參七合劑對高脂血癥大鼠sLOX-1、SOD、NO和膽汁酸代謝的影響

蔣 銳， 姜海斌*， 劉柏炎， 楊麗潔， 金 娟（.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)科教研室，湖南常德45000；.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一中醫(yī)臨床學(xué)院，湖南長沙4008）

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參七合劑對高脂血癥大鼠sLOX-1、SOD、NO和膽汁酸代謝的影響

蔣 銳1， 姜海斌1*， 劉柏炎2， 楊麗潔1， 金 娟1
（1.常德職業(yè)技術(shù)學(xué)院內(nèi)科教研室，湖南常德415000；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一中醫(yī)臨床學(xué)院，湖南長沙410208）

目的 觀察參七合劑 （西洋參、三七、熟何首烏）對高脂血癥模型大鼠血漿凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1（serum 1ectin-1ike oxidized 1ow density 1ipoprotein receptor-1，sLOX-1）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮 （NO）、內(nèi)皮素 （ET）和膽汁酸代謝的影響，探討其血管保護(hù)的作用機(jī)制。方法 將120只SD大鼠雌雄分開，隨機(jī)分成對照組 （20只）和造模組 （100只），使用高脂飼料喂養(yǎng)10 d造模。將造模組大鼠按血脂水平先分層，再隨機(jī)分為模型組，辛伐他汀組 （給予辛伐他汀0.002 g/kg灌胃），參七合劑小、中、高劑量組 （分別給予參七合劑1、2、4 g/kg灌胃），每組20只。繼續(xù)喂養(yǎng)20 d后，按照試劑盒要求檢測sLOX-1、SOD、MDA、NO、ET、總膽汁酸（tota1bi1e acid，TBA）及血脂水平。結(jié)果 與對照組比較，模型組SOD、NO顯著降低（P＜0.01），sLOX-1、MDA、ET、TBA顯著升高 （P＜0.01）。與模型組比較，參七合劑各組SOD、NO及糞TBA顯著升高 （P＜0.05，P＜0.01），sLOX-1、MDA、ET顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），血清TBA無差異（P＞0.05）。sLOX-1水平與總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平呈現(xiàn)正相關(guān)（r=0.651、P＜0.05，r=0.744、P＜0.05）。結(jié)論 參七合劑通過降低LOX-1的表達(dá)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)氧化與過氧化水平的平衡、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，對高脂血癥模型大鼠的血管起到保護(hù)作用；通過增加糞便中膽汁酸的排泄量間接降低血液中膽固醇的水平。

參七合劑；高脂血癥；凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1；血管保護(hù)；膽汁酸

高脂血癥（hyper1ipidemia，HLP）是由于脂肪代謝或運(yùn)轉(zhuǎn)異常使總膽固醇 （TC）、三酰甘油 （TG）和 （或）低密度脂蛋白膽固醇 （LDL-C）過高，和 （或）高密度脂蛋白膽固醇 （HDL-C）過低而引發(fā)的一種病癥［1］。近年來，隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的改變，高脂血癥的發(fā)生率在逐年上升。以動脈粥樣硬化-血栓為基礎(chǔ)的冠心病是諸多危險因素所致的慢性疾病，大量的研究表明吸煙、膽固醇升高、高血壓和糖尿病是冠心病致病性的危險因素。血漿膽固醇尤其是LDL-C升高是冠心病發(fā)生、發(fā)展的必備條件［2］。當(dāng)血脂升高時，過多的脂質(zhì)沉積于血管壁和血管內(nèi)皮細(xì)胞上，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞SOD活性降低，最終氧化應(yīng)激反應(yīng)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞［3］。降低異常升高的血脂水平是預(yù)防心腦血管疾病發(fā)生，改善冠心病進(jìn)程的有效途徑［4］。膽汁酸主要在肝內(nèi)合成，有清除膽固醇、轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)物質(zhì)以及負(fù)反饋調(diào)節(jié)膽汁酸和膽固醇的生物合成等作用，肝臟合成膽汁酸的能力下降直接影響血液中膽固醇的水平［5］。中藥降脂研究已成為當(dāng)前的熱點(diǎn)，具有現(xiàn)實(shí)的臨床意義。前期實(shí)驗(yàn)研究顯示參七合劑對高脂血癥大鼠有較好的降脂作用［6］。本研究旨在通過實(shí)驗(yàn)觀察參七合劑對高脂血癥大鼠sLOX-1、SOD、MDA、NO、ET、TBA等指標(biāo)的影響，進(jìn)一步探討參七合劑對血管的保護(hù)作用及降脂機(jī)制。

