HPLC法測定紅景天苷研究

范桂強，王志杰，李桐，齊善厚，龐紅霞，孫金旭，劉佳（.河北省衡水市食品藥品檢驗檢測中心，河北 衡水05000；.衡水學院，河北 衡水05000；.衡水科技工作者服務中心，河北 衡水05000）

HPLC法測定紅景天苷研究

范桂強1，王志杰2，李桐3，齊善厚2，龐紅霞1，孫金旭2，劉佳2
（1.河北省衡水市食品藥品檢驗檢測中心，河北 衡水053000；2.衡水學院，河北 衡水053000；3.衡水科技工作者服務中心，河北 衡水053000）

利用HPLC法測定紅景天中紅景天苷含量，經試驗驗證，此方法測定紅景天苷含量重復性試驗最大標準偏差為0.27%，峰面積與紅景天苷標準品線性關系良好，標準曲線方程為Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），線性范圍1 mg/mL～100 mg/mL，加樣回收率98.39%～101.15%間，經測定紅景天中紅景天苷含量為3.14g/100g。

HPLC；紅景天；紅景天苷

紅景天又名高山紅景天（Rhodiola sachalinensis A Bor.），為藥食兩用植物［1］。近年來，對紅景天的研究較多，經研究發現紅景天具有抗輻射、抗疲勞、抗衰老等藥理作用［2］。紅景天較強的藥理功效與紅景天中活性成分密切相關，經研究證實紅景天苷為紅景天中具有明顯功效的成分之一已經被較為深入的分析研究［3-4］，而對于紅景天中紅景天含量測定方法及準確性研究較少，本研究建立了HPLC法測定紅景天苷含量的測定方法，以期為紅景天品質及紅景天苷含量的測定提供參考。

1　材料與方法

1.1材料

紅景天苷標準品（來源：中國食品藥品檢定研究院，批號：110818-201206）；高山紅景天藥材：購于吉林省安圖縣二道白河鎮。

1.2主要儀器

Agilent1100高效液相色譜儀：美國；BSM電子分析天平：上海田宮稱重制造有限公司；UV-2501分光光度計：日本島津。

1.3方法

1.3.1色譜測定條件

流動相：甲醇-水，比例8∶2，流動相流速0.2 mL/ min，柱溫度25℃；進樣量10 μL，利用外標法進行定量分析，檢測波長276 nm，色譜柱為不銹鋼柱ZORBAX SB-C18（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）

1.3.2紅景天苷標準品處理方法

準確稱取紅景天苷標準品0.050 12 g，置于25 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，以此為母液，分別配置不同濃度紅景天苷標準品溶液。

1.3.3紅景天樣品處理方法

精確稱量1 g紅景天于500 mL具塞三角瓶中，添加20 mL甲醇溶液，閃式提取40 s，待靜置后取上清液，0.45 μm濾膜過濾待用。

1.3.4回收率計算

回收率計算公式如下：

式中：A為回收率，%；W為原紅景天中紅景天苷含量，mg；Z為加標量，mg；E為加標后測定混合液中紅景天苷含量，mg。

1.3.5紅景天苷含量計算紅景天苷含量計算公式：N=G×V/1 000×100/M

式中：N為紅景天中含有的紅景天苷含量，g/100 g；G為提取紅景天苷濃度，mg/mL；V為提取液體積mL；M為紅景天用量，g。

2　結果與討論

2.1測定波長的確定

為確定紅景天中紅景天苷高效液相色譜的測定波長值，以購買的紅景天苷標準品為測定的樣品，用紫外分光光度計測定波長值，波長掃描范圍200 nm～500 nm，經掃描后結果如圖1所示。

圖1　紅景天苷標準品全波長掃描結果Fig.1　The full wavelengh scanner result for salidroside

由圖1分析可知，經紫外分光光度計全波長掃描后，紅景天苷標準品于276 nm處有一最大吸收峰，表明紅景天苷在此波長下吸收值最大，因此確定276 nm為紅景天苷的紫外吸收測定波長。

2.2標準品液相色譜圖

紅景天苷標準品經甲醇處理后，HPLC法測定［5］，測定條件如下：流動相：甲醇-水，比例8∶2，流動相流速0.2 mL/min，柱溫度25℃；進樣量10 uL，利用外標法進行定量分析，檢測波長276 nm，色譜柱為不銹鋼柱ZORBAX SB-C18（150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm）。經測定后，紅景天苷標準品HPLC液相色譜圖如圖2所示。

由圖2分析可知，經HPLC法測定，紅景天苷標準品在色譜圖中5.13 min時，出現最大、唯一吸收峰，表明此出峰時間點為紅景天苷標準品在此HPLC條件下的檢測點，紅景天中紅景天苷含量HPLC法測定可以以此點作為檢測點。

圖2 紅景天苷標準品液相色譜圖Fig.2　The HPLC spectra for salidroside standard

2.3標準曲線制備及線性范圍考察

以1.3.2項下母液，用甲醇為溶劑分別配制不同濃度紅景天苷標準品溶液（濃度分別為0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4 μg/mL），在上述條件下分別進行HPLC測定，以紅景天苷標準品濃度為橫坐標，紅景天苷吸收峰面積為縱坐標，進行回歸測定，測定結果如圖3所示。

