DEAE-瓊脂凝膠微球的制備及在R-PE和C-PC提取分離中的應用

張榮生，石國宗，張慧蘭，孫 麗（廈門藍灣科技有限公司，福建廈門361027）

DEAE-瓊脂凝膠微球的制備及在R-PE和C-PC提取分離中的應用

張榮生，石國宗，張慧蘭，孫 麗*
（廈門藍灣科技有限公司，福建廈門361027）

為了降低天然大分子功能蛋白的分離純化成本，以瓊脂為原料自制弱陰離子交換層析介質DEAE-瓊脂凝膠微球。將DEAE-瓊脂凝膠微球應用于壇紫菜R-藻紅蛋白（R-PE）和螺旋藻C-藻藍蛋白（C-PC）的提取分離，最佳洗脫條件為：層析柱規格h=35.0 cm，φ=1.0 cm，V=27.5 mL；流速v=0.33 mL/min；洗脫緩沖液為0.01 mol/L磷酸鹽溶液（含有0.05～0.5 mol/L NaCl溶液）；0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（含0.1 mol/L NaCl）洗脫出純度為5.0的壇紫菜R-PE；0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液（含0.2 mol/L NaCl）洗脫出純度為4.4的螺旋藻C-PC。自制層析介質成本低廉、耗能少、可大量制備、分離效果好，可用于壇紫菜R-PE、螺旋藻C-PC的產業化制備。

DEAE-瓊脂凝膠微球，壇紫菜R-PE，螺旋藻C-PC，產業化

藻紅蛋白（Phycoerythrin，PE）、藻藍蛋白（Phycocyanin，PC）主要存在于藍藻、紅藻、隱藻和少數一些甲藻中，與別藻藍蛋白（Allophycocyanin，APC）一起構成棒狀的藻膽體，將捕獲的光能傳遞給葉綠素a［1］；作為儲存蛋白，使藻類在氮源缺乏的季節維持生存［2］。PE和PC用途極為廣泛，可應用于醫學診斷、腫瘤光動力治療、食品和化妝品的添加劑［3］等方面。用作分子探針和光敏劑的PE、PC，純度分別要求A565/ A280＞4.0、A620/A280＞4.0，即試劑級純度，其制備方法為：將原料預處理得到的粗蛋白，通過羥基磷灰石（HA）、GE公司的DEAE-Sepharose、Sephadex系列凝膠、預裝陰離子色譜柱或Bio-Rad公司的Bio-gel系列凝膠配合使用得到試劑級純度藻膽蛋白。王璐［4］使用Sepharose CL-4B、Sephadex G-150和DEAE-Sepharose FF從多管藻中提取得到A567/A280＞5.0的R-PE和A617/ A280約為3.0的R-PC；GA Basaca-Loya等［5］將紅藻Rhodosorus marinus粗提液用分子篩凝膠Sephadex G-25和陰離子色譜預裝柱HiPrep 16/10 Q XL（0.75 cm×10 cm）分離得到A545/A280=4.8的B-PE；……