1　材料

1.1動物 SPF級SD大鼠，120只，雌雄各半，體質(zhì)量（197±16）g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號SCXK（湘）2013-0004。SD大鼠飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心SPF級實(shí)驗(yàn)室，恒溫（20～22℃）、恒濕 （50%～60%）。

1.2藥物 參七合劑由西洋參、三七、熟何首烏組成，藥物飲片購自長沙九芝堂藥材公司，粉碎，過200目篩，鈷60消毒。辛伐他汀 （10 mg/片，哈藥集團(tuán)三精明水藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20010454）；蛋黃粉購自安徽亳州市眾意蛋業(yè)有限責(zé)任公司 （批號20130926）；膽固醇和甲硫氧嘧啶購自天津博迪化工股份有限公司 （批號分別為20131214、20131109）；膽鹽購自上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司 （批號20120906）。

1.3試劑 TC（批號20140408）、TG（批號20140217）、LDL-C（批號20140403）、HDL-C（批號20140120）、SOD（批 號20140424）、MDA （20140307）、NO （批 號20131227）、ET（批號 20131125）以及 TBA （批 號20140320）試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品；LOX-1試劑盒 （批號20140211）為美國R&D公司產(chǎn)品。

1.4儀器 O1ympus AU600型全自動生化分析儀（日本奧林巴斯）。

2　方法

2.1造模及分組 120只SD大鼠普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后先將雌雄分開，然后分別將雌、雄SD大鼠隨機(jī)分成對照組20只、造模組100只，兩組中雌雄各半。對照組給予普通飼料，造模組給予高脂飼料［6］，自然攝食，連續(xù)喂養(yǎng)10 d。第11天，120只SD大鼠尾靜脈采血，檢測TC、TG、LDL-C、HDL-C。將造模組大鼠雌雄分開，按照血脂4項(xiàng)水平先分別分層，然后隨機(jī)分成模型組，辛伐他汀組，參七合劑小、中、高劑量組，每組20只，雌雄各半。對照組繼續(xù)給予普通飼料，模型組、藥物干預(yù)各組均給予高脂飼料，繼續(xù)喂養(yǎng)20 d。

2.2給藥 給藥劑量換算方法［7］：，其中D、R、W分別為給藥劑量、體型系數(shù)、體質(zhì)量。人、鼠的體型系數(shù)分別為R人=0.1、R鼠= 0.09。以臨床等效劑量的1、2、4倍量作為SD大鼠的小、中、高劑量，則參七合劑小、中、高劑量組每只SD大鼠的給藥量分別為0.2、0.4、0.8 g。參七合劑用2%羧甲基纖維素鈉蒸餾水溶液配制成0.1、0.2、0.4 g/mL的混懸液，使用時搖勻；辛伐他汀 （10 mg/片）溶于蒸餾水，配制成0.2mg/mL的溶液，藥物4℃保存。藥物干預(yù)各組分別給予辛伐他汀或不同質(zhì)量濃度參七合劑混懸液2 mL/只灌胃，對照組和模型組均給予蒸餾水2 mL/只灌胃，給藥在晚8時進(jìn)行。

2.3指標(biāo)檢測 收集實(shí)驗(yàn)最后3 d大鼠糞便，-20℃保存。末次灌胃后，禁食不禁水12 h，腹腔注射烏拉坦1.5 g/kg麻醉，腹主動脈采血。使用自動生化分析儀按照試劑盒操作說明，用酶水解法檢測TC、TG、LDL-C、HDL-C，用酶循環(huán)法檢測TBA，用黃嘌呤氧化酶法檢測SOD，用硝酸還原酶法檢測NO，用硫代巴比妥酸法檢測MDA，用ELISA檢測ET。用ELISA法，嚴(yán)格按照試劑盒操作步驟執(zhí)行，以標(biāo)準(zhǔn)品0、16、32、62.5、125、250、500、1 000 pg/mL的光密度 （D）值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品 （D）值計(jì)算sLOX-1的質(zhì)量濃度［8］。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。相關(guān)分析用單因素Pearson分析。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3　結(jié)果

