轉移相關蛋白2和基質金屬蛋白酶—7在結腸癌中的表達及其意義

陳宇倩 趙俊軍

[摘要] 目的 探討轉移相關蛋白2（MTA2）和基質金屬蛋白酶-7（MMP-7）在結腸癌中的表達及其意義。 方法 選取本院2012年1月～2014年12月的60例結腸癌標本作為觀察組，選取30例結腸癌旁組織作為對照組。應用免疫組化SP法檢測MTA2、MMP-7蛋白在結腸癌與癌旁組織中的表達情況以及在腫瘤不同分化程度、不同臨床分期、有無淋巴結轉移及遠處轉移情況下的表達水平。結果 MTA2和MMP-7在結腸癌中的陽性表達與分組、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期有關，差異有統計學意義（P<0.05）。MTA2和MMP-7在結腸癌中的陽性表達率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。 結論 MTA2和MMP-7與結腸癌的惡性程度有關，對結腸癌的侵襲轉移起促進作用，能夠參與結腸癌的發展過程，可作為判斷結腸癌預后評估的參考指標。

[關鍵詞] 結腸癌；轉移相關蛋白2；基質金屬蛋白酶-7；免疫組化

[中圖分類號] R363.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）03（b）-0061-04

[Abstract ] Objective To explore expression and significance of metastasis associated protein 2 （MTA2） and matrix metalloproteinase -7 （MMP-7） in colorectal cancer. Methods 60 cases of colorectal cancer specimen from January 2012 to December 2014 in our hospital were selected as the observation group，30 cases of colorectal cancer adjacent tissues were selected as the control group.Expression condition of MMP-7 and MTA2 protein in colorectal cancer and adjacent tissues and its expression level in different degree of differentiation，clinical stage，lymph node metastasis and distant metastasis were detected by immunohistochemistry SP method. Results The positive expression of MTA2 and MMP-7 in colorectal cancer was related to the grouping，differentiation degree，lymph node metastasis and TNM stage，with significant difference （P<0.05）.There was no significant difference in the positive expression rate of MTA2 and MMP-7 in colorectal cancer （P>0.05）. Conclusion MTA2 and MMP-7 are related to the malignant degree of colorectal cancer，which can promotes the invasion and metastasis of colorectal cancer and it is involved in the development of colorectal cancer，can be used as a reference index for evaluating the prognosis of colorectal cancer.

[Key words] Colorectal cancer；Metastasis associated protein 2；Matrix metalloproteinase-7；Immunohistochemistry

結腸癌是一種嚴重危害人類健康的常見惡性腫瘤，其復發與轉移會對患者的預后產生很大影響[1]。對結腸癌侵襲轉移相關因素及機制的研究有助于為臨床預測、控制以及治療提供十分重要的客觀指標。

近年來，國內外學者篩選出了一種腫瘤轉移相關基因MTA家族，其是腫瘤轉移相關基因中較重要的一種，主要參與組成組蛋白去乙酰基酶（NuRD），發揮基因轉錄抑制功能，通過調節雌激素通路、細胞凋亡以及細胞骨架等路徑能夠促進腫瘤侵襲轉移[2-3]。深入研究MTA基因家族的結構特點和功能有利于分析惡性腫瘤的轉移機制。目前，研究較詳細的MTA家族成員為MTA1基因。已有研究證實，MTA1可能通過影響信號轉導方式發揮作用，其陽性表達率與結腸癌等惡性腫瘤的大小、病程分期和腫瘤分化程度等密切相關[4-5]。MTA2與MTA1蛋白有65%的同源性，研究顯示[6]，MTA2在多種腫瘤細胞中表達且與腫瘤的分化程度、浸潤深度、臨床分期以及有無淋巴結轉移等密切相關。

基質金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一類水解基底膜（BM）和細胞外基質（ECM）的蛋白水解酶家族，其中MMP-7可水解BM和ECM中的Ⅳ型膠原等多種成分，在惡性腫瘤的侵襲和轉移中發揮著很重要的作用。其基因表達水平和淋巴結轉移、TNM分期密切相關[7]。

本研究主要探討MTA2在結腸癌中的表達及同MMP-7蛋白是否具有明顯相關性，分析其在結腸癌發生、發展、侵襲和轉移過程中的作用，以期為評估預后和治療提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2012年1月～2014年12月經手術切除并確診為結腸癌的60例標本作為觀察組，選取30例結腸癌旁組織作為對照組。觀察組患者中，男性35例，女性25例；年齡51～77歲，平均65.2歲；高-中分化30例，低分化30例；伴淋巴結轉移36例，不伴淋巴結轉移24例；有遠處轉移6例，無遠處轉移54例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅲ～Ⅳ期35例。所有患者均根據WHO中結腸癌的標準進行分型，手術前未做放化療等。本研究經本院醫學倫理委員會批準，患者及其家屬均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 材料 MTA2和MMP-7蛋白濃縮液均購于Santa Cruz公司。

