GC—MS/MS法分析不同產(chǎn)地延胡索中有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留

徐皓++秦公偉++王哲

摘要：建立了1種簡便快速的毛細(xì)管氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法，分析不同產(chǎn)地延胡索中有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留，并對樣品中農(nóng)藥提取凈化的方法進(jìn)行比較研究。結(jié)果表明：凈化柱中不添加活性炭，農(nóng)藥殘留檢出種類和檢出效果好，13個不同產(chǎn)地的延胡索均符合綠色中藥標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：延胡索；有機(jī)氯農(nóng)藥；擬除蟲菊酯；氣相質(zhì)譜聯(lián)用

中圖分類號： TQ450.2+63文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2016）05-0355-04

延胡索（Corydalis yanhusuo W. T. Wang）別稱元胡、延胡、玄胡，為罌粟科（Papaveraceae）多年生草本植物延胡索的干燥塊莖，其塊莖入藥，有活血散瘀、理氣止痛的作用[1]。延胡索含多種生物堿，其中延胡索乙素、延胡索丑素為止痛、鎮(zhèn)靜的主要成分。延胡索主要分布于浙江、江蘇、安徽、陜西等地，其中浙江東陽、磐安、縉云、永康等地，以及江蘇南通地區(qū)的栽培面積最大，近年來陜西漢中的栽培面積也不斷擴(kuò)大[2]。

我國是中藥材生產(chǎn)大國，然而中藥產(chǎn)品的總出口額卻僅占世界藥品銷售量的1%，其中一個重要的原因即是農(nóng)藥殘留問題。目前較常用的農(nóng)藥品種主要有有機(jī)磷類、有機(jī)氯類、擬除蟲菊酯類和氨基甲酸酯類[3]。有機(jī)氯農(nóng)藥脂溶性強(qiáng)，難降解，極易造成土壤、水體和空氣的污染，并通過食物鏈富集而影響人類健康[4]。雖然有機(jī)氯農(nóng)藥已被禁用，但目前在中藥材中仍有檢出[5-11]。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥與有機(jī)氯農(nóng)藥相比具有高效、低毒、低殘留等優(yōu)點(diǎn)，是一類廣譜殺蟲劑，在近些年的中草藥檢測中發(fā)現(xiàn)，該類農(nóng)藥的殘留水平也較高，這將使我國的中草藥現(xiàn)代化和國際化發(fā)展嚴(yán)重滯后，并危害廣大消費(fèi)者的健康[12]。

本研究采用氣相色譜質(zhì)譜串聯(lián)檢測并分析比較13個不同產(chǎn)地延胡索中含有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥的種類和含量，以期考察它們是否符合綠色中藥標(biāo)準(zhǔn)，為13個不同產(chǎn)地延胡索的用藥安全提供參考。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

TRACE GC Ultra氣相色譜儀（美國賽默飛公司）；ITQ900質(zhì)譜儀（北京歐倍爾科學(xué)儀器有限公司）；DB-17MS石英毛細(xì)管柱（60 m×0.25 mm×0.25 μm，美國Agilent公司）；KSW-12D-11馬弗爐（沈陽市節(jié)能電爐廠）；THZ-82水浴恒溫振蕩器（常州國華電器有限公司）；ME104E電子天平（美國梅特勒公司）；MTN-2800D氮吹儀（北京花蕊博遠(yuǎn)科技發(fā)展有限公司）；101-3型電熱鼓風(fēng)干燥箱（鄭州宏朗儀器設(shè)備有限公司）。

18種有機(jī)氯和擬除蟲菊酯混標(biāo)：α-六六六（α-BHC）、五氯硝基苯（quintozene）、γ-六六六（γ-BHC）、環(huán)氧七氯（heptachlor epoxide）、β-六六六（β-BHC）、δ-六六六（δ-BHC）、p，p′-滴滴伊（4，4′-DDE）、o，p′-滴滴伊（0，4′-DDE）、p，p′-滴滴滴（4，4′-DDD）、p，p′-滴滴涕（4，4′-DDT）、聯(lián)苯菊酯（bifenthrin）、甲氰菊酯（fenpropathrin）、三氟氯氰菊酯（cyhalothrin）、氯菊酯2（permethrin）、氟氯氰菊酯3（cyfluthrin）、氯氰菊酯3（cypermethrin）、氰戊菊酯2（fenvalerate）、溴氰菊酯（deltamethrin），購自ULTRA公司（每支100 μg/mL）；石油醚、乙酸乙酯、無水硫酸鈉為分析純；超純水；弗羅里硅土（于550 ℃灼燒4 h后備用，用前于140 ℃烘2 h，趁熱加5%水滅活）。

