實時熒光定量聚合酶鏈式反應與快速培養法在肺炎支原體檢驗中的應用效果觀察

廣東省東莞市寮步醫院（523400）楊澤敏 唐杏 盧慧兵 鄺樹華

肺炎支原體主要通過呼吸道進行傳染，是兒童發生呼吸道感染的常見病原體。肺炎支原體感染患兒早期如不能得到有效診治，可能會導致肺外感染[1]。因此，早期診斷在肺炎支原體患兒治療中尤為重要。臨床中對于肺炎支原體的檢測方法較多，但是對于各種方法的診斷效果尚不明確[2]。本研究中分別采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應與快速培養法對200例肺炎支原體感染患兒進行檢測，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年3月～2015年3月我院接診的200例疑似肺炎支原體感染的患者進行研究。其中男120例，女80例。年齡為8個月～15歲。平均為6.5±2.3歲。病程為4～30天，平均病程為28.13±4.21天。所有患者均出現劇烈咳嗽等癥狀，胸部X線檢查顯示兩肺出現片狀陰影，患者經大環內酯類藥物治療有效，其余抗生素治療表現為無效。所有患者均符合小兒支原體肺炎的相關診斷標準[3]。

1.2 方法 全部患兒均在就診的當日，由護士無菌條件下采集咽拭子，并進行后期的檢測操作。快速培養法選擇武漢菁華時間科技有限公司生產的試劑盒進行培養，實時熒光定量聚合酶鏈式反應采用ABI7300實時熒光擴增儀，試劑采用中山大學達安基因股份有限公司生產的肺炎支原體核酸定量檢測試劑進行測定。

1.3 觀察指標 記錄分析兩種檢測方法的診斷結果，并統計計算兩種檢測方法的靈敏度、特異度以及診斷的符合率。

1.4 統計學分析 選用SPSS13.0進行統計學分析，計數資料采用卡方檢驗進行分析，P<0.05表示兩組數據有顯著性差異。

2 結果

2.1 快速培養法的檢測結果分析 快速培養法的檢測結果顯示：敏感度為83.48%，特異度為75.29%，診斷符合率為80.00%。數據詳見附表1。

附表1 快速培養法在肺炎支原體檢測中的診斷結果分析

2.2 實時熒光定量聚合酶鏈式反應的檢測結果分析 實時熒光定量聚合酶鏈式反應的檢測結果顯示：敏感度為84.31%，特異度為81.63%，診斷符合率為83.00%。數據詳見附表2。

附表2 實時熒光定量聚合酶鏈式反應的檢測結果分析

2.3 兩種方法聯合診斷檢測分析 兩種方法聯合的檢測結果顯示：敏感度為90.90%，特異度為91.14%，診斷符合率為91.00%。數據詳見附表3。

附表3 兩種方法聯合檢測的結果分析

2.4 兩種檢查手段結果比較 實時熒光定量聚合酶鏈式反應聯合快速培養法診斷的敏感度、特異度及診斷符合率均明顯高于兩種檢測手段的單獨檢測，差異有統計學意義（P<0.05）。但兩種檢測手段的結果不完全一致（一致率為76.00%）。數據詳見附表4。

附表4 兩種檢測方法的比較分析

3 討論

支原體感染導致兒童肺炎在臨床中較為常見，臨床表現多樣，且患者病程較長、病情的輕重程度不一，較易反復。而且，支原體感染的患兒如不及時診治，甚至會導致多種肺外并發癥，嚴重影響患兒的身心健康[4]。且支原體感染患兒對抗生素治療不敏感，因此常規治療會影響患者的病情。臨床研究中對于支原體感染檢測方式較多，對于血清的特異性抗體及冷凝素的檢測是較為常用的檢測方式。但由于患者病程的制約，對于患兒的早期診斷較難實現。因此，臨床中對于肺炎支原體患兒的早期診斷和治療成為研究的重點。目前，隨著臨床檢驗手段的發展，實時熒光定量聚合酶鏈式反應聯合快速培養法已逐步成為肺炎支原體感染檢測的主要手段。快速培養法是近年來發展起來的能夠實現對支原體直接檢測的方法，通過對咽拭子在高營養成分和生長因子中的培養，可以在12～24h內獲取檢測結果。操作簡便，結果顯示準確，較為快速，在患兒發病的初期即可對支原體進行檢測，敏感性較好。實時熒光定量聚合酶鏈式反應是一種通過肺炎支原體體外特異性DNA擴增，產生大量DNA片段的最新研究技術，可以在短時間內使微量核酸片段實現大量擴增，產生百萬拷貝，進而大幅度提高了診斷的準確性和敏感性，具有較高的敏感度和特異度。臨床研究顯示，兩種檢測手段在檢測中均存在一定的誤差，但是，由于檢測機制不同，因此，它們在對肺炎支原體檢測中存在著互補的作用。

本研究顯示實時熒光定量聚合酶鏈式反應聯合快速培養法診斷的敏感度、特異度及診斷符合率均明顯高于兩種檢測手段的單獨檢測。但兩種檢測手段的結果不完全一致（一致率為76.00%）。表明兩種檢測手段聯合的診斷較單獨使用的效果更好，可明顯提高診斷效果。

綜上所述，實時熒光定量聚合酶鏈式反應聯合快速培養法聯合診斷肺炎支原體，效果良好，值得推廣。