1.2.2 免疫組織化學染色SP法 ①石蠟切片脫蠟、水化，自來水沖洗，進行抗原修復；②滴加過氧化物酶阻斷劑；③切片上滴加動物非免疫血清，室溫下孵育10 min；④除去血清，切片上滴加第一抗體，4℃過夜；⑤除去PBS，切片上滴加生物素標記的第二抗體，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3次，3 min/次；⑥除去PBS，切片上滴加鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶試劑，室溫下孵育10 min，PBS沖洗3次，3 min/次；⑦滴加新鮮配制的DAB顯色試劑顯色；⑧水沖洗，蘇木素復染，經梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3 判定標準

MTA2和MMP-7染色陽性的細胞均在細胞質中，以細胞質中出現棕黃色顆粒為陽性，選擇陽性細胞比較集中的區域，共10個（400倍），計數陽性細胞的百分率，取平均值。以陽性細胞≥10%為陽性，<10%為陰性。

1.4 統計學處理

采用SPSS 17.0統計學軟件對數據進行分析，計量資料以x±s表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，相關性采用Spearman等級相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MTA2表達與臨床病理特征的關系分析

MTA2在結腸癌中的陽性表達與分組、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期有關，差異有統計學意義（P<0.05）（表1）。

2.2 MMP-7表達與臨床病理特征的關系分析

MMP-7在結腸癌中的陽性表達與分組、分化程度、淋巴結轉移、TNM分期有關，差異有統計學意義（P<0.05）（表2）。

2.3 MTA2和MMP-7陽性表達率的比較

MTA2和MMP-7在結腸癌中的陽性表達率比較，差異無統計學意義（χ2=0.543，P=0.461）（表3）。

3 討論

MTA家族是近年來國內外學者篩選出的與腫瘤轉移有關的基因中較重要的一種，產物涉及MTA1、MTA2、MTA3以及MTA1s和MTA3L等類似分子[8-10]。

研究顯示[11-16]，MTA2的表達水平與乳腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、食管癌、胰腺導管癌、喉癌等腫瘤的臨床分期、有無淋巴結轉移及病理學分級相關，但關于MTA2在結腸癌中的表達及與MMP-7蛋白是否具有明顯相關性的報道較少。

本研究結果顯示，MTA2的表達水平與結腸癌的臨床分期及分化程度密切相關，在腫瘤的侵襲過程中能夠發揮重要作用，這與上述文獻中的結論相似。本研究結果也顯示，MTA2在結腸癌伴遠處轉移與不伴遠處轉移中的表達水平比較，差異無統計學意義，這可能與樣本例數相對不足有關，有待在今后的研究中繼續探討。

MMPs家族是一類作用于基底膜和細胞外基質的肽鏈內切酶[7]。細胞的遷移和細胞外基質重建的動態平衡是由MMPs及其抑制劑——金屬蛋白酶組織抑制劑（tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs）共同來維持的，其平衡失常是導致腫瘤細胞侵襲、轉移的關鍵性因素[17-18]。

MMP-7屬于MMPs家族中的一個亞型，能夠降解構成細胞外基質和基底膜的主要結構蛋白——Ⅳ型膠原和層粘連蛋白，在腫瘤的侵襲轉移中起著關鍵作用[19]。臨床研究顯示，MMP-7的陽性表達強度與食管癌等多種腫瘤的分化、局部浸潤程度、有無淋巴結轉移以及Dukes分期呈正相關（P<0.05），但是其臨床意義還沒有肯定的結論，尚需進一步探討。

本研究結果顯示，MMP-7表達水平在結腸癌和癌旁組織、結腸癌低分化組和高分化組、有淋巴結轉移組與無淋巴結轉移組及TNM分期Ⅲ～Ⅳ期與TNM分期Ⅰ～Ⅱ期中比較，差異有統計學意（P<0.05），提示MMP-7的表達水平與結腸癌的臨床分期、有無淋巴結轉移及分化程度具有相關性，其可能在腫瘤的侵襲轉移過程中發揮重要作用。MMP-7在未伴有遠處轉移及伴有遠處轉移中的表達水平比較，差異無統計學意義。

有研究顯示[20]，MTA2既有影響轉錄的活性，也有促進MMP-7分泌的活性，能夠發揮基底膜的溶解作用而引起腫瘤的進展。本研究聯合檢測了結腸癌組織中的MTA2和MMP-7表達情況，其在結腸癌中的表達無顯著相關性，而在結腸癌中的相互作用還有待于擴大樣本進一步研究。

綜上所述，MTA2和MMP-7在結腸癌組織中的表達水平顯著高于癌旁組織，其與腫瘤的分化程度、臨床分期、淋巴結轉移具有相關性，提示MTA2和MMP-7與結腸癌的惡性程度有關，其對結腸癌的侵襲轉移起促進作用，能夠參與結腸癌的發展過程，故可作為判斷結腸癌預后的參考指標。

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