柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠制備工藝優(yōu)化

王海燕 陳月華 李娟 陳瓊

摘要：考察影響柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠制備工藝的各因素，以包封率為指標(biāo)，確定柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠最佳制備工藝條件。以成型性、涂展性、穩(wěn)定性的綜合作用為指標(biāo)，采用正交試驗設(shè)計對影響凝膠劑質(zhì)量的卡波姆940用量、載藥量、5%羥苯乙酯乙醇溶液和三乙醇胺用量進行考察，并用高效液相色譜法測定所制凝膠中柚皮苷的含量。確定柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠最佳制備方法為以乳化-低溫固化法制備柚皮苷脂質(zhì)體；柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠處方為0.3 g卡波姆940為凝膠基質(zhì)、2 g 10%月桂氮卓酮無水乙醇溶液為促滲劑、1.0 g三乙醇胺為pH調(diào)整劑、0.4 g甘油為保濕劑、0.4 g 5%羥苯乙酯乙醇溶液為防腐劑、載藥量為2.08%。柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠劑制備工藝簡單，所制凝膠質(zhì)地均勻細(xì)膩，穩(wěn)定性良好。

關(guān)鍵詞：柚皮苷；脂質(zhì)體；緩釋凝膠；正交試驗設(shè)計

中圖分類號：R282 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）05-1252-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.05.041

Optimization of the Preparation Process of Naringin Liposome Sustained-release Gel

WANG Hai-yan，CHEN Yue-hua，LI Juan，CHEN Qiong

（Xinyang Engineering Research Center for the Exploitation of Chinese Medicine Resources/Xinyang Key Laboratory of Detection and Analysis of Chinese Medicine/Xinyang College of Agriculture and Forestry， Xinyang 464000，Henan，China）

Abstract： The factors which affect the preparation of naringin liposome sustained-release gel and establish the optimal preparation process were studied. The preparation method of naringin liposome was investigated with encapsulation percentage as selection standard. Formability， spread performance， stability were used as comprehensive evaluation indicator to select the preparation process by orthogonal design， taking the dosage of carbopol 940， drug loading， 5% hydroxy ethyl benzene ethanol solution and triethanolamine as factors and the content of naringin in gel was determined by HPLC. The naringin liposomes were preparaed by the method of emulsion-low temperature curing. The prescription of naringin liposome sustained-release gel was as follows：substrat of carbopol 940 was 0.3 g， penetration enhancers of 10% azone ethanol solution was 2 g， pH regulator of triethanolamine was 1.0 g， moisturizer of glycerol was 0.4 g， preservatives of 5% hydroxy ethyl ethanol solution was 0.4 g， the drug loading was 2.08 g naringin per 1 g of the gel. The preparation process of naringin liposome sustained-release gel is simple， the product is texture，delicate and stable.

Key word：naringin；liposome；sustained-release gel；orthogonal design

柚皮苷又名柚苷、柑橘苷、異橙皮苷，全稱為柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，是一種雙氫黃酮類化合物，主要存在于蕓香科植物葡萄柚、橘、橙的果皮和果肉中，也是骨碎補、枳實、枳殼、化橘紅等中藥的主要有效成分之一[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，柚皮苷具有多種生物學(xué)活性和藥理作用，包括抗炎[2]、抗過敏[3，4]等作用。脂質(zhì)體是由磷脂雙分子定向排列而成的直徑幾納米至幾微米的超細(xì)粒子，雙分子層內(nèi)外分別包封脂溶性和水溶性藥物，能使藥物具有靶向性，提高和延長療效，緩和毒性，避免耐藥性和改變給藥途徑等[5]。目前，有對柚皮苷脂質(zhì)體制備工藝的報道[6]，也有柚皮苷制成外用乳膏的報道[7]，但鮮見將其制成緩釋劑型的報道。為此，利用其抗炎、抗過敏活性，擬以柚皮苷脂質(zhì)體為模型藥物，將其開發(fā)成外用制劑柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠，對其劑型進行改革，可以填補國內(nèi)柚皮苷凝膠劑型的空白。本試驗以包封率為指標(biāo)，采用正交試驗設(shè)計對柚皮苷脂質(zhì)體的制備方法進行研究，并對柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠的處方進行優(yōu)化，為擴大柚皮苷臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

