探析生活飲用水微生物檢驗(yàn)方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

廣東省惠州市博羅縣疾病預(yù)防控制中心（516100）陳曉能 鄧育芳

隨著經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，工業(yè)化建設(shè)的進(jìn)程也在不斷地加快，導(dǎo)致人們?nèi)粘Ｉ钪械娘嬘盟镂廴驹絹碓絿?yán)重，也是造成人們疾病的主要原因之一[1][2]。所以，我國政府對(duì)生活飲用水的衛(wèi)生問題也越來越關(guān)注，并且多次發(fā)布和修改飲用水衛(wèi)生的標(biāo)準(zhǔn)。在我國，對(duì)生活飲用水均采用沉淀、過濾并且加氯消毒，減少水中的微生物，因此生活飲用水中的微生物檢測(cè)指標(biāo)就是評(píng)價(jià)水質(zhì)生物性污染的重要指標(biāo)。與此同時(shí)，本文選取一家生活飲用水中的微生物檢驗(yàn)科抽檢1000例水樣，對(duì)其進(jìn)行微生物大腸菌群檢驗(yàn)，探討生活飲用水微生物的檢驗(yàn)方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，具體報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取一家生活飲用水中的微生物檢驗(yàn)科抽檢1000例水樣，所有的水樣選取都是按照《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣的采集與保存》中的規(guī)定進(jìn)行具體操作。隨機(jī)抽取生活的飲用水，并對(duì)生活飲用水進(jìn)行大腸菌群檢測(cè)，將其分成觀察組和對(duì)比組，對(duì)兩組方法收集的1000例的水樣放入試管中進(jìn)行檢驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 觀察組中的多管發(fā)酵法

1.2.1.1 多管發(fā)酵法和需要的儀器和設(shè)備 多管發(fā)酵法主要用于對(duì)生活飲用水中總大腸菌群進(jìn)行測(cè)定。總大腸菌群是一種革蘭氏陰性菌，是一類無芽孢桿菌，在培養(yǎng)溫度為37℃的環(huán)境中進(jìn)行24小時(shí)的培養(yǎng)，可產(chǎn)酸產(chǎn)氣、發(fā)酵乳糖，并具有厭氧與需氧的特性。在多管發(fā)酵法中，需要采用培養(yǎng)基及其相關(guān)試劑進(jìn)行培養(yǎng)，在采用該方法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要采用培養(yǎng)基與實(shí)驗(yàn)試劑進(jìn)行測(cè)定。首先需要試管、天平、分度吸管、冰箱、顯微鏡、培養(yǎng)箱、小倒管、平皿、錐形瓶、載玻片這些儀器設(shè)備。

1.2.1.2 操作步驟 首先，分別將10mL、1mL水樣放至10mL的雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液以及10mL的單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中，另外將lmL水樣放入9mL無菌生理鹽水中，將其混勻后，取1mL將其放入單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，并將每一種稀釋度進(jìn)行5管接種。對(duì)于經(jīng)處理后的飲用水，也要每天進(jìn)行定期檢驗(yàn)。其次，對(duì)水源水樣行檢驗(yàn)時(shí)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)水源污染嚴(yán)重，應(yīng)將稀釋度加大，將3種接種水樣的稀釋度進(jìn)行5管接種，共15管。再就是試管接種后，將其置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，時(shí)間為24小時(shí)。然后，對(duì)于產(chǎn)酸產(chǎn)氣的接種管，將其在伊紅美藍(lán)瓊脂板上進(jìn)行轉(zhuǎn)種，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。同時(shí)對(duì)菌落形態(tài)進(jìn)行觀察，將紫黑色合并金屬光澤或無金屬光澤以及淡紫紅色且中心部分顏色較深的菌落進(jìn)行染色，并通過鏡檢進(jìn)行證實(shí)。最后，采用染色鏡進(jìn)行染色，證實(shí)為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則可對(duì)其進(jìn)行乳糖蛋白胨的培養(yǎng)，將接種管置于恒溫培養(yǎng)箱中，進(jìn)行一天培養(yǎng)之后，出現(xiàn)產(chǎn)酸氣的接種管，則為總大腸菌群陽性。

