實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與快速培養(yǎng)法在肺炎支原體檢驗中的應(yīng)用效果觀察

廣東省東莞市寮步醫(yī)院（523400）楊澤敏 唐杏 盧慧兵 鄺樹華

肺炎支原體主要通過呼吸道進行傳染，是兒童發(fā)生呼吸道感染的常見病原體。肺炎支原體感染患兒早期如不能得到有效診治，可能會導(dǎo)致肺外感染[1]。因此，早期診斷在肺炎支原體患兒治療中尤為重要。臨床中對于肺炎支原體的檢測方法較多，但是對于各種方法的診斷效果尚不明確[2]。本研究中分別采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與快速培養(yǎng)法對200例肺炎支原體感染患兒進行檢測，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年3月～2015年3月我院接診的200例疑似肺炎支原體感染的患者進行研究。其中男120例，女80例。年齡為8個月～15歲。平均為6.5±2.3歲。病程為4～30天，平均病程為28.13±4.21天。所有患者均出現(xiàn)劇烈咳嗽等癥狀，胸部X線檢查顯示兩肺出現(xiàn)片狀陰影，患者經(jīng)大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療有效，其余抗生素治療表現(xiàn)為無效。所有患者均符合小兒支原體肺炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。

1.2 方法 全部患兒均在就診的當(dāng)日，由護士無菌條件下采集咽拭子，并進行后期的檢測操作。快速培養(yǎng)法選擇武漢菁華時間科技有限公司生產(chǎn)的試劑盒進行培養(yǎng)，實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)采用ABI7300實時熒光擴增儀，試劑采用中山大學(xué)達安基因股份有限公司生產(chǎn)的肺炎支原體核酸定量檢測試劑進行測定。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄分析兩種檢測方法的診斷結(jié)果，并統(tǒng)計計算兩種檢測方法的靈敏度、特異度以及診斷的符合率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 選用SPSS13.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗進行分析，P<0.05表示兩組數(shù)據(jù)有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 快速培養(yǎng)法的檢測結(jié)果分析 快速培養(yǎng)法的檢測結(jié)果顯示：敏感度為83.48%，特異度為75.29%，診斷符合率為80.00%。數(shù)據(jù)詳見附表1。

附表1 快速培養(yǎng)法在肺炎支原體檢測中的診斷結(jié)果分析

2.2 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的檢測結(jié)果分析 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的檢測結(jié)果顯示：敏感度為84.31%，特異度為81.63%，診斷符合率為83.00%。數(shù)據(jù)詳見附表2。

附表2 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的檢測結(jié)果分析

2.3 兩種方法聯(lián)合診斷檢測分析 兩種方法聯(lián)合的檢測結(jié)果顯示：敏感度為90.90%，特異度為91.14%，診斷符合率為91.00%。數(shù)據(jù)詳見附表3。

附表3 兩種方法聯(lián)合檢測的結(jié)果分析

2.4 兩種檢查手段結(jié)果比較 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聯(lián)合快速培養(yǎng)法診斷的敏感度、特異度及診斷符合率均明顯高于兩種檢測手段的單獨檢測，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。但兩種檢測手段的結(jié)果不完全一致（一致率為76.00%）。數(shù)據(jù)詳見附表4。

附表4 兩種檢測方法的比較分析

3 討論

支原體感染導(dǎo)致兒童肺炎在臨床中較為常見，臨床表現(xiàn)多樣，且患者病程較長、病情的輕重程度不一，較易反復(fù)。而且，支原體感染的患兒如不及時診治，甚至?xí)?dǎo)致多種肺外并發(fā)癥，嚴重影響患兒的身心健康[4]。且支原體感染患兒對抗生素治療不敏感，因此常規(guī)治療會影響患者的病情。臨床研究中對于支原體感染檢測方式較多，對于血清的特異性抗體及冷凝素的檢測是較為常用的檢測方式。但由于患者病程的制約，對于患兒的早期診斷較難實現(xiàn)。因此，臨床中對于肺炎支原體患兒的早期診斷和治療成為研究的重點。目前，隨著臨床檢驗手段的發(fā)展，實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聯(lián)合快速培養(yǎng)法已逐步成為肺炎支原體感染檢測的主要手段。快速培養(yǎng)法是近年來發(fā)展起來的能夠?qū)崿F(xiàn)對支原體直接檢測的方法，通過對咽拭子在高營養(yǎng)成分和生長因子中的培養(yǎng)，可以在12～24h內(nèi)獲取檢測結(jié)果。操作簡便，結(jié)果顯示準(zhǔn)確，較為快速，在患兒發(fā)病的初期即可對支原體進行檢測，敏感性較好。實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種通過肺炎支原體體外特異性DNA擴增，產(chǎn)生大量DNA片段的最新研究技術(shù)，可以在短時間內(nèi)使微量核酸片段實現(xiàn)大量擴增，產(chǎn)生百萬拷貝，進而大幅度提高了診斷的準(zhǔn)確性和敏感性，具有較高的敏感度和特異度。臨床研究顯示，兩種檢測手段在檢測中均存在一定的誤差，但是，由于檢測機制不同，因此，它們在對肺炎支原體檢測中存在著互補的作用。

本研究顯示實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聯(lián)合快速培養(yǎng)法診斷的敏感度、特異度及診斷符合率均明顯高于兩種檢測手段的單獨檢測。但兩種檢測手段的結(jié)果不完全一致（一致率為76.00%）。表明兩種檢測手段聯(lián)合的診斷較單獨使用的效果更好，可明顯提高診斷效果。

綜上所述，實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)聯(lián)合快速培養(yǎng)法聯(lián)合診斷肺炎支原體，效果良好，值得推廣。