柚皮苷原料（上海源葉生物科技有限公司，經(jīng)HPLC法測定質(zhì)量分?jǐn)?shù)在99.0%以上）；柚皮苷對照品（含量>99.0%，中國食品藥品檢定研究所，批號110722-200309）；卡波姆940（廊坊聚通化工有限公司，批號20120116）；甲醇為色譜純，膽固醇、卵磷脂、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、冰醋酸、三乙醇胺、羥苯乙酯、甘油、月桂氮卓酮、三氯化鋁等均為分析純；純化水自制。

1.2 儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；S21-1型磁力攪拌器（上海予騰生物科技有限公司）；RE-3000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-3 型循環(huán)水多用真空泵（鄭州杜甫儀器廠）；ZSBB-712 型恒溫水浴（上海智城分析儀器制造有限公司）；PB602-S 型電子天平[梅特勒·托利多儀器（上海）有限公司]；SCQ-8201E型超聲清洗儀（上海聲彥超聲波儀器設(shè)備有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 柚皮苷脂質(zhì)體的制備 精確稱取柚皮苷粉末適量，以水溶解并定容至棕色容量瓶中，使其濃度為1.1 mg/mL，作為水相，置于陰暗處備用。選取脂質(zhì)體制備方法（A）、磷脂濃度（B）、磷脂與膽固醇比例（質(zhì)量比）（C）和脂藥比（D）（質(zhì)量比）為考察因素，按L9（34）正交表進行試驗，因素和水平見表1。

1.3.2 脂質(zhì)體制備方法 乳化-低溫固化法按文獻[8]制備；薄膜分散法按文獻[9]制備；逆向蒸發(fā)法按文獻[10]制備。

1.3.3 包封率測定 采用葡聚糖凝膠柱層析法測定所制脂質(zhì)體包封率[11]。

1.3.4 驗證試驗 按照正交試驗優(yōu)選的制備工藝條件，平行制備3份柚皮苷脂質(zhì)體，按“1.3.3”的方法測定包封率，進行驗證試驗。

1.3.5 柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠的制備 在單因素試驗的基礎(chǔ)上，選取影響柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠劑質(zhì)量的卡波姆940用量、載藥量、5%羥苯乙酯乙醇溶液用量和三乙醇胺用量為考察因素，按L9（34）正交表進行試驗，采用綜合評分法對正交試驗數(shù)據(jù)進行分析，綜合評分標(biāo)準(zhǔn)見表2，正交試驗因素和水平見表3。

1.3.6 柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠的質(zhì)量控制

1）性狀：柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠為淡黃色半固體凝膠。

2）鑒別：取樣品0.2 g，加甲醇10 mL，超聲處理20 min，離心，取上清液作為供試溶液。另取柚皮苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按照薄層色譜法試驗，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-冰醋酸-水（8∶4∶0.2∶1）（體積比）為展開劑進行處理，取出晾干，噴以5%三氯化鋁乙醇溶液，105 ℃加熱1 min，置于紫外光燈（365 nm）下進行鑒別。

3）檢查：檢查是否符合凝膠劑的有關(guān)規(guī)定[12]。

4）含量測定：按照參考文獻[13]的方法測定。取樣品0.1 g，精確稱定，置于錐形瓶中，加甲醇30 mL，加熱回流3 h，放冷，濾過，濾液置于50 mL量瓶中，用少量甲醇分?jǐn)?shù)次洗滌容器，洗液裝入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，測定柚皮苷的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 柚皮苷脂質(zhì)體制備正交試驗結(jié)果

由表4、表5結(jié)果分析可知，各因素對柚皮苷脂質(zhì)體包封率影響的主次順序為A、B、C、D，即脂質(zhì)體制備方法和磷脂濃度為主要影響因素，且影響極顯著，脂藥比影響最小。確定的最佳工藝條件為A1B2C1D2，即以乳化-低溫固化法制備脂質(zhì)體、磷脂濃度為30 mg/mL、磷脂∶膽固醇為3∶1、脂藥比為8∶1。

