活性炭對注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸含量及澄清度與顏色的影響

張傳蘭，徐全華，馬偉平

(杭州澳亞生物技術有限公司，浙江 杭州　310018)

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活性炭對注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸含量及澄清度與顏色的影響

張傳蘭，徐全華，馬偉平

(杭州澳亞生物技術有限公司，浙江 杭州310018)

摘要：目的研究活性炭對注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸含量及澄清度與顏色的影響，為該制劑工藝研究中活性炭用量的選擇提供科學依據。方法采用高效液相色譜法測定丁二磺酸腺苷蛋氨酸含量和紫外-可見分光光度法測定澄清度與顏色。結果隨著活性炭用量的增加，藥物的含量降低；當活性炭用量為0.05%時，溶液的澄清度與顏色有輕微的改善，但隨著活性炭用量的增加，溶液的澄清度逐漸降低，顏色加深。結論注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸的活性炭適宜用量為0.05%，過量的活性炭加入可直接影響藥品的質量。

關鍵詞：炭;S-腺苷甲硫氨酸;分光光度法,紫外線;色譜法,高壓液相

腺苷蛋氨酸(Ademetionine)是存在于人體所有組織和體液中的一種生理活性物質。它作為甲基供體(轉甲基作用)和生理性巰基化合物(如半胱氨酸、谷胱甘肽和輔酶A等)參與體內重要的生化反應。在肝內，通過使質膜磷脂甲基化而調節肝臟細胞膜的流動性，而且通過轉巰基反應可以促進解毒過程中硫化產物的合成。只要肝內腺苷蛋氨酸的生物利用度在正常范圍內，這些反應就有助于防止肝內膽汁郁積。腺苷蛋氨酸主要用于治療肝硬化前和肝硬化所致肝內膽汁郁積和妊娠期肝內膽汁郁積[1]。活性炭系由木炭、各種果殼和優質煤等作為原料，通過物理和化學方法對原料進行破碎、過篩、催化劑活化、漂洗、烘干和篩選等一系列工序加工制造而成具有很強吸附能力的多孔疏松物質，在醫藥工業中作吸附劑使用[2]。已有較多文獻報導，活性炭對藥物有較強的吸附作用，直接影響藥物的含量，但對藥物澄清度和顏色的影響報導較少。本研究采用高效液相色譜法和紫外-可見分光光度法考察不同用量活性炭對注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸含量及澄清度與顏色的影響，旨在為該制劑工藝研究中活性炭用量的選擇提供科學依據。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agient 1200型高效液相色譜儀，包括：G1322A真空脫氣機，G1311A四元泵，G1329A自動進樣器、G1316A柱溫箱、G1314B可變波長檢測器和LC Chemstation工作站(美國安捷倫科技有限公司)；BP211D型電子天平(Sartorius 公司)；UV2500型紫外可見分光光度計(島津儀器蘇州有限公司)；C.MAG.HS7型恒溫磁力攪拌器(德國IKA集團)；LD4-2型離心機(北京醫用離心機廠)。

1.2試藥丁二磺酸腺苷蛋氨酸(浙江普洛家園藥業有限公司，批號：1607-1303003)；活性炭(浙江杭木工業有限公司活性炭分公司)；甲酸銨(上海凌峰化學試劑有限公司)；辛烷磺酸鈉(山東禹王實業有限公司化工分公司)；甲酸(上海凌峰化學試劑有限公司)；乙腈(美國TEDIA公司)，除乙腈為色譜純外，其它試劑均為分析純。

2　方法與結果

2.1供試樣品的制備按注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸的處方精密稱取丁二磺酸腺苷蛋氨酸50g(以腺苷蛋氨酸計)，置1 L燒杯中，加適量注射用水，用玻棒攪拌至溶解，轉移置500 mL量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。

2.2供試樣品的處理取供試樣品7份，每份精密量取50 mL，置燒杯中，分別加入0、25、50、100、150、300、500 mg活性炭，置恒溫磁力攪拌器上攪拌吸附30min，高速離心機離心脫炭10min，取上清液進行測定。