3.1參七合劑對大鼠sLOX-1及血脂水平的影響 與對照組比較，其他各組sLOX-1及TC、TG、LDL-C水平均顯著升高，HDL-C顯著降低（P＜0.01），表明本實(shí)驗(yàn)高脂血癥大鼠模型構(gòu)建成功。與模型組比較，參七合劑各組、辛伐他汀組sLOX-1、TC、TG、LDL-C降低，HDL-C升高（P＜0.01）。與辛伐他汀組比較，參七合劑小、中劑量組TC、LDL-C顯著降低，HDL-C顯著升高（P＜0.01），sLOX-1、TG沒有差異（P＞0.05），參七合劑高劑量組sLOX-1、TC、TG、LDL-C、HDL-C均沒有差異（P＞0.05）。單因素Pearson分析結(jié)果顯示sLOX-1水平與TC、LDL-C水平呈現(xiàn)正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為r=0.651、P＜0.05，r=0.744、P＜0.05。結(jié)果表明高脂血癥能使大鼠血漿中sLOX-1升高；參七合劑、辛伐他汀均能明顯降低高脂血癥大鼠sLOX-1；參七合劑小、中劑量對高脂血癥大鼠TC、LDL-C、HDL-C的影響優(yōu)于辛伐他汀。見表1。

表1　參七合劑對大鼠sLOX-1及血脂水平的影響（±s，n=20）

表1　參七合劑對大鼠sLOX-1及血脂水平的影響（±s，n=20）

注：與對照組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，★P＜0.01；與辛伐他汀組比較，#P＜0.01

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3.2參七合劑對大鼠SOD、MDA、NO、ET水平的影響與對照組比較，其他各組SOD、NO顯著降低 （P＜0.01）而MDA、ET顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，參七合劑各組、辛伐他汀組SOD、NO升高 （P＜0.05，P＜0.01），MDA、ET降低 （P＜0.05，P＜0.01）。與辛伐他汀組比較，參七合劑各組ET、NO沒有差異 （P＞0.05）；參七合劑小、中劑量組MDA降低、SOD升高顯著 （P＜0.01），高劑量組沒有差異 （P＞0.05）。結(jié)果表明高脂血癥能使大鼠血清中SOD、NO降低，MDA、ET升高；參七合劑、辛伐他汀均能明顯降低高脂血癥大鼠MDA、ET，升高SOD、NO，可明顯抑制大鼠的脂質(zhì)過氧化過程，改善大鼠血管NO的釋放及血管的舒張能力和自我修復(fù)能力；參七合劑小、中劑量對MDA、SOD的影響優(yōu)于辛伐他汀。見表2。

3.3參七合劑對大鼠TBA水平的影響 與對照組比較，其他各組血清和糞TBA顯著升高 （P＜0.01）。與模型組比較，參七合劑各組、辛伐他汀組血清TBA水平?jīng)]有差異（P＞0.05），糞TBA顯著增加 （P＜0.01）。與辛伐他汀組比較，參七合劑各組血清TBA沒有差異 （P＞0.05），小、中劑量組糞TBA顯著增加 （P＜0.01）。結(jié)果表明高脂血癥能使大鼠血清和糞TBA升高；參七合劑、辛伐他汀均能明顯增加高脂血癥大鼠糞TBA、而對血清TBA沒有影響。參七合劑小、中劑量對糞TBA的影響優(yōu)于辛伐他汀。見表3。

表2　參七合劑對大鼠SOD、MDA、NO、ET的影響（±s，n=20）

表2　參七合劑對大鼠SOD、MDA、NO、ET的影響（±s，n=20）

注：與對照組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，★P＜0.01，●P＜0.05；與辛伐他汀組比較，#P＜0.01