2.2 驗證試驗結(jié)果

按正交試驗優(yōu)選的制備工藝條件進行驗證試驗，測定包封率，結(jié)果分別為41.2%、40.9%、41.8%，平均包封率為41.3%，高于正交試驗表中任一條件下的包封率。

2.3 柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠的制備

采用綜合評分法對柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠制備正交試驗數(shù)據(jù)進行分析，正交試驗結(jié)果見表6、方差分析見表7。由表6、表7結(jié)果分析可知，柚皮苷脂質(zhì)體凝膠中各因素影響的主次順序為B、D、C、A，即載藥量為主要影響因素且具有顯著性，5%羥苯乙酯乙醇溶液影響最小。確定的最佳處方條件為A2B3C2D3，即載藥量1.0 g（即每20 g凝膠含柚皮苷1 g）、卡波姆940 0.30 g、三乙醇胺1.0 g、5%羥苯乙酯乙醇溶液0.4 g，制備的凝膠成型性能好、易涂展、質(zhì)量穩(wěn)定。

2.4 柚皮苷脂質(zhì)體緩釋凝膠的質(zhì)量控制

按優(yōu)選的制備工藝條件，制備總量為20 g凝膠3批。稱取基質(zhì)卡波姆940 0.3 g置于小燒杯中，加入甘油0.4 g，攪拌均勻使其全部潤濕，加入純化水適量使完全溶脹，得空白凝膠，備用。另稱取柚皮苷脂質(zhì)體1.0 g，加入5%羥苯乙酯乙醇溶液0.4 g和10%月桂氮卓酮無水乙醇溶液2.0 g，混勻，加入到空白凝膠中，攪拌使其分布均勻，加入1.0 g三乙醇胺，攪拌均勻，即得到凝膠。按優(yōu)選的工藝制備3批凝膠，放置30 d后，其外觀均勻、細(xì)膩，易涂展，成型性良好，微生物限度檢測均符合規(guī)定。按優(yōu)選的工藝制備的3批凝膠柚皮苷含量分別為2.13%、2.03%和2.08%，平均含量2.08%。

3 小結(jié)與討論

柚皮苷廣泛存在于柚、橘、橙等的果皮和果肉中，也是骨碎補、枳實、枳殼、化橘紅等中藥的主要有效成分之一[1]，具有抗炎[2，3]、抗過敏[4，5]等作用，為其開發(fā)成外用制劑提供了藥理學(xué)基礎(chǔ)。

中藥水性凝膠劑具有美觀、易涂布、不油膩、易洗除等優(yōu)點。影響凝膠劑成型的因素有載藥量、基質(zhì)、保濕劑以及pH調(diào)整劑等。本試驗以凝膠的成型性、涂展性和穩(wěn)定性3個指標(biāo)的綜合作用進行評價，利用正交試驗設(shè)計系統(tǒng)考察了影響凝膠質(zhì)量的工藝條件，制備出柚皮苷脂質(zhì)體凝膠。柚皮苷脂質(zhì)體凝膠具有制備簡單，使用、攜帶方便等優(yōu)點，且患者依從性高。

卡波姆，商品名為卡波普（Carbopol）[14]，具有易于涂展、黏附性好、易清洗、無油膩感、能吸收組織滲出液、對皮膚無刺激性等特點，常作為凝膠劑骨架材料被廣泛用于緩控釋經(jīng)皮制劑的制備，其用量會直接影響凝膠黏度和藥物的釋放，一般選用質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%～2.0%卡波姆[14]。處方中選用甘油作為保濕劑、10%月桂氮卓酮無水乙醇溶液作為促透劑。

本試驗是在實驗室條件下進行的柚皮苷脂質(zhì)體凝膠劑制備，按優(yōu)選工藝條件制備的凝膠外觀、涂展性、穩(wěn)定性等均符合規(guī)定，作為新劑型，還需對其刺激性、藥物的透皮吸收、藥物的體外抗菌作用進行相關(guān)考察。

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