1.2試驗材料

試驗材料為2012年4月初采挖的干燥藥材，購于藥材市場。產(chǎn)地分別為湖南新化（Y1）、遼寧清原（Y2）、浙江仙居（Y3）、浙江東陽（Y4）、浙江磐安（Y5）、 漢中城固（Y6）、山東泰安（Y7）、安徽亳州（Y8）、河南輝縣（Y9）、吉林通化（Y10）、黑龍江綏化、（Y11）、湖北鄖西（Y12）、廣西河池（Y13）。

1.3試驗方法

1.3.1提取方法準(zhǔn)確稱取10.0 g延胡索樣品于100 mL具塞三角瓶中，加入20 mL石油醚溶液，將三角瓶放入30 ℃水浴恒溫振蕩器中振蕩30 min以提取農(nóng)藥殘留；完成后將提取液用添加有無水硫酸鈉的漏斗過濾到50 mL具塞三角瓶中，在100 mL具塞三角瓶中再次加入10 mL石油醚，在水浴恒溫振蕩器中振蕩30 min，過濾、合并2次提取液；在60 ℃干燥箱中濃縮至2 mL左右，待凈化[13]。

1.3.2樣品農(nóng)藥的凈化方法分別對13個延胡索樣品進(jìn)行提取和濃縮處理。方法1：用20 mL石油醚活化裝有1 g無水硫酸鈉、5 g弗羅里硅土、1 g無水硫酸鈉的小柱，將已濃縮的提取液傾倒入毛細(xì)管柱內(nèi)，用20 mL石油醚-乙酸乙酯（體積比85 ∶15）淋洗小柱，將淋洗液收集于20 mL離心管中，于60 ℃用氮吹儀濃縮至1 mL以下，用石油醚定容至1 mL，供氣相色譜測定。

方法2：在裝柱過程中按照“1 g無水硫酸鈉、5 g弗羅里硅土、0.5 g活性炭、1 g無水硫酸鈉”的順序填裝。試驗過程與方法1相同。

準(zhǔn)確稱取4份混合延胡索樣品，每份10.0 g，分別加入各組分濃度約為1 μg/mL的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)使用液100 μL。分別根據(jù)方法1、方法2對樣品中的有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥進(jìn)行提取和凈化，進(jìn)行方法比較研究。

1.3.3氣相色譜條件色譜柱：DB-17MS石英毛細(xì)管柱（60 m×0.25 mm×0.25 μm）；色譜柱溫度：40 ℃，保持1 min，然后以30 ℃/min程序升溫至130 ℃，再以5 ℃/min升溫至250 ℃，最后以10 ℃/min升溫至300 ℃，保持5 min；載氣：氦氣，純度≥99.99%，流速1.2 mL/min；進(jìn)樣口溫度：290 ℃；進(jìn)樣量：5 μL，無分流進(jìn)樣，1.5 min后打開閥；電子轟擊源：70 eV；離子源溫度：230 ℃；GC-MS接口溫度：280 ℃。選擇離子監(jiān)測：每種化合物分別選擇1個定量離子、2～3個定性離子。每組所有需要檢測離子按照出峰順序，分時段分別檢測。

2結(jié)果與分析

2.1標(biāo)準(zhǔn)品的制備

取濃度20 μg/mL的農(nóng)藥儲備液：0.25 mL 8種有機(jī)氯混標(biāo)、0.2 mL五氯硝基苯、0.6 mL氯菊酯2、0.5 mL氰戊菊酯3、0.5 mL 甲氰菊酯、0.5 mL氯氰菊酯2、0.2 mL三氟氯氰菊酯、0.5 mL 溴氰菊酯、0.5 mL聯(lián)苯菊酯、0.5 mL氟氯氰菊酯3，用正己烷定容至5 mL容量瓶中，得到濃度為1 μg/mL的使用液。

