薄層色譜法鑒別“復方甲亢片”中的甲巰咪唑

朱田密

(湖北省中醫院藥事部，湖北 武漢　430061)

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薄層色譜法鑒別“復方甲亢片”中的甲巰咪唑

朱田密

(湖北省中醫院藥事部，湖北 武漢430061)

摘要：目的建立一種鑒別復方甲亢片中甲巰咪唑的新方法。方法采用薄層色譜法，將供試品用濃氨試液潤濕，用乙酸乙酯提取，經硅膠GF254薄層層析，在紫外光燈254 nm下觀察以及用稀碘化鉍鉀試液顯色，與甲巰咪唑對照品色譜對照。結果復方甲亢片色譜中甲巰咪唑斑點清晰，陰性無干擾。結論該方法可用于對中西藥復方制劑復方甲亢片中西藥成分甲巰咪唑進行鑒別，從而替代原質量標準中的試管化學反應鑒別法。

關鍵詞：甲巰咪唑/分析；色譜法,薄層；復方合劑

復方甲亢片(鄂藥制字Z20111106)為湖北省中醫院醫療機構制劑，是根據湖北省中醫院陳如泉教授的經驗方，以炙黃芪、白芍等益氣養陰中藥為主配以少量西藥甲巰咪唑組成的中西藥復方制劑[1-3]。具有滋陰益氣，清熱平肝的功效，用于治療甲狀腺功能亢進癥。臨床應用30年中，質量標準逐步提高，但是現行質量標準中對西藥成分甲巰咪唑的鑒別仍然模擬2005年版以前《中國藥典》對甲巰咪唑化學藥的試管化學反應鑒別法[4-5]，即樣品提取液與二氯化汞試液、亞硝基鐵氰化鈉試液以及三硝基苯酚試液分別反應產生相應的現象。由于復方制劑中成分多，為純化出甲巰咪唑進行試管反應，步驟很復雜，反應現象也不如單純西藥典型。并且，實驗方法所用的二氯化汞是劇毒試劑，對操作人員健康有害，又嚴重污染環境。因此，有必要對此鑒別方法進行改進。研究發現，能用薄層色譜法(TLC)鑒別復方甲亢片中的甲巰咪唑，方法簡便、快速、效果好。

1儀器與試藥

KQ-500VDE型雙頻數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HWS-26電熱恒溫水浴鍋(上海齊欣科學儀器有限公司)；ZF-7型暗箱三用紫外線分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)。復方甲亢片(湖北省中醫院制劑中心生產，批號為20150616，20150909，20151029)；缺甲巰咪唑的陰性樣品(湖北省中醫院制劑中心提供)；甲巰咪唑對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100030-200504)；薄層層析硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)，硅膠GF254預制板(青島海浪硅膠干燥劑有限公司)；濃氨溶液、乙酸乙酯、無水乙醇、環己烷、甲醇、碘化鉀、堿式硝酸鉍等試劑均為分析純。

2方法及結果

2.1溶液的制備

2.1.1供試品溶液的制備取復方甲亢片5片，除去糖衣，研細，加濃氨試液3 mL潤濕，加乙酸乙酯15 mL，超聲處理30 min(80 KHz，300 W)，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2陰性對照溶液的制備取缺甲巰咪唑的陰性樣品，按“2.1.1”同法制成陰性對照溶液。

2.1.3對照品溶液的制備取甲巰咪唑對照品，加無水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2薄層板的制備薄層層析硅膠GF254，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液作為黏合劑，手動鋪板，鋪成厚度0.5 mm的薄層板，平放晾干，105 ℃干燥30 min，備用。

2.3薄層層析參照《中國藥典》2015年版四部的薄層色譜法(通則0502)試驗[6]，吸取“2.1”項下制備的供試品溶液、陰性對照溶液各5 μL，對照品溶液2 μL，分別點于上述薄層板上，以環己烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(3∶5∶0.8∶0.2)作為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光燈254 nm下檢視。供試品色譜中，在與甲巰咪唑對照品色譜相應的位置上，顯相同黑暗斑點；再噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜中，在與甲巰咪唑對照品色譜相應的位置上，顯相同紅色斑點，見圖1。

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑對照品；3～5.供試品。

圖1復方甲亢片中甲巰咪唑的薄層色譜鑒別圖

3討論

薄層色譜法鑒別甲巰咪唑在國外藥品標準中已有先例：《英國藥典》和《歐洲藥典》收載甲巰咪唑(硫酮式)質量標準都采用了薄層色譜鑒別法[7-8]。《中國藥典》收載甲巰咪唑(硫醇式)質量標準未采用薄層色譜鑒別法，卻也將薄層色譜用于與甲巰咪唑有關的雜質檢查[9]。薄層色譜法鑒別混合物中的目標成分具有優勢，本研究將薄層色譜法應用于中西藥復方制劑中甲巰咪唑的鑒別，獲得滿意效果。

本方法的建立依賴于甲巰咪唑的兩個性質特征：(1)甲巰咪唑能使GF254薄層板面發生熒光猝滅。這是由于甲巰咪唑的紫外最大吸收波長位于252 nm[9]，對緊鄰的254 nm紫外光也有強烈吸收，導致GF254薄層板熒光背景出現暗斑;(2)甲巰咪唑是含氮有機化合物，與生物堿類似，在薄層板上遇稀碘化鉍鉀試液顯紅色斑點。基于這兩個現象，經過系統的研究考察，包括供試品提取方法、點樣量、檢視條件、展開系統、薄層板規格、溫濕度的考察(見“3.1～3.6”)，建立了該鑒別方法。經過數批樣品驗證，方法可行。

