HPLC法測(cè)定決明降脂片中大黃酚、橙黃決明素的含量

天津市寶坻區(qū)藥品檢驗(yàn)所（301800）王海鳳

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：LC-2010CHT(日本島津)；AG135型電子天平。大黃酚對(duì)照品（批號(hào)：110796-201520，含量99.2%）、橙黃決明素對(duì)照品（批號(hào)：111900-20150，含量97.5%）中國(guó)藥品生物制品檢定所，樣品(市售)；乙腈為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：phenomenex C185μm×250 mm×4.6 mm；以乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B。按附表規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：284 nm；流速：1.0ml/min；進(jìn)樣量10μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 對(duì)照品溶液：取大黃酚對(duì)照品15mg、橙黃決明素對(duì)照品10mg，分別置50ml量瓶中，加無(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）定容，得貯備液。取

1ml置10ml量瓶制成每1ml含大黃酚30μg、橙黃決明素20μg的混合對(duì)照溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品約10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加人甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，加稀鹽酸30ml，置水浴上加熱水解l小時(shí)，立即冷卻，用三氯甲烷振搖提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收溶劑至干，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇-乙酸乙酯（2∶1）混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25μl測(cè)定，以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。橙黃決明素Y=71455X+5224，r=0.9999，在0.10～0.50μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；大黃酚Y=4441092.00x+3196.40，r=0.9997，在0.15～0.75μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，橙黃決明素峰RSD=0.86%；大黃酚峰RSD=0.91%，結(jié)果表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密吸取同一供試品溶液10μl，于0、2、4、8、12、24 h 注入液相色譜儀，大黃酚峰面積的RSD=0.98%，橙黃決明素峰面積的RSD=0.76%。表明供試品在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

附表 梯度洗脫表

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品6份，按“2.3”的方法制備成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果大黃酚的平均含量為0.316mg/片，RSD=1.02%，橙黃決明素的平均含量為0.462mg/片，RSD=0.95%。表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品6份，分別精密加入一定量對(duì)照品制備供試品溶液，依次進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果大黃酚和橙黃決明素的加樣回收率分別為99.3%，100.7%，RSD分別為1.16%，1.68%。

2.9 樣品含量測(cè)定 取3批樣品，按“2.3”方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，測(cè)定這三批供試品中大黃酚平均含量為0.331 mg/片，橙黃決明素的平均含量為0.458mg/片。

3 小結(jié)

溶劑和檢測(cè)波長(zhǎng)的篩選根據(jù)《中國(guó)藥典》（2015版）中藥材及飲片決明子項(xiàng)下大黃酚和橙黃決明素的含量測(cè)定中規(guī)定選擇無(wú)水乙醇一乙酸乙酯(2∶1)作為樣品溶劑，檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm，故采用無(wú)水乙醇一乙酸乙酯(2∶1)作為溶劑；檢測(cè)波長(zhǎng)為284nm。

上述色譜條件下，高效液相色譜法測(cè)定決明降脂片中大黃酚、橙黃決明素的含量，線性關(guān)系良好，精密度高，穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確可靠，故該高效液相色譜法可以用于決明降脂片中大黃酚、橙黃決明素的定量分析。