通心降脂滴丸對犬冠脈結扎致心肌缺血的保護作用

張秀慧，常福厚,3Δ，白圖雅,3，呂曉麗,3，高峰，張夢迪

(1. 內蒙古醫科大學 藥學院，內蒙古 呼和浩特 010110；2. 內蒙古醫科大學新藥安全評價研究中心，內蒙古呼和浩特 010110；3. 內蒙古自治區新藥篩選工程研究中心，內蒙古 呼和浩特 010110)

通心降脂滴丸對犬冠脈結扎致心肌缺血的保護作用

張秀慧1,2，常福厚1,2,3Δ，白圖雅1,2,3，呂曉麗1,2,3，高峰2,3，張夢迪1,2

(1. 內蒙古醫科大學 藥學院，內蒙古 呼和浩特 010110；2. 內蒙古醫科大學新藥安全評價研究中心，內蒙古呼和浩特 010110；3. 內蒙古自治區新藥篩選工程研究中心，內蒙古 呼和浩特 010110)

目的 觀察通心降脂滴丸對犬冠脈結扎致心肌缺血的保護作用。方法 取25只健康Beagle犬，雌雄兼用，按體重隨機分為假手術組、缺血模型組、復方丹參滴丸組(陽性對照組)，通心降脂滴丸低、高劑量組，每組5只。采用冠脈結扎方法造成Beagle犬急性心肌缺血，研究通心降脂滴丸對心肌缺血后心肌缺血范圍(N-ST)、心肌缺血程度(Σ-ST)和血清中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活力以及心肌組織中丙二醛(MDA)含量的影響。結果 與缺血模型組比較，通心降脂滴丸組顯著降低N-ST、Σ-ST，抑制LDH、CK釋放，減少MDA含量而提高SOD活力(P<0.05)。結論 通心降脂滴丸對缺血心肌具有一定的保護作用。

通心降脂滴丸；心肌缺血；比格犬

心肌缺血是指心肌的供血量減少或心肌對氧的需求量增加超過其最大供血量，從而引起心肌代謝、功能和結構改變[1-2]。冠心病是引起心肌缺血最主要、最常見的病因[3-4]。隨著人民生活水平的提高，目前心肌缺血在我國的患病率呈逐年上升的趨勢[5-6]。通心降脂滴丸由丹參、三七、降香等8味中藥材組成，用于緩解胸悶、憋氣、心前區刺痛等癥狀，臨床上主要用來治療冠心病、高血脂等疾病。本課題組已報道通心降脂滴丸具有增加結扎后冠脈血流量和降低心肌細胞損傷程度的作用[7]。本文主要通過觀察通心降脂滴丸對心肌缺血后N-ST、Σ-ST，血清中LDH、CK、SOD酶活力和心肌組織中MDA含量的變化，探討通心降脂滴丸對心肌缺血的保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：Beagle犬25只，雌雄兼用，體質量5～8 kg，由北京瑪斯生物技術有限公司提供，產品許可證號：SCXK(京)2011-0003。

1.1.2 藥品與試劑：通心降脂滴丸(內蒙古醫科大學藥學院研制，批號：20120125，規格：27 mg/丸)；復方丹參滴丸(天津天士力制藥股份有限公司，國藥準字Z10950111，規格：27 mg/丸)。戊巴比妥鈉(上海西唐生物技術有限公司，批號：wS20060401)；肝素鈉注射液(天津市生物化學制藥廠，國藥準字H12020505)；0.9%氯化鈉注射液(河北天成藥業股份有限公司，批號：B11121906)；乳酸脫氫酶試劑盒、肌酸激酶試劑盒、丙二醛試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號分別為20120601、20120608、20120720和20120720)。

1.1.3 實驗儀器：呼吸機(河南輝瑞醫療器械有限公司生產，型號：HFS3000)；心外膜電極切換盒(成都泰盟科技有限公司；型號：XW-3)；冷光單孔手術照明燈(南寧市三科醫療器械有限責任公司，型號：LG001-Ⅰ型)；精密凈化交流穩壓電源(上海全力電器有限公司，型號：JJW-3KVA)；KL-1型普通手術臺(江蘇科凌醫療器械有限公司，產品編號：201002102422)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及給藥：25只比格犬隨機分為假手術組，缺血模型組，陽性對照組，通心降脂滴丸低、高劑量組，每組5只。假手術組、缺血模型組給予等體積的生理鹽水，陽性對照組給復方丹參滴丸0.215 g/kg，低劑量組為通心降脂滴丸0.225 g/kg，高劑量組為通心降脂滴丸0.712 g/kg。所有動物分別按各自劑量于手術前一周開始灌胃給藥，1次/d，連續灌胃給藥7 d，第8 d進行試驗手術操作。