2.3樣品含量測定色譜條件與系統適用性試驗色譜柱為CAPCELL PAKC18MGⅡ(4.6 mm×250 mm，5 μm)；取甲酸銨12.612 g，辛烷磺酸鈉1.0 g，加水1 000 mL溶解，用甲酸調節pH至2.80，量取900 mL，加乙腈100 mL，搖勻，作為流動相；檢測波長為260 nm；流速為1.5 mL·min-1；柱溫為30℃。

測定法分別精密量取經活性炭處理后的供試樣品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，精密量取16 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取未經活性炭處理的供試樣品溶液1 mL，置100 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液，同法測定。含量以供試品溶液峰面積除以對照溶液峰面積進行計算。測定結果見表1和圖1。

研究結果表明：隨著活性炭用量的增加，對藥物的吸附率逐漸增大，表明活性炭對注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸有吸附作用。

A　吸附前樣品(不加活性炭)

B　吸附后樣品(0.05%活性炭) 圖1　不同用量活性炭對溶液含量影響的HPLC色譜圖

2.4樣品溶液的澄清度與顏色測定取經活性炭處理和未經處理的供試樣品，采用紫外-可見分光光度法在550 nm波長處測定透光率(T)，在450 nm波長處測定吸光度。測定結果見表2。澄清度與顏色測定的方法及參數依據見討論。

研究結果表明：當活性炭用量為0.05%時，溶液的透光率略有提高，吸光度略有下降，表明活性炭在該濃度時對溶液的澄清度與顏色有一定的改善作用，但隨著活性炭用量的增加，溶液的澄清度逐漸降低，顏色加深。

基于活性炭對藥物含量及澄清度與顏色的影響研究結果，確定注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸溶液的活性炭用量為0.05%。

3　討論

利用紫外-可見分光光度法在450 nm附近波長處測定吸光度，是原料藥和制劑顏色檢查中較為普遍的方法。國家藥品標準(化學藥品)正文各論編寫細則第二部分原料藥標準編寫細則規定，溶液的顏色可在可見光波長范圍內測定吸光度或采用儀器測色的方法；第三部分制劑標準編寫細則規定，對于顏色的測定，除采用目視比色法外，也可采用儀器測色法，以解決目視比色法較難判斷的實際問題[3]。據統計，中國藥典2015年版二部已經收載了51個藥物品種通過吸光度控制藥物的顏色[4]，選擇的波長在450 nm附近的可見光區域，如維生素C注射液(420 nm)，氧氟沙星氯化鈉注射液(450 nm)和鹽酸多巴酚丁胺(480 nm)等， 波長的選擇應根據各品種吸光度的研究結果確定。據文獻報導，張曉偉采用紫外-可見分光光度法測定維生素C注射液在420 nm波長處的吸光度進行不同滅菌工藝樣品的質量評價[5]，顏麗等對雙黃連粉針活性炭處理前后的溶液顏色采用460 nm波長處的吸光度進行比較研究[6]。因此，在目視比色法較難判定情況下，通過紫外-可見分光光度法在450 nm附近波長處測定吸光度可以作為產品工藝研究、制劑性能評價、質量標準研究和藥物穩定性試驗的顏色指標評價方法。

表1　不同用量活性炭對溶液含量的影響

表2　不同用量活性炭對溶液的澄清度與顏色的影響

國家藥品標準(化學藥品)正文各論編寫細則第二部分原料藥標準編寫細則規定，將藥物用溶劑制成一定濃度的溶液，采用紫外-可見分光光度法，在特定波長處測定透光率，用于檢查溶液的澄清度與顏色，控制產品質量[1]。據統計，中國藥典2015年版二部已經收載了38個藥物品種通過透光率控制藥物的澄清度與顏色，包括氨基酸類原料藥(如門冬氨酸和甘氨酸等)及其他原料藥和制劑(如羧甲司坦、注射用肌苷等)。由于注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸溶液為無色，適宜于采用中國藥典澄清度檢查法第一法(目視法)濁度標準原液的制備所選用的550 nm波長處進行澄清度(以透光率為指標)的研究。