2.2標(biāo)準(zhǔn)品色譜-質(zhì)譜的條件

2.2.1單個標(biāo)準(zhǔn)品的色譜-質(zhì)譜條件選擇將濃度為 20 μg/mL 的18種農(nóng)藥標(biāo)品單標(biāo)分別進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量 1 μL，獲得每種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在“1.3.3”節(jié)色譜條件下的保留時間（RT）。18種有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥的名稱、美國化學(xué)文摘社（CAS）號、各自的保留時間及依據(jù)單種標(biāo)準(zhǔn)品各離子碎片在譜庫、儀器中響應(yīng)選擇的特征離子見表1。

2、3表示該農(nóng)藥有2個或3個同分異構(gòu)體。

2.2.2混和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的色譜-質(zhì)譜條件選擇采用相同的選擇性離子檢測（SIM）起始時間，將濃度為1 μg/mL的18種有機(jī)氯、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥基質(zhì)混標(biāo)進(jìn)樣5 μL，確定準(zhǔn)確的保留時間，并依據(jù)離子強(qiáng)度和基質(zhì)背景從特征離子中選出定量離子，其余3個離子則為定性離子。18種有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥基質(zhì)混標(biāo)中各組分的保留時間和定量離子見表2，基質(zhì)混標(biāo)總離子流見圖1。

2.3樣品中農(nóng)藥殘留的測定

樣品提取、凈化后，加入50 μL內(nèi)標(biāo)溶液，定容至1 mL，每次進(jìn)樣量5 μL，每個樣品進(jìn)樣3次，得到不同產(chǎn)地中有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留定量離子的積分面積（表3）。藥殘留結(jié)果表明：7個產(chǎn)地延胡索（Y1、Y2、Y3、Y5、Y9、Y10、Y13）樣品中，雖然有氯菊酯2、氰戊菊酯2種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留檢出，但含量及其微小，氯菊酯含量﹤0.025 0 mg/kg、氰戊菊酯含量均 ﹤0.050 0 mg/kg，未超出綠色農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)。

根據(jù)相應(yīng)公式計算農(nóng)殘含量[14]，計算結(jié)果扣除空白值。

3討論

本試驗在方法1用20 mL石油醚活化裝有1 g無水硫酸鈉、5 g弗羅里硅土、1 g無水硫酸鈉的小柱，方法2是在GB/T 5009.146—2008《植物性食品中有機(jī)氯和擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多種殘留量的測定》基礎(chǔ)上加以改進(jìn)的新方法，在弗羅里硅土小柱中添加了活性炭。弗羅里硅土可以吸附極性化合物，如顏料和其他干擾成分，弗羅里硅土干擾化合物保留的相互作用主要是由于它們之間的極性官能團(tuán)，如氫鍵的作用[15]。層析柱采用單一填料弗羅里硅土，洗脫液顏色較深，而添加活性炭可以明顯減少洗脫液顏色，簡化了操作步驟，減少了試劑的用量；但與不加活性炭的檢測結(jié)果相比，農(nóng)藥殘留量較少。這是由于活性炭吸附作用太強(qiáng)，使農(nóng)藥洗脫不完全[13]，一部分表3不同產(chǎn)地中有機(jī)氯、擬除蟲菊酯農(nóng)藥殘留定量離子的積分面積殘留在層析柱上導(dǎo)致含量偏低。雖然加標(biāo)混樣中農(nóng)藥檢出的種類較少，但在方法比較中可以明顯發(fā)現(xiàn)添加活性炭后，其對農(nóng)藥具有較強(qiáng)的吸附能力。因此可知，沒有添加活性炭的試驗方法優(yōu)于添加活性炭的試驗方法。通過對13個不同產(chǎn)地延胡索樣品的進(jìn)樣分析可知，所有樣品均未超出綠色農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)。參考文獻(xiàn)：

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