1.2.2 動物模型制備[8]：取健康Beagle犬稱重后用戊巴比妥鈉(30 mg/kg)麻醉，背位固定于手術臺上，手術區備皮；連接呼吸機，左側第四肋間開胸，暴露心臟，剪開心包，做心包床；分離冠狀動脈左前降支，穿線以備結扎用；結扎冠脈，建立Beagle犬急性心肌缺血模型，假手術組只穿線不結扎；縫合心包膜，放置多點固定式心外膜電極，描記心外膜心電圖；待完全結扎15 min后，經胃管給予配制好的等體積的通心降脂滴丸、復方丹參或生理鹽水，于給藥前及給藥后30、60、90、120 min時記錄心外膜心電圖；給藥120 min測定完成以上指標后，頸動脈取血，分離血清；取下心臟用生理鹽水沖洗。

1.2.3 檢測指標：以ST段偏移大于2 mV為缺血判斷標準，計算心肌缺血范圍(N-ST)，即ST 段偏移的總mV數及心肌缺血程度(Σ-ST)，即大于2mV的點數；取頸動脈血，分離血清，測定血清乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)、肌酸激酶(creatine kinase，CK)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活力；摘取心臟，用鹽水沖洗，剔除血管和脂肪，沿冠狀溝切除心房，留下心室，取心尖部心肌組織做勻漿，測定丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量。

2 結果

2.1 通心降脂滴丸對犬冠脈結扎后心肌缺血程度(Σ-ST)的影響 與假手術組比較，缺血模型組Σ-ST顯著降低(P<0.05)；與缺血模型組比較，給藥90～120 min，通心降脂滴丸低劑量組Σ-ST顯著降低(P<0.05)，給藥60～120 min，通心降脂滴丸高劑量組Σ-ST顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 通心降脂滴丸對犬冠脈結扎所致心肌缺血程度影響±s，n=5，mV)

*P<0.05，與假手術組比較，compared with sham operation group；ΔP<0.05，與缺血模型組相比，compared with ischemia model group

2.2 通心降脂滴丸對犬冠脈結扎后心肌缺血范圍(N-ST)的影響 與假手術組比較，缺血模型組N-ST顯著降低(P<0.05)；與缺血模型組比較，給藥90～120 min，通心降脂滴丸低劑量組N-ST顯著降低(P<0.05)，給藥60～120 min，通心降脂滴丸高劑量組N-ST顯著降低(P<0.05)。見表2。

表2 通心降脂滴丸對犬冠脈結扎所致心肌缺血范圍影響±s，n=5，point)

*P<0.05，與假手術組比較，compared with sham operation group；ΔP<0.05，與缺血模型組相比，compared with ischemia model group

2.3 通心降脂滴丸對犬冠脈結扎后LDH、CK、SOD活力和MDA含量的影響 與假手術組比較，缺血模型組LDH、CK釋放顯著增加，心肌MDA含量顯著增高而SOD活力明顯下降(P<0.05)；與缺血模型組比較，通心降脂滴丸能顯著減少LDH、CK釋放，增強SOD活力而降低心肌MDA含量(P<0.05)。見表3。

表3 通心降脂滴丸對酶活力的影響±s，n=5)

*P<0.05，與假手術組比較，compared with sham operation group；ΔP<0.05，與缺血模型組相比，compared with ischemia model group