活性炭是具有很強吸附能力的多孔疏松物質，供注射用的活性炭已經收載于2015年版四部藥用輔料中，建立了吸著力和活性炭對細菌內毒素吸附力二項功能性指標。吳雙俊研究了活性炭對鹽酸格拉司瓊注射液含量的影響，結果表明：活性炭濃度越大，吸附程度相對增加[7]。吳彩萍研究了不同活性炭濃度對泮托拉唑唑鈉溶液的影響，表明增加活性炭用量對顏色改善影響不大，高濃度時反而使溶液顏色加深[8]。本研究結果表明，隨著活性炭用量的增加，注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸溶液的含量降低，溶液的澄清度降低，顏色加深，與上述研究結論基本一致。在原料藥精制過程中，活性炭的澄清與脫色作用基于藥液粗品濁度大和色澤深，在使用高濃度的活性炭后能起到明顯的作用。而在制劑生產中，由于原輔料已經經過精制，其澄清度和顏色已經進行了嚴格的質量控制，過量的活性炭加入除引起含量降低外，反而會使溶液的澄清度變差，溶液顏色加深。因此，在制劑生產中應嚴格控制活性炭質量和使用濃度，以保證藥品符合質量標準的要求。

參考文獻

[1]注射用丁二磺酸腺苷蛋氨酸說明書[DB/OL].http://db.yaozh.com/instruct/104448.html.

[2]國家藥典委員會.中國藥典(四部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015：541-542.

[3]國家藥典委員會.國家藥品標準技術規范 國家藥品標準工作手冊.4版[M].北京：中國醫藥科技出版社，2013：202，210，255.

[4]國家藥典委員會.中藥典(二部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2015:288.

[5]張曉偉.維生素C注射液穩定性的相關探討[J].中國新技術新產品，2012(11):23.

[6]顏莉.雙黃連粉針活性炭處理前后的對比試驗研究[J].生物技術世界，2013(9):45-46.

[7]吳雙俊.活性炭對鹽酸格拉斯瓊注射液含量和pH的影響[J].亞太傳統醫藥，2012，8(4):18-19.

[8]吳彩萍.泮托拉唑鈉凍干粉針劑生產工藝考察[J].中國藥師，2011，14(11):1600-1601.

通信作者：徐全華，男，高級工程師，研究方向：藥品生產質量管理和藥品研究開發，E-mail：xqh_923@163.com

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.07.011

(收稿日期：2016-02-27，修回日期：2016-05-11)

Effects of actived carbon on the content,clarity and color of Ademetionine 1,4-ButanedisulfonateforInjection

ZHANG Chuanlan， XU Quanhua，MA Weiping

(HangzhouAusiaBiologicalTechnicCo,Ltd.,Hangzhou，Zhejiang310018,China)

Abstract:ObjectiveTostudythe effect of activated carbon on the content,clarity and color of Ademetionine 1,4-ButanedisulfonateforInjectionin order toprovidescientific basis for the selection of concentration of activated carbon.MethodsHPLC was adopted to measure the content of Ademetionine 1,4-Butanedisulfonate.Ultraviolet-visible spectrophotometry was used for the examination of its clarity and color.ResultsThe content of active ingredientwas reduced with the increase inconcentration of activated carbon.The clarity and color of the solution was slightly improved when the concentration of activated carbon was 0.05%,but the clarity became turbidand the color was deepenedwith the increase inconcentration of activated carbon.ConclusionsThe suitable concentration of activated carbon for Ademetionine 1,4-Butanedisulfonate for Injection was 0.05%,and excessive use of activated carbon may affect the pharmaceutical preparation’s quality directly.

Key words：Charcoal;S-Adenosylmethionine;Spectrophotometry,Ultraviolet;Chromatography,High Pressure Liquid