.90910.9270.9360.9540.9190.9160.9450.9280.947S100.9210.960.9090.9400.9450.9050.9220.9170.90110.9430.9150.9520.9620.9220.9250.901S110.9230.9410.9150.9260.9220.9250.960.9260.9260.94310.9540.9190.9160.9450.9280.926S120.9260.9370.9250.9600.9660.9450.9410.9240.9630.9150.95410.9250.9280.9260.9320.963S130.9250.9510.9230.9420.9430.9430.9370.9090.9090.9520.9190.92510.9070.9310.9450.909S140.9190.9560.9260.9430.9370.9270.9510.9150.9290.9620.9160.9280.90710.9210.960.929S150.9970.9250.9250.9520.9570.9510.9710.9250.9550.9220.9450.9260.9310.92110.9720.955S160.9440.9380.9240.9610.9560.9330.9630.9710.9460.9250.9280.9320.9450.960.97210.946R0.9140.9460.9440.9720.9220.9540.9540.9630.9470.9010.9260.9630.9090.9290.9550.9461

3討論

3.1提取方法的選擇實(shí)驗(yàn)曾用水、50%甲醇、甲醇分別超聲提取，結(jié)果雜質(zhì)峰干擾嚴(yán)重，分離度較差。采用水超聲提取后正丁醇萃取，可除去較多雜質(zhì)峰，各組分能夠良好分離。

3.2流動(dòng)相的選擇實(shí)驗(yàn)對(duì)不同溶劑系統(tǒng)進(jìn)行考察，結(jié)果乙腈-磷酸水溶液流動(dòng)相系統(tǒng)梯度洗脫具有柱壓低、峰形和分離度佳及分析時(shí)間較短的特點(diǎn)，因此確定流動(dòng)相采用A：乙腈/B：0.1%磷酸水溶液。

3.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇中藥成分復(fù)雜，在一個(gè)波長(zhǎng)下難以體現(xiàn)所有成分的特征，故對(duì)200～400nm波段的特征圖譜進(jìn)行分析，結(jié)合色譜峰個(gè)數(shù)和峰強(qiáng)度綜合考察，結(jié)果在220nm波長(zhǎng)下可以比較完整地采集樣品圖譜，故選擇220nm作為特征圖譜的檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.4對(duì)健胃消食片標(biāo)準(zhǔn)分析和建議此次考察的健胃消食片企業(yè)涉及的標(biāo)準(zhǔn)就有11個(gè)之多，各標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法測(cè)定指標(biāo)成分橙皮苷的含量限度也多樣，難以較全面系統(tǒng)地分析健胃消食片的質(zhì)量。指紋圖譜能夠較好地反映中藥復(fù)雜的化學(xué)成分及其相對(duì)比例，在大多數(shù)中藥有效成分尚未闡明的現(xiàn)狀下，指紋圖譜可有效地表示中藥質(zhì)量。建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜時(shí)，所選藥材的基源鑒定是基礎(chǔ)，必須準(zhǔn)確。指紋圖譜也可與生產(chǎn)工藝結(jié)合，完整地控制中藥(制劑)的物質(zhì)群體。但在實(shí)際考察過(guò)程中，由于不同企業(yè)在原料藥、生產(chǎn)工藝等方面存在的差異，導(dǎo)致采集到的各樣品色譜圖中的組分有較大的不同，因此無(wú)法對(duì)多家企業(yè)生產(chǎn)的健胃消食建立共有指紋圖譜。而相對(duì)同一家企業(yè)的品種色譜圖相似度較高，因此能建立指紋圖譜進(jìn)行質(zhì)控。基于健胃消食片多而雜的標(biāo)準(zhǔn)和HPLC指紋圖譜的無(wú)法確定這兩項(xiàng)原因，迫切需要統(tǒng)一原料藥材來(lái)源、統(tǒng)一工藝流程，并統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

實(shí)驗(yàn)對(duì)16批武漢健民集團(tuán)隨州藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的樣品進(jìn)行分析，并建立了指紋圖譜，經(jīng)計(jì)算指紋圖譜相似度大于0.90，符合其技術(shù)要求，說(shuō)明該方法能夠?qū)ξ錆h健民集團(tuán)隨州藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的健胃消食片進(jìn)行質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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Study on HPLC Fingerprint of Jianwei Xiaoshi Tables

DAWa ZhuomaGAZang Zhuoma

Tibet Autonomous Region Institute for Food and Drug Control，Lhasa 850000，China

Abstract:Objective HPLC fingerprints of 29 batches of Jianwei Xiaoshi tablets which from 10 Pharmaceutical companies were established to provide an effective method of quality control for them．Methods Kromasil C18column was used with acetonitrile-0.1%phosphate aqueous as the mobile phase by gradient elution; the flow rate was1.0ml/min, and the detection wavelength was at 220nm．Fingerprint similarity evaluation software was used to determine common fingerprint peaks, calculate the similarity.Results HPLC chromatograms of 29 batches of Jianwei Xiaoshi tablets which from 10 Pharmaceutical companies are divers; 7 common peaks were identified in fingerprints from 16 batches of Jianwei Xiaoshi tablets of Jianmin, the similarity was greater than 0.90.Conclusion 29 batches of Jianwei Xiaoshi tablets which from 10 Pharmaceutical companies cannot establish unified HPLC fingerprints; HPLC fingerprint established has better precision and reproducibility, and can effectively characterize the quality of Jianwei Xiaoshi tablets of Jianmin and control the product quality.

Key words:HPLC; Jianwei Xiaoshi Tablets;Fingerprint

作者簡(jiǎn)介：達(dá)娃卓瑪，女，博士，副主任藥師，主要從事藏藥化學(xué)成分分析及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail：dazhuo1108@126.com

【中圖分類號(hào)】R286.0

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】1007-8517(2016)08-0014-03

(收稿日期：2016.02.22)