3 討論

當心肌缺血引起急性心肌缺氧導致心肌細胞膜損傷時，在細胞生化具有明顯變化之前電生理即有相應的改變，因此可以利用心外膜心電圖的測定監測心臟的功能，心外膜電圖上Σ-ST 表示心肌缺血程度，N-ST表示心肌缺血范圍[9]。本實驗結果表明不同劑量通心降脂滴丸和陽性對照藥復方丹參滴丸均可顯著改善缺血后的心外膜心電圖異常，減少E-ST和N-ST，且通心降脂滴丸的作用有一定的劑量依賴關系。高劑量的通心降脂滴丸的作用與丹參滴丸相當，提示通心降脂滴丸對缺血的心肌細胞具有顯著的保護作用。LDH和CK存在于哺乳動物細胞胞漿內，在正常生理狀態下這兩種酶不能穿通細胞膜，但是當細胞受損或死亡時，LDH和CK從細胞中釋放出來[10]，所以檢測血清中LDH和CK的活力可以反映心肌缺血程度。本實驗結果還顯示，與缺血模型組比較，不同劑量的通心降脂滴丸和陽性對照藥復方丹參滴丸均能顯著降低血清中CK、LDH 活力，其中通心降脂滴丸降低CK、LDH 活力的作用有一定的劑量依賴關系。以上結果提示通心降脂滴丸可能通過穩定缺血心肌的細胞膜，減少由心肌缺血導致的心肌細胞CK、LDH 的溢出而起到心肌保護的作用，但是其確切的機制還有待進一步研究。MDA 是心肌損傷釋放的大量氧自由基與脂質過氧化反應產生具有細胞毒性的物質，SOD是抗氧化劑，清除體內新陳代謝產生氧自由基的酶，MDA 和SOD 可作為判斷心肌損傷程度的指標[11]。實驗結果顯示，與缺血模型組比較，通心降脂滴丸低劑量和高劑量組增強SOD酶活力，并降低心肌中MDA含量。其機制可能是通心降脂滴丸中的有效成分作用于細胞膜和血液循環中的脂質，阻礙其發生脂質過氧化，并最終抑制其分解為MDA，保護細胞膜的結構和功能，減少氧化劑消耗，增加SOD活力，從而保護血管內皮的結構和功能，降低內皮細胞凋亡，減輕心肌損傷[12]。

通心降脂滴丸的主要成分是丹參、三七、降香、山楂、冰片等8味中藥材。丹參中具有抗心肌缺血作用的是其水溶性成分，主要有丹參素、丹酚酸A、丹酚酸B、原兒茶醛等[13]。研究發現丹參水提物可明顯降低體內MDA含量，提高GSH、SOD 等抗氧化物質水平，并且在體內，丹酚酸A可降低缺血心肌的LDH外漏[14]。三七的主要活力成分是三七皂苷，可抑制血栓形成，擴張外周血管，保護缺血性心肌細胞損傷，降低血壓，治療心腦血管疾病[15]。通心降脂滴丸中的8味中藥材產生的藥理作用與本次試驗結果相符，闡明了通心降脂滴丸保護冠脈結扎引起的局部缺血心肌的可能作用機制。

綜上所述，通心降脂滴丸能夠對抗心肌缺血引起的心肌細胞損傷。本次實驗證明了通心降脂滴丸的有效性，為進一步研究其藥理作用奠定了基礎。

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(編校：王冬梅)

Protective effects of Tongxin Jiangzhi dropping pills on myocardial ischemia caused by coronary artery ligation in Beagle dogs

ZHANG Xiu-hui1,2, CHANG Fu-hou1,2,3Δ, BAI Tu-ya1,2,3, LV Xiao-li1,2,3, GAO Feng2,3, ZHANG Meng-di1,2

(1. Department of Pharmacology, College of Pharmacy, Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110, China; 2. The Center for New Drug Safety Evaluation and Research of Inner Mongolia Medical University, Hohhot 010110, China; 3. Inner Mongolia Autonomous Region Engineering Research Center of New Pharmaceutical Screening, Hohhot 010110, China)

ObjectiveTo investigate the protective effects of Tongxin Jiangzhi dropping pills on myocardial ischemia caused by coronary artery ligation in Beagle dogs.MethodsTotally 25 Beagle dogs were randomly divided into sham operation group, ischemia model group, compound danshen dropping pills group (positive control group), low dose Tongxin Jiangzhi dropping pills group and high dose Tongxin Jiangzhi dropping pills group, 5 dogs in each group. The ischemic model was made by occluding the anterior descending of the left artery in Beagle dogs, then the areas of the myocardial ischemia and the degree of the myocardial ischemia were calculated. At the same time, the activity of lactate dehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK), levels of the superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) content in serum and myocardial tissue were measured. All of them were used to evaluate the protective effects of Tongxin Jiangzhi dropping pills on myocardial ischemia caused by coronary artery ligation in Beagle dogs.ResultsCompared with the ischemia model group, the Tongxin Jiangzhi dropping pills groups showed obvious reduction in Σ-ST, N-ST and notable inhibition in LDH and CK release. Moreover, the MDA content was markedly reduced and the activity of SOD was significantly promoted(P<0.05).ConclusionTongxin Jiangzhi dropping pills has a protective effect on myocardial ischemia induced by coronary artery ligation in Beagle dogs.

Tongxin Jiangzhi dropping pills; myocardial ischemia; Beagle dog

張秀慧，女，碩士在讀，研究方向：生化與分子藥理學，E-mail：13947123375@163.com；常福厚，通信作者，男，博士，教授，研究方向：生化與分子藥理學，E-mail：Changfh@sina.com。

R972

A

10.3969/j.issn.1005-1678.2016.03.07