附表 兩組水樣檢驗(yàn)對(duì)比

1.2.2 對(duì)比組中的濾膜法 濾膜法主要采用0.45微米的微孔濾膜對(duì)水樣進(jìn)行過濾，對(duì)總大腸菌群進(jìn)行檢測(cè)。所需要的儀器和設(shè)備有0.45微米孔徑濾膜、小倒管、無齒鑷子、濾器、錐形瓶、培養(yǎng)箱、天平、冰箱、顯微鏡、試管、平皿、抽濾設(shè)備，分度吸管、載玻片。其次，濾膜法的具體操作步驟為：①滅菌：采用火焰進(jìn)行滅菌，可將酒精棉球點(diǎn)燃實(shí)施滅菌，還可采用蒸汽滅菌器實(shí)施滅菌，滅菌時(shí)間為20分鐘。同時(shí)，在燒杯中放置濾膜，并將蒸餾水加入燒杯中，將水煮沸三次進(jìn)行滅菌，每次滅菌時(shí)間為15分鐘。②培養(yǎng)：對(duì)水樣進(jìn)行過濾之后，再抽氣5秒，隨后把濾器閥門關(guān)上，并將濾膜用滅菌鑷子夾取至品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，將濾膜截留的細(xì)菌面朝上放置，緊貼培養(yǎng)基后在恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)。③過濾水樣：將滅菌濾膜采用無菌鑷子進(jìn)行夾取，將濾膜的粗糙面朝上，置于無菌濾床上，隨后將100mL水樣在濾器中注入，并打開閥門，進(jìn)行抽濾。

1.3 觀察指標(biāo) 水源污染比較嚴(yán)重的水樣在進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)可以進(jìn)行稀釋，每遞增一次就換一個(gè)滅菌刻度吸管。將試管放置在培養(yǎng)器皿中，將溫度控制在合理的溫度表上。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 對(duì)數(shù)據(jù)庫的錄入及統(tǒng)計(jì)分析均通過SPSS22.0軟件實(shí)現(xiàn)。計(jì)量資料的檢驗(yàn)和計(jì)數(shù)資料的檢驗(yàn)分別采用t 和x來體現(xiàn)。P<0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組中合格有478例，不合格22例，總合格率為95.6%。對(duì)比組中合格390例，不合格110例，總合格率為78%，觀察組中的檢驗(yàn)合格率明顯高于對(duì)比組，P<0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見附表。

3 討論

有研究顯示，多管發(fā)酵法在對(duì)少于1mL的水樣進(jìn)行接種時(shí)，應(yīng)稀釋10倍，隨后取1mL進(jìn)行接種，采用逐次遞增法進(jìn)行稀釋，在稀釋時(shí)的吸管應(yīng)具有滅菌刻度，它也是生活用水日常的檢驗(yàn)中最常用的一種檢驗(yàn)方法[3][4][5]。濾膜法則主要采用0.45微米的微孔濾膜對(duì)水樣進(jìn)行過濾，對(duì)總大腸菌群進(jìn)行檢測(cè)，采用火焰進(jìn)行滅菌，可將酒精棉球點(diǎn)燃實(shí)施滅菌，并將蒸餾水加入燒杯中，將水煮沸三次進(jìn)行滅菌，每次滅菌時(shí)間為15分鐘[6][7]。與此同時(shí)，生活飲用水的衛(wèi)生與人類身體的健康具有緊密聯(lián)系，所以相關(guān)部門應(yīng)加強(qiáng)飲用水的工作，加大對(duì)水源的管理力度，防止水污染。在工作范圍內(nèi)，還應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)水質(zhì)凈化消毒以及加大對(duì)群眾的飲用水衛(wèi)生的宣傳。尤其是對(duì)生活飲用水均采用沉淀、過濾并且加氯消毒，減少水中的微生物，因此生活飲用水中的微生物檢測(cè)指標(biāo)就是評(píng)價(jià)水質(zhì)生物性污染的重要指標(biāo)，并且所有的水樣選取都是按照《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法水樣的采集與保存》中的規(guī)定進(jìn)行具體操作。本次研究，探討生活飲用水微生物的檢驗(yàn)方法和評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。其中，觀察組中的總合格率為95.6%，對(duì)比組中的總合格率為78%，觀察組中的檢驗(yàn)合格率明顯高于對(duì)比組，表明了兩組檢驗(yàn)出來的數(shù)值完全不同，不同的檢驗(yàn)方法對(duì)大腸菌群的檢驗(yàn)顯得非常重要。這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)吻合，因此本次研究具有參考價(jià)值[8]。綜上所述，多管發(fā)酵法檢驗(yàn)和濾膜法的比較得出兩組的基本數(shù)據(jù)相同，但是兩組檢驗(yàn)出來的數(shù)值完全不同，其中有80%的濾膜是通過多管發(fā)酵法來界定的，因此，在相同的檢驗(yàn)環(huán)境中，不同的檢驗(yàn)方法對(duì)大腸菌群的檢驗(yàn)顯得非常重要。