纖溶酶原激活物抑制物-1基因4G/5G位點多態性與腦梗死的相關性研究

茅新蕾，韓麗雅，黃向東，管朝紅

·論著·

纖溶酶原激活物抑制物-1基因4G/5G位點多態性與腦梗死的相關性研究

茅新蕾，韓麗雅，黃向東，管朝紅

目的研究纖溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）基因4G/5G位點多態性與腦梗死的關系。方法根據急性缺血性腦卒中Org10172治療試驗（TOAST）分型，收集大動脈粥樣硬化型（LAA）腦梗死患者125例，小動脈閉塞型（SAO）腦梗死患者147例，以及同期體檢中心體檢者127例。比較腦梗死患者臨床特征及PAI-1基因4G/5G位點多態性。結果與對照組相比，LAA組和SAO組腦梗死患者高血壓患病率、吸煙及飲酒比例顯著增高，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平低（均＜0.05）。LAA組，SAO組及對照組均出現了4G/4G、4G/5G、5G/5G 3種基因型，3組基因型的分布差異有統計學意義（＜0.05）。結論高血壓、吸煙、飲酒、HDL-C水平降低是溫州地區腦梗死患者的重要危險因素。溫州地區人群PAI-1基因4G/5G位點4G/5G基因型是腦梗死的危險因素。

腦梗塞；纖溶酶原激活物抑制劑-1；基因多態性

［Modem Practical Medicine，2016，28（8）：988-989，1008］

腦梗死的病因可歸為血管壁病變、心臟病和血流動力學病變、血液成分和血液流變學改變。血液成分改變導致血液凝固的過程中凝血、抗凝、纖溶系統相互協調、相互制約。纖溶酶原激活物抑制物-1 （PAI-1）是纖溶系統中的主要成分，對調節纖溶系統活性的平衡起著重要的作用。PAI-1基因4G/5G基因多態性可能影響纖溶系統而促使腦梗死。本研究對此進行探討，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2014年5—9月浙江省溫州市中心醫院收治的腦梗死患者，進行急性缺血性腦卒中Org10172治療試驗（TOAST）分型：大動脈粥樣硬化型（LAA）腦梗死患者125例，小動脈閉塞型（SAO）患者147例。另選同期來本院體檢者127例為對照組。所有研究對象均排除：（1）血小板計數＞450×109/L或＜100×109/L；（2）血紅蛋白＜9g/dl；（3）有骨髓增生癥病史；（4）心房顫動；（5）惡性腫瘤；（6）對照組既往腦卒中者。

表1　研究對象一般資料比較

1.2方法

1.2.1血標本檢測利用奧林帕斯5400全自動生化分析儀檢測血脂，包括總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）。

1.2.3PAI-1基因4G/5G基因多態性檢測引物：rs1799768-FO，5’CGTTGGTCTCCTGTTTCCTT3’；rs1799768-RO，5’AGCCAGCCACGTGATTGT3’。聚合酶鏈式反應（PCR）反應體系：模板1l，引物Fi 1l，引物Ri 1l，dNTP 10 mmol/L 1l，Taq Buffer 5l，25 mmol/L MgCl25l，Taq酶0.5l，水35.5l。PCR反應程序：95℃預變性3 min，94℃變性30 s，60℃退火35 s，72℃延伸50 s，共35個循環，72℃修復延伸8 min。PCR產物純化回收后，應用ABI3730XL DNA測序儀進行檢測。

1.3統計方法應用SPSS19.0統計軟件進行分析。計量資料以均數±標準差表示，組間比較用方差分析；計數資料比較用2檢驗；對基因型資料進行遺傳平衡檢驗（Hardy-weinberg法）。＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.13組一般資料比較3組高血壓病患病率、吸煙、飲酒及HDL-C水平差異均有統計學意義（均＜0.05）。見表1。

2.2PAI-1基因4G/5G位點多態性檢測PAI-1基因4G/5G多態性位點存在缺失型（4G/4G）、雜合型（4G/5G）、插入型（5G/5G）3種基因型。測序圖譜見封二彩圖1。

2.33組PAI-1基因4G/5G位點多態性比較對照組人群基因型頻率分布符合Hardy-weinberg平衡定律（2=1.417，=0.234）。3組基因型分布差異有統計學意義（2=21.490，＜0.05）。3組4G、5G等位基因的分布差異無統計學意義（2=1.778，=0.411）。見表2。

2.4病例組（LAA組+SAO組）和對照組PAI-1基因4G/5G位點多態性比較兩組3種基因型的分布差異有統計學意義（2=19.191，＜0.05）。兩組4G、5G等位基因的分布差異無統計學意義（2=1.150，=0.284）。見表3。

3　討論

表2　3組PAI-1基因4G/5G位點基因型比較例（％）

表3　病例組和對照組PAI-1基因4G/5G位點基因型的比較例（％）

正常情況下，組織型纖溶酶原激活物（t-PA）和PAI相互作用取得平衡，纖溶功能下降使平衡破壞，導致多種血栓栓塞性疾病。血漿中PAI的活性主要由PAI-1表現［1-2］。PAI-1抑制t-PA活性，使其迅速失活，使纖溶酶原不能轉變為纖溶酶，導致血栓形成。目前，PAI-1基因對血漿PAI-1活性的影響作用日益受到重視。人PAI-1基因定位于7號染色長臂q21.3 ～22，包括9個外顯子和8個內含子［3］。近年來研究較多的是PAI基因啟動子區4G/5G插入/缺失多態性，是PAI-1基因轉錄起始點上游-675bp位點上由于單個鳥嘌呤插入/缺失形成了4個鳥嘌呤堿基序列（4G）或5個鳥嘌呤堿基序列（5G）的多態性改變。