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表3　參七合劑對大鼠TBA水平的影響（±s，n=20）

表3　參七合劑對大鼠TBA水平的影響（±s，n=20）

注：與對照組比較，▲P＜0.01；與模型組比較，★P＜0.01；與辛伐他汀組比較，#P＜0.01

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4　討論

血脂異常對健康的損害主要在心血管系統(tǒng)，富含TG的脂蛋白具有致動脈粥樣硬化的作用［9］，TG、LDL-C升高是主要致病危險因素。LDL是血液中膽固醇的主要攜帶者，通過血管內(nèi)皮進(jìn)入血管壁內(nèi)，在內(nèi)皮下滯留的LDL被修飾成氧化型LDL（oxidized 1ow-density 1ipoprotein，ox-LDL），巨噬細(xì)胞吞噬ox-LDL后形成泡沫細(xì)胞，后者不斷增多、融合，構(gòu)成動脈粥樣硬化斑塊的脂質(zhì)核心。目前已公認(rèn)，ox-LDL是誘導(dǎo)血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)損傷和功能障礙的一個主要因素，在動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用［10］。ox-LDL受體包括清道夫受體-A、CD68、LOX-1等，而LOX-1則是表達(dá)在大動脈內(nèi)皮細(xì)胞上負(fù)責(zé)攝取和代謝ox-LDL的主要受體［11］，具有對 ox-LDL特異性結(jié)合、內(nèi)吞以及降解作用［12］。ox-LDL無論是通過結(jié)合并激活其受體LOX-1，還是通過直接細(xì)胞毒作用，皆可抑制NO的生成，從而促進(jìn)ET的合成和釋放，NO和ET的作用平衡是調(diào)節(jié)體循環(huán)和局部血液灌注的主要決定因素［13］。ox-LDL作用于LOX-1受體，可使其表達(dá)上調(diào)，可溶性LOX-1（sLOX-1）是LOX-1的可溶形式，其外周血水平與LOX-1的表達(dá)水平呈正相關(guān)［8］。SOD是體內(nèi)清除氧自由基的重要酶，其水平的高低反映機(jī)體清除氧自由基的能力。MDA是過氧化脂質(zhì)十分重要的降解產(chǎn)物，對細(xì)胞及細(xì)胞成分具有一定的損傷作用，能干擾脂肪酸的氧化降解［14］。MDA的測定常與SOD的測定相互配合，MDA水平越高，間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊越嚴(yán)重［15］。NO能直接反映血管受損程度［16］，血漿ET質(zhì)量濃度一定程度上也反映了血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的程度［17］。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高脂血癥能使大鼠血漿中sLOX-1升高，提示由LOX-1介導(dǎo)的ox-LDL對血管內(nèi)皮的損傷加重；而參七合劑能降低血液中TC、LDL-C及LOX-1的水平，從而抑制ox-LDL損傷血管內(nèi)皮，起到保護(hù)血管內(nèi)皮功能的作用。高脂血癥能使大鼠血清中SOD、NO降低，使MDA、ET升高；而參七合劑通過升高 SOD、NO水平，降低MDA、ET水平，抑制大鼠的脂質(zhì)過氧化過程，改善大鼠血管NO的釋放及血管的舒張能力和自我修復(fù)能力。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，高脂血癥能使大鼠血清和糞TBA升高，參七合劑能明顯增加高脂血癥大鼠糞TBA、而對血清TBA沒有影響。參七合劑可能通過增加糞便中膽汁酸的排泄量進(jìn)而促進(jìn)肝臟合成膽汁酸的途徑，降低血液中膽固醇的水平。

參七合劑由西洋參、三七、熟何首烏組成，具有益氣養(yǎng)血、活血化瘀的功效。三七皂苷能顯著降低肝組織MDA水平，且能顯著升高還原型谷胱甘肽 （GSH）含有量，亦能減輕大鼠肝組織脂肪變性樣作用［18］。西洋參莖葉皂苷能糾正高脂血癥大鼠脂蛋白-膽固醇代謝的紊亂，抑制高脂飲食和失血引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，從而保護(hù)細(xì)胞膜和亞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能［19］。何首烏所含成分均二苯烯能使血清游離脂肪酸及肝臟過氧化脂質(zhì)含有量下降［20］。

綜上所述，參七合劑通過降低sLOX-1的表達(dá)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)氧化與過氧化水平的平衡、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而對高血脂癥模型大鼠的血管起到保護(hù)作用。另外，參七合劑能通過增加糞便中膽汁酸的排泄量間接降低血液中膽固醇的水平。

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R285.5

B

1001-1528（2016）06-1376-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2016.06.036

2015-08-12

湖南省教育廳科技計(jì)劃項(xiàng)目 （12C0969）；常德市科技局科技計(jì)劃項(xiàng)目 （2010BS02）

蔣 銳 （1969—），女，碩士，副教授，從事高脂血癥及婦科雜病防治研究。Te1：13786699264，E-mai1：jiangrui69@ 163.com

姜海斌 （1971—），男，博士，副教授，從事高脂血癥及腎病防治研究。Te1：13786650036，E-mai1：jhsp810@163.com