注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關物質研究

北京四環科寶制藥有限公司（100070）陳婧 方賢羅 陳紅燕 高萬峰

鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯是甲砜霉素的衍生物，是氯霉素的同類物，抗菌譜和抗菌作用與氯霉素相似。其水溶性好，當溶液的pH值增高或受到體內酶的作用后，迅速釋放出甲砜霉素而發揮作用[1]。鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯拓寬了甲砜霉素的臨床應用，克服了其水溶性差的劣勢[2]。我們在大量研究的基礎上建立了一種準確快速檢測注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯有關物質的高效液相色譜法并對雜質進行了歸屬研究，同時對自制樣品與市售樣品的雜質水平進行了對比。

1 儀器與試藥

島津LC Solution高效液相色譜儀（日本島津公司）；Sartorius PB-10型酸度計（德國賽多利斯公司）；CP225D型電子天平（德國賽多利斯公司）；甲醇為色譜純，水為純化水，其余試劑均為分析純。

2 HPLC測定方法的建立與驗證

2.1 色譜條件的建立 經試驗，流動相pH值對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯主峰及其雜質峰峰形、峰面積和分離度均有影響。對流動相pH值為3.0和4.5的對比發現，前者明顯比后者峰型對稱性好，積分結果準確，各雜質峰與主成分峰分離度好。最終確認以甲醇-0.05mol/L的磷酸二氫鉀溶液-三乙胺（20∶80∶0.05）用磷酸調節pH至3.0為流動相，能保證各雜質有效檢出。

2.2 溶液pH值對樣品穩定性的影響 分別選用pH4.5流動相、0.001 mol/L鹽酸、0.01mol/L鹽酸，以有關物質為指標，考察樣品配制后放置穩定性情況。結果表明：不同pH值的溶劑對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的穩定性有明顯影響。在pH值對雜質的影響考察中發現，在考察的3h內，在同一pH值條件下，有關物質隨放置時間延長而增長，因此為保證結果準確，有關物質測定時樣品應現配現用；在考察的3h內，隨著溶液pH值的降低，樣品在放置相同的時間內，雜質增長幅度明顯降低，因此選用溶解樣品的溶劑為0.01mol/L鹽酸，能保證測定結果更加準確。具體數據見附表1。

2.3 專屬性試驗 取本品適量，進行酸、堿、氧化、高溫、光照等條件的強制降解試驗，考察降解產物等雜質與主成分的分離情況。通過試驗可知，在此色譜條件下，甲砜霉素甘氨酸酯峰與雜質峰能夠完全分離，說明此色譜條件可以完全滿足本品有關物質的測定。

2.4 雜質研究 結合鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯原料的合成工藝，選擇甲砜霉素作為對照定位制劑中的雜質。取甲砜霉素適量，配制成濃度約為10μg/mL的溶液，按有關物質測定方法進樣分析，根據參考文獻[1]中的相應研究并結合實際檢測結果，可以確定與鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的相對保留時間約為2.0左右的雜質為甲砜霉素。

2.5 與市售制劑有關物質對比研究 取市售的注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯作為對照藥，與自制樣品，按上述有關物質的檢測方法進行檢測，記錄色譜圖（見附圖1～2），由色譜圖可以看出，市售樣品雜質個數比自制樣品多，且市售樣品雜質峰與主成分峰分離度不理想。按面積歸一化法進行計算，市售樣品最大單一雜質和總雜質均比自制樣品大。結果見附表2。

附圖1 自制樣品色譜圖

附圖2 市售樣品色譜圖

附表1 溶液穩定性考察結果

附表2 自制樣品與市售樣品雜質對比

3 討論

本文在對鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的有關物質色譜條件的流動相的組成及其pH值的考察和對溶解樣品溶劑的pH值對樣品穩定性的研究的基礎上進行了有關物質的方法學的研究。證明本方法測定有關物質，能保證各雜質有效檢出，峰型對稱性好，積分結果準確，且各雜質峰與主成分峰分離度較好；可用于注射用鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的質量控制。結合鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯原料的合成工藝，選擇甲砜霉素作為對照定位制劑中的雜質，研究表明與鹽酸甲砜霉素甘氨酸酯的相對保留時間約為2.0左右的雜質為甲砜霉素。按上述選定的有關物質檢測方法檢驗自制樣品與市售樣品，由對比數據可以看出，自制樣品的有關物質明顯小于市售樣品。