HPLC法測定決明降脂片中大黃酚、橙黃決明素的含量

天津市寶坻區藥品檢驗所（301800）王海鳳

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：LC-2010CHT(日本島津)；AG135型電子天平。大黃酚對照品（批號：110796-201520，含量99.2%）、橙黃決明素對照品（批號：111900-20150，含量97.5%）中國藥品生物制品檢定所，樣品(市售)；乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：phenomenex C185μm×250 mm×4.6 mm；以乙腈為流動相A，0.1%磷酸溶液為流動相B。按附表規定進行梯度洗脫；柱溫：30℃；檢測波長：284 nm；流速：1.0ml/min；進樣量10μl。

2.2 對照品溶液的制備 對照品溶液：取大黃酚對照品15mg、橙黃決明素對照品10mg，分別置50ml量瓶中，加無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）定容，得貯備液。取

1ml置10ml量瓶制成每1ml含大黃酚30μg、橙黃決明素20μg的混合對照溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加人甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2小時，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25ml，蒸干，加稀鹽酸30ml，置水浴上加熱水解l小時，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，轉移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 線性關系考察 分別精密吸取對照品溶液5、10、15、20、25μl測定，以進樣量(μg)為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，計算回歸方程。橙黃決明素Y=71455X+5224，r=0.9999，在0.10～0.50μg范圍內線性關系良好；大黃酚Y=4441092.00x+3196.40，r=0.9997，在0.15～0.75μg范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，連續進樣6次，橙黃決明素峰RSD=0.86%；大黃酚峰RSD=0.91%，結果表明精密度良好。

2.6 穩定性試驗 分別精密吸取同一供試品溶液10μl，于0、2、4、8、12、24 h 注入液相色譜儀，大黃酚峰面積的RSD=0.98%，橙黃決明素峰面積的RSD=0.76%。表明供試品在24h內基本穩定。

附表 梯度洗脫表

2.7 重復性試驗 取同一供試品6份，按“2.3”的方法制備成供試品溶液，按上述色譜條件進行測定。結果大黃酚的平均含量為0.316mg/片，RSD=1.02%，橙黃決明素的平均含量為0.462mg/片，RSD=0.95%。表明該方法重復性良好。

2.8 回收率試驗 精密稱取已知含量的供試品6份，分別精密加入一定量對照品制備供試品溶液，依次進樣測定，計算加樣回收率。結果大黃酚和橙黃決明素的加樣回收率分別為99.3%，100.7%，RSD分別為1.16%，1.68%。

2.9 樣品含量測定 取3批樣品，按“2.3”方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，測定這三批供試品中大黃酚平均含量為0.331 mg/片，橙黃決明素的平均含量為0.458mg/片。

3 小結

溶劑和檢測波長的篩選根據《中國藥典》（2015版）中藥材及飲片決明子項下大黃酚和橙黃決明素的含量測定中規定選擇無水乙醇一乙酸乙酯(2∶1)作為樣品溶劑，檢測波長為284nm，故采用無水乙醇一乙酸乙酯(2∶1)作為溶劑；檢測波長為284nm。

上述色譜條件下，高效液相色譜法測定決明降脂片中大黃酚、橙黃決明素的含量，線性關系良好，精密度高，穩定性好，準確可靠，故該高效液相色譜法可以用于決明降脂片中大黃酚、橙黃決明素的定量分析。