酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒表面抗原假陽性的影響因素分析

魏學鋒（吉林省延吉市醫院檢驗科，吉林 延吉 133000）

酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒表面抗原假陽性的影響因素分析

魏學鋒
（吉林省延吉市醫院檢驗科，吉林 延吉 133000）

目的 分析酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒表面抗原出現假陽性的影響因素。方法 把血清標本分為兩組，抗凝組和不抗凝組，采用膠體金標法進行檢測比較，全部的標本進行同步檢測，分析兩組乙型肝炎病毒表面抗原的陽性率。結果 采用酶聯免疫吸附法檢測不同血清狀態乙型肝炎病毒表面抗原的陽性率，抗凝組的陽性率明顯高于不抗凝組（P＜0.05），抗凝組的假陽性率比較高；酶聯免疫吸附法比金標法的靈敏度高，特異性相比則略低。結論 采用酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒表面抗原產生不同結果的原因是多方面的，標本溶血是最主要的原因，因此對血清標本實行必要的處理可提高檢測結果的準確度。

酶聯免疫吸附法；金標法；乙型肝炎表面抗原；假陽性

我國是乙型肝炎病毒的高發區，乙型肝炎是一種具有傳染性和病毒性最具危害性的肝炎，乙型肝炎表面抗原一般是在感染乙型肝炎病毒1～2周之后出現，是感染乙型肝炎病毒的血清標志物，也會乙型肝炎病毒感染的主要指標之一。目前酶聯免疫吸附法（ELISA）已成為醫學上檢測感染性疾病的抗原、抗體的最普遍方法，具有靈敏度高、簡便快速、特異性較強、可重復等優點，因此，在各類型醫院的檢驗科中被廣泛應用［1］。但是酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎表面抗原可能會出現假陽性、假陰性等誤差現象。現就可能影響的因素作如下報道。

1　資料與方法

1.1一般資料：選取我院2012年1月至2014年1月接受的無償獻血者500例檢測的血標本作為研究對象，按照血清標本的不同狀態分為抗凝組和不抗凝組，每組250例，男性300例，女性200例，年齡在20～70歲，均無相關的肝病病史。。

1.2方法：嚴格按照ELISA試劑和金標法試劑的說明書，分別對500例血清標本進行酶聯免疫吸附法檢測和金標法檢測。

1.3評判標準：以酶聯免疫吸附法檢測時，當樣品的A 值大于或者等于2.1×陰性對照的平均值時，結果定性為陽性，相反則為陰性；以金標方法檢測時，如果出現紅色的反應線和質控線則為陽性，若只出現紅色的質控線則為陰性。ELISA法和金標法檢測的結果均為陽性的，出具陽性報告書；若二者的檢測結果均為陰性，出具陰性報告書。

1.4統計學方法：所有研究數據均采用SPSS12.0統計學處理軟件進行統計，并進行對比分析，卡方檢驗，P＜0.05表明存在顯著差異性，具有統計學的意義。

2　結 果

2.1兩組陽性率對比分析：抗凝組和不抗凝組經ELISA法檢測后的陽性率比較，抗凝組的陽性率比不抗凝組明顯要高，存在顯著差異性，具有統計學的意義，P＜0.05，見表1。

表1　抗凝組和不抗凝組經ELISA法檢測后的陽性率比較

2.2ELISA法和金標法檢測的敏感性比較：經ELISA法和金標法檢測的HBsAg陽性率對比分析，結果顯示采用ELISA法檢測的HBsAg的陽性率為90%，而采用膠體金標法檢測HBsAg的陽性率為75%，由此可見，ELISA法檢測的敏感性明顯高于金標法檢測HBsAg的陽性率敏感性；但ELISA法檢測的特異度為96%，金標法檢測的特異度為98%，ELISA法檢測相對于采用金標法檢測的特異性要略低。