根據TOAST分型，腦梗死可進一步區分為LAA、SAO等類型，不同腦梗死類型有不同的遺傳易感基因。本研究顯示：LAA組與SAO組、對照組均出現了4G/4G、4G/5G、5G/5G 3種基因型。LAA組與SAO組4G/5G基因型顯著高于對照組，表明4G/5G基因型是腦梗死的危險因素，且同樣影響LAA與SAO兩種類型的腦梗死。目前，PAI-14G/5G位點多態性與腦梗死關系的研究結論并不一致，文獻［4-5］顯示，4G等位基因是腦梗死的危險因素，亦有學者［6］得出了相反的結論，本研究結果與Ranellou等［7］研究結果相似。一般認為，4G/4G基因型者有較高的PAI-1分泌功能和血漿較高PAI-1水平從而促使血栓形成。但另一方面，PAI-1也具有穩定動脈粥樣斑塊、減少t-PA神經毒性的作用。

缺血性腦血管病與多種環境因素相關。本研究發現，高血壓病患病率、吸煙、飲酒及HDL-C水平差異有統計學意義（均＜0.05）。由于本次收集的體檢者基本為老年人，亦存在血管病危險因素，故糖尿病、LDL-C等差異無統計學意義（均＞0.05）。此結果提示盡量減少患者可控性血管病危險因素意義巨大。

［1］劉艷紅，韓子明.雙環醇對單側輸尿管梗阻大鼠腎間質PAI-1表達的影響［J］.中國當代兒科雜志，2011，13（6）：509-513.

［2］Al-Horani RA.Serpin regulation of fibrinolytic system：implications for therapeutic applications in cardiovascular diseases［J］.Cardiovasc Hematol Agents Med Chem，2014，12（2）：91-125.

［3］劉元偉，鄧妙，岑加萍，等.PAI-1基因啟動子區4G/5G基因多態性與多囊卵巢綜合征［J］.國際婦產科學雜志，2015，42（3）：298-300，305.

［4］梁亮，何紅華，蔡靜怡，等.纖溶酶原激活劑抑制物-1基因啟動子區4G/5G、-844G/A單核甘酸多態性及其單倍型與缺血性腦卒中的關聯分析［J］.中國實用醫藥，2014，9（23）：99-101.

［5］CaoY，ChenW，QianY，etal.Plasminogenactivatorinhibitor-14G/5G polymorphism and ischemic stroke risk：a meta-analysis in Chinese population［J］.Int J Neurosci，2014，124（12）：874-881.

［6］Saidi S，Slamia LB，Mahjoub T，et al.Association of PAI-1 4G/5G and-844G/AgenepolymorphismandchangesinPAI-1/tPAlevelsin stroke：acase-controlstudy［J］.J Stroke Cerebrovasc Dis，2007，16（4）：153-159.

［7］Ranellou K，Paraskeva A，Kyriazopoulos P，et al.Polymorphisms in prothromboticgenesinyoungstrokepatients inGreece：acase-controlled study［J］.Blood Coagul Fibrinolysis，2015，26（4）：430-435.

The relationship of plasminogen activator inhibitor-1 gene 4G/5G polymorphism and cerebral infarction

HANLiya，Email：wzeyhly@163.com

ObjectiveTo investigate the relationship of plasminogen activator inhibitor-1（PAI-1）gene 4G/5G polymorphism and cerebral infarction.MethodsData was prospectively collected from consecutive ischemic stroke inpatients in neurology department of Wenzhou central hospital.According to the TOAST criteria，125 large-artery atherosclerosis（LAA）patients and 147 Small-artery occlusion（SAO）patients were enrolled.The control group had 127 subjects from the Medical Examination Center in the same period.The clinical characteristics and 4G/5G polymorphism of PAI-1 gene were compared among the three groups.ResultAs compared with the controls，percentage of high blood pressure（HBP），smoking，drinking，high-density lipoprotein cholesterol concentration（sHDL-C）in LAA and SAO groups（all＜0.05）.There were three genotypes（4G/4G、4G/5G、5G/5G）in each groups.There was significantly difference of genotype frequency in the three groups（＜0.05）.ConclusionHBP，smoking，drinking，decreasing high-density lipoprotein cholesterolare risk factorsof cerebral infarctionpopulation in Whenzhou district.The PAI-1Gene 4G/5G genotype increases the risk of cerebral infarction.

Cerebral infarction；Plasminogen activator inhibitor-1；Gene polymorphism

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.08.004

R743.3

A

1671-0800（2016）08-0988-03

2015-10-08

（本文編輯：孫海兒）

浙江省醫藥衛生科技計劃（2011KYA148）

325000浙江省溫州，溫州市中心醫院

韓麗雅，Email：wzeyhly@163.com

MAO Xinlei，HAN Liya，HUANG Xiangdong，GUAN Chanhong.（Wenzhou Central Hospital，Wenzhou 325000，Zhejian，China）