3.1提取方法考察設計4種方法提取供試品，分別為濃氨試液潤濕后乙酸乙酯超聲提取；水潤濕后乙酸乙酯超聲提取；直接用乙酸乙酯超聲提取；直接用無水乙醇超聲提取。結果：直接用乙酸乙酯沒有提取出甲巰咪唑；直接用無水乙醇提取出微量的甲巰咪唑；經濃氨試液或水潤濕后用乙酸乙酯都能提取出甲巰咪唑，但水潤濕帶入的雜質較多，故選擇濃氨試液潤濕。結果見圖2。

注：1.甲巰咪唑對照品；2.濃氨試液潤濕后乙酸乙酯提取；3.水潤濕后乙酸乙酯提取；4.乙酸乙酯提取；5.無水乙醇提取。

圖2供試品提取方法考察薄層色譜圖(日光)

3.2點樣量考察將供試品溶液分別點樣1、2、4、6、8、10 μL，將對照品溶液分別點樣1、2 μL。結果供試品溶液點樣4～8 μL均合適，對照品溶液點樣2 μL合適，見圖3。

注：1～2.甲巰咪唑對照品溶液(1、2 μL)；3～8.供試品溶液(1、2、4、6、8、10 μL)。

圖3點樣量考察薄層色譜圖(日光)

3.3檢視條件選擇考察3種檢視條件，將展開后的GF254薄層板分別置于紫外光燈254、365 nm下檢視以及噴以稀碘化鉍鉀試液后在日光下檢視。結果：甲巰咪唑在365 nm下不顯熒光斑點，在254 nm下顯示清晰的暗斑，用稀碘化鉍鉀試液顯色后立即呈現紅色斑點，見圖4。

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑對照品；3～5.供試品。

圖4檢視條件考察薄層色譜圖

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑對照品；3～5.供試品。

圖5展開系統考察薄層色譜圖(左圖：254 nm;右圖：日光)

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑對照品；3～5.供試品。

圖6薄層板規格考察薄層色譜圖(左圖：254 nm;右圖：日光)

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑對照品；3.供試品。

圖7溫濕度考察薄層色譜圖(左圖：254 nm;右圖：日光)

3.4展開系統考察考察4種展開系統，分別為三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶1∶1)，三氯甲烷-丙酮-濃氨試液(5∶2∶0.03)，乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(10∶0.4∶0.2)，環己烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(3∶5∶0.8∶0.2)。第1種展開系統在254 nm下陰性樣品有干擾；第2種展開系統斑點略拖尾；第3種展開系統斑點圓整，但色譜背景較模糊；第4種展開系統分離效果最佳,色譜圖見圖5。

3.5薄層板考察采用自制薄層板(厚度0.5 mm)和預制板(厚度0.2～0.25 mm)試驗，結果都能取得良好效果,色譜圖見圖6。

3.6溫濕度考察在不同溫濕度環境中試驗(溫度介于9～32 ℃，濕度介于21%～79%)，按本方法展開色譜，結果均能得到清晰的斑點,色譜圖見圖7。

參考文獻

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[2]劉建,向楠,陳如泉,等.復方甲亢片治療甲狀腺機能亢進癥的臨床觀察[J].湖北中醫雜志,2008,30(5):24-25.

[3]左新河.復方甲亢片治療Graves亞臨床甲亢狀態的療效相關因素及機理研究[D].武漢：湖北中醫藥大學,2010.

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[6]國家藥典委員會.中國藥典(四部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2015:57.

[7]British Pharmacopoeia 2007(volume Ⅱ) [S].London:The Stationery Office,2006:2025.

[8]European Pharmacopoeia 8.0(volume Ⅱ)[S].Strasbourg:European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare,2013:3401.

[9]國家藥典委員會.中國藥典(二部)[S].北京：中國醫藥科技出版社,2015：184，220.

Identification of thiamazole in fufang jiakang tablets by thin-layer chromatography

ZHU Tian-mi

(DepartmentofPharmacy,HubeiProvincialHospitalofTraditionalChineseMedicine,Wuhan,Hubei430061,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a new method for identification of thiamazole in fufang jiakang tablets.MethodsThin-layer chromatography(TLC) was used.Wetting the sample with ammonia solution,then extracted with ethyl acetate,developed on TLC silica gel GF254plate,examined under ultraviolet light at 254 nm,sprayed with dilute potassium iodobismuthate solution,and compared with the chromatography of thiamazole standard.ResultsThe spot of thiamazole in fufang jiakang tablets on TLC was clear and the negative test showed no interference.ConclusionsThe method can be used to identify thiamazole in the Chinese-Western combination preparation of fufang jiakang tablets,thereby substituting the chemical reaction identification test in current drug quality standard.

Key words:Methimazole/analysis;Chromatography,thin Layer;Drug combinations

基金項目:湖北省中醫院2014—2015年度科研專項計劃項目(JDZX2014Y24)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.06.016

(收稿日期：2015-12-24,修回日期:2016-03-16)