圖3　紅景天苷標準品濃度與峰面積線性關系圖Fig.3　The linear relationship between content of salidroside and peak area

由圖3分析可知，紅景天苷標準品濃度和峰面積呈現一定的線性關系，線性回歸方程為Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），該回歸方程在1 mg/mL～100 mg/ mL的范圍內呈現良好的線性范圍。

2.4重復性試驗

精確稱取經處理后的紅景天苷標準品同一份，將此同一份均勻5份平分，根據測定條件測定紅景天苷標準品含量，計算5份測定后的平均值及RSD，結果如表1所示。

由表1分析可知，經處理后的源于同一樣品的5份紅景天苷樣品分別進樣后，測定樣品平均含量1.569 6 mg/mL，經計算后RSD值為0.27%，達到了該方法重復性測定的要求，可以作為分析紅景天苷含量的測試方法使用。

表1重復性試驗Table 1　Result of repetitive test

2.5回收率試驗

加樣回收率是分析試驗測定方法是否可行的另一項檢測指標，經處理后的紅景天樣品，平均成3份，按HPLC測定要求，處理樣品后，分別測定其紅景天苷含量，紅景天苷標準品配制成不同濃度后，分別添加至紅景天樣品中，處理后再次測定紅景天苷含量，分別計算回收率和RSD值，用于評估該HPLC法測定紅景天苷含量的可行性，結果如表2所示。

表2回收率試驗Table 2　Recovery rates

由表2分析可知，紅景天中紅景天苷含量測定經加標后，紅景天苷回收率在98.39%～101.15%間，紅景天苷的平均回收率為99.53%，回收RSD值為1.45%，在允許范圍之內，表明回收良好，此HPLC法測定紅景天中紅景天苷含量誤差較小，誤差在可控范圍之內。

2.6紅景天中紅景天苷含量測定

根據設定HPLC法測定條件，紅景天經處理后測定紅景天苷含量，結果如圖4所示。

由圖4分析可知，在經試驗驗證的HPLC法測定條件下，對經處理后的紅景天進樣測定，紅景天中的成分峰與其他雜質峰之間分離度較好，和紅景天苷相對應時間點有相應單一峰出現，表明該方法能夠較好的測定紅景天中紅景天苷含量，干擾較少，該HPLC條件較適宜于紅景天中紅景天苷含量的測定分析，經對比、計算紅景天中紅景天苷含量為3.14 g/100 g。

圖4 紅景天測定圖譜Fig.4 The HPLC spectra for rhodiola

3　結論

紅景天為藥食兩用的植物，經研究發現其具有有抗輻射、抗疲勞、抗衰老等藥理作用。紅景天較強的藥理功效與紅景天中活性成分密切相關，經研究證實紅景天苷為紅景天中具有明顯功效的成分之一，利用HPLC法測定紅景天中紅景天苷含量，測定條件為流動相：甲醇-水，比例8∶2，流動相流速0.2 mL/min，柱溫度25℃；進樣量10 μL，利用外標法進行定量分析，檢測波長276 nm，色譜柱為不銹鋼柱ZORBAX SB-C18 （150 mm×3.0 mm i.d.，5 μm），經試驗驗證，此方法測定紅景天苷含量重復性試驗最大標準偏差為0.27%，峰面積與紅景天苷標準品線性關系良好，標準曲線方程為Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），加樣回收率98.39%～101.15%間，經測定紅景天中紅景天苷含量為3.14 g/100 g。

［1］鄒曉麗．長白山紅景天配伍FDP抗疲勞作用實驗研究［D］．哈爾濱：東北師范大學，2008：78-85

［2］陶貴榮，趙銀萍，齊建，等．不同地區紅景天植物紅景天苷含量比較研究［J］．西北植物學報，2010，30（9）：1902-1905

［3］李穎，厙守權，劉剛，等．發酵紅景天中紅景天苷的含量測定［J］．延邊大學醫學學報，2013，36（4）：271-273

［4］楊連梅，胡榮，齊文，等．藏藥狹葉紅景天化學成分研究［J］.中國藥劑學，2011，20（5）：154-158

［5］張榕文，任杰麟，蔣日瓊，等.高效液相色譜法測定中藥洗發水中紅景天苷的含量［J］.應用化工，2014，43（12）：2295-2297

The Determination of Salidroside by HPLC

FAN Gui-qiang1，WANG Zhi-jie2，LI Tong3，QI Shan-hou2，PANG Hong-xia1，SUN Jin-xu2，LIU Jia2
（1.Hengshui Centre for Food and Drug Control，Hengshui 053000，Hebei，China；2.Hengshui University，Hengshui 053000，Hebei，China；3.The Service Center for Science and Technology Workers of Hengshui，Hengshui 053000，Hebei，China）

The salideroside content in rhodiola by HPLC was determined.The result showed that the method for the determination of salideroside content maximum standard deviation was 0.27%，the linear regression equation Y=750 000X-2 634.5（R2=0.999 9），the regression equation in the range 1 mg/mL～100 mg/mL.The spike recoveriesforergosterolwerebetween98.39%-101.15%.Thecontentofsalidrosideinrhodiolawas3.14g/100 g.

HPLC；rhodiola；salideroside

2015-09-30

衡水市科技局指令性課題（14032）

范桂強（1978—），男（漢），副主任藥師，本科，主要從事化學藥品檢測檢驗研究。