3　討 論

乙型肝炎病原的主要標志物和判斷依據是乙型肝炎病毒表面抗原，準確的判斷和及時對乙型肝炎進行預防和治療有著極其重要的意義。檢測乙型肝炎表面抗原的方法有ELISA法、膠體金標法、化學發光微粒子免疫法（CMIA）等。膠體金法常用于急診中，速度快是其優點，但與其他的方法相比，漏檢或誤讀關于弱陽性結果的可能性大。CMIA法是一種免疫分析技術，實行封閉式操作、全自動儀器和配套試劑進行檢測，具有較高的靈敏度和較好的特異性，將人為因素降至最低限度。但由于該試劑主要依靠進口，價格比較昂貴，因此通常應用于弱陽性反應性的標本的確認。ELISA法由于具備快速簡便、靈敏度高、特異性好等優點被廣泛應用于乙型肝炎表面抗原的檢測。但是同一個人在不同醫院乙型肝炎表面抗原的檢測結果可能不一致，甚至在同一檢驗室檢查的同一標本得出的結果也可能出現不同［2］。ELISA操作的每一個步驟以及血液標本的處理，如操作不當，當中的任何一個環節都有可能影響到最終的檢測結果，導致出現假陰性或假陽性的錯誤結果［3］。在實際的操作過程當中要嚴格按照說明書的操作步驟實行操作，同時做好室間評價和室內質控，謹慎認真地檢測每一份標本，對檢查的結果存在疑義要進行復查，確保檢測的準確性，以免出現假陽性和假陰性的判斷結果。

本研究選取不同狀態的血清標本作為研究對象，以酶聯免疫吸附法和膠體金標法兩種不同的檢測方法對比檢測乙型肝炎病毒表面抗原。結果表明，在不同狀態的血清分組檢測中，抗凝組的陽性率比不抗凝組的陽性率明顯要高很多，由此可見抗凝組的假陽性率比較高。而兩種不同檢測方法的比較顯示酶聯免疫吸附法檢測的靈敏度高于膠體金標法檢測的靈敏度，但在特異性方面略低于膠體金標法檢測。即標本中殘留的纖維蛋白是導致乙型肝炎病毒表面抗原出現假陽性的主要原因，由于標本溶血或分離不夠徹底，造成在操作中洗滌比較困難，最終導致檢測結果出現誤差。

為了盡可能將ELISA法檢測的誤差降到最低限度，減少檢測結果出現假陽性，獲取更為準確的檢測結果，可以從以下幾個方面著手：①使用充分凝固的血清標本（抗凝血標本），使標本的離心徹底分離；②將標本隔夜后檢測或者進行加熱處理，確保標本血塊濃縮，使其中的非特異性活性物質全部或部分失活，降低由于異物所產生的假陽性結果；③加大離心轉速分離血清，將離心的時間延長，避免纖維蛋白和紅細胞對離心的影響，徹底分離離心標本；④按照說明步驟嚴格控制操作時間；⑤加樣操作的時候一定要嚴格注意操作手法的精確，不能吸到纖維蛋白或紅細胞，以免這兩種物質對檢測結果造成誤判影響［4］。

綜上所述，乙型肝炎病毒表面抗原是診斷乙型肝炎病的重要依據，為了提高對患者診斷的準確性，在采用酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒表面抗原的時候，必須要嚴格按照操作步驟，注意操作的手法，避免由于人為的因素出現誤判，防止出現假陰性、假陽性的結果，充分發揮酶聯免疫吸附法檢測乙型肝炎病毒表面抗原的臨床應用價值，讓患者受益。

［1］ 王一丁.酶聯免疫吸附法檢測HBsAg結果的影響因素探討［J］.海南醫學，2012，23（24）：103-105.

［2］ 劉文琴，張雄，董明國，等.確認試驗在乙型肝炎表面抗原弱陽性標本中的臨床應用［J］.中華醫院感染學雜志，2011，21（10）：2152-2153.

［3］ 陳冰.應用酶聯免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的影響因素探討［J］.北方藥學，2013，10（4）：61.

［4］ 胡越，蔣瑞馨，邵家幼.兩種酶聯免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的結果比較［J］.實驗與檢驗醫學，2012，30（3）：269-270.

R512.6+2

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1671-8194（2016）23-0113-02