迷迭香中抗氧化劑總酚含量的測定

樊紅日李 健陳 寶沈 芳張立穎

（1.廣西工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530001；2.廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西 南寧 530004）

迷迭香中抗氧化劑總酚含量的測定

樊紅日1李 健1陳 寶2沈 芳2張立穎1

（1.廣西工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣西 南寧 530001；2.廣西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，廣西 南寧 530004）

通過對春、秋、冬三季迷迭香干料和春季鮮料提取得到的抗氧化劑進行總酚含量測定，得出干料提取得到的抗氧化劑總酚含量比鮮料高，且秋季迷迭香干葉制得的抗氧化劑的總酚含量最高，達到 297mg/g，因此抗氧化劑的提取最好選擇秋季干葉為原料。

迷迭香；抗氧化劑；總酚含量

迷迭香是一種非常名貴的天然香料植物，原產(chǎn)于歐洲地中海沿岸地區(qū)。它是唇形常綠灌木，普通樹高40～80cm，最高時可達 150cm。迷迭香花呈淡藍或近白色，其莖葉清香，一般在6、7月間開花。迷迭香可家庭盆栽或地栽，擺放在陽臺、庭院或室內(nèi)，散發(fā)的芳香味可以凈化空氣，給人清幽安謐的感覺［1］。

目前在世界上許多地區(qū)均有種植迷迭香。我國是1981年才首次將迷迭香引入。目前，我國南方的云南、貴州、廣西、海南和新疆等地已廣為栽種迷迭香［2］。

迷迭香抗氧化劑是從迷迭香植物中提取的具有抗氧化活性的一系列物質(zhì)構(gòu)成的混合物，分為脂溶性和水溶性兩種［3］。迷迭香脂溶性抗氧化劑的主要成分包括二萜酚類和二萜酮類化合物。目前已經(jīng)分離鑒定出的二貼酚類有鼠尾草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、表迷迭香酚、異迷迭香酚、迷迭香二醛、迷迭香二酚、迷迭香寧、異迷迭香寧等化合物。二萜酮類有表單參酮、落羽松二醌等。三萜類有主要有:齊墩果酸、熊果酸、樺木醇、樺木酸、19-α-羥基熊果酸、2-β-羥基-齊墩果酸、表-α-香樹脂醇、蒲公英賽醇、香樹脂素、羽扇豆醇、蒲公英泌醇、日耳曼醇、膽措醇、谷幽醇等，還有些黃酮類，有機酸等。而水溶性抗氧化劑的主要成分大多都是酸類，分別為:迷迭香酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸，L-抗壞血酸、橙皮昔和異橙皮昔等［4-6］。

由此可見，抗氧化劑中總酚物質(zhì)的多少可以作為衡量所制得的抗氧化劑質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)之一，本文擬用乙醇提取迷迭香得到脂溶性抗氧化劑，通過對其總酚含量進行測定來檢驗所制得抗氧化劑的質(zhì)量。

1 迷迭香抗氧化劑的制備工藝

本實驗所用迷迭香來自廣西巴馬縣。摘取一定量的秋季迷迭香枝葉，粉碎后采用水蒸氣蒸餾法提取精油，將過濾得到的殘渣用95%工業(yè)酒精提取兩次，所得浸提液用活性炭回流脫色一小時后濃縮，用熱水洗滌濾渣后即得脂溶性抗氧化劑，而洗滌得到的濾液經(jīng)蒸餾至浸膏狀即為水溶性抗氧化劑，工藝流程見圖1。

圖1 迷迭香抗氧化劑提取工藝流程圖

2 抗氧化劑中總酚含量的測定

在堿性溶液中，多酚類化合物可以將鎢鉬酸還原（W6+→W5+）生成藍色化合物［7］，顏色的深淺與多酚含量成正相關(guān)，該藍色化合物在760nm有最大吸收［3］。一般用沒食子酸作為參照標(biāo)準(zhǔn)。提取物中總多酚的含量以等同于沒食子酸的量表示。

2.1 福林-酚試劑的制配

在1L的磨口回流裝置內(nèi)加入50g鎢酸鈉（Na2WO4·2H2O），12.5g鉬酸鈉（Na2MoO4·2H2O），350mL水，再加25mL85%磷酸和50mL濃鹽酸，充分混合，內(nèi)置攪拌子，在110～120℃的甘油浴中連續(xù)回流10h。

再加入87.36g硫酸鋰（Li2SO4·H2O）及數(shù)滴液溴，繼續(xù)沸騰15min以去除過量的溴。最后顏色呈黃色后冷卻至室溫后定容至500mL，用濾紙過濾后，置于棕色瓶中備用［8］。

2.2 最佳波長的選擇

稱取2g迷迭香脂溶性抗氧化劑，用無水乙醇溶解后定容至100mL，從中取出1mL于10mL容量瓶中，依次加入1mL蒸餾水，0.5mL福林-酚試劑進行混合，在0.5～8min內(nèi)，再加入1.5 mL20% Na2CO3溶液后用水定容。室溫下放置2h后，用紫外分光光度計在500～800nm的光譜范圍內(nèi)進行掃描，找出最大吸收波長。

2.3 沒食子酸的提純

稱取沒食子酸約5g于燒杯中，加入50mL蒸餾水，在50℃的水浴中加熱溶解，得到淺黃色溶液。用濾紙趁熱過濾，濾液冷卻至室溫后，燒杯內(nèi)出現(xiàn)白色絮狀結(jié)晶物。抽慮結(jié)晶，于110℃干燥至恒重，放在棕色瓶保存。

2.4 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

準(zhǔn)確稱取經(jīng)提純的沒食子酸0.5000g，用10mL無水乙醇溶解，并用蒸餾水定容至100mL，用移液槍分別移取0，30，40，50，60，70，80，100μL到10mL的容量瓶中，依次加入1mL蒸餾水，混合；再加入0.5mL福林-酚試劑進行混合，在0.5～8min內(nèi)，加入1.5mL20%Na2CO3充分混合后定容。在室溫下放置2h后，用分光光度計于500～800nm的波長范圍進行光譜掃描，測定吸光值。以前面所測得的樣品最佳吸收波長為基準(zhǔn)，找出各濃度沒食子酸在最佳吸收波長下的吸光度，并以此為縱坐標(biāo)，以沒食子酸的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.5 樣品中總酚含量的測定

樣品溶液的配制：準(zhǔn)確稱取自制抗氧化劑樣品0.2g左右，脂溶性抗氧化劑用10mL無水乙醇溶解（水溶性用水溶解），然后用無水乙醇（水溶性用蒸餾水）定容至100mL。

取1mL樣品溶液加入到10mL容量瓶中，依次加入1mL蒸餾水，混合；再加入0.5mL福林-酚試劑進行混合，在0.5～8min內(nèi)，加入1.5mL20%Na2CO3溶液充分混合后定容。室溫下放置2h后，用分光光度計于500～800nm的波長范圍進行光譜掃描，測定吸光值。找出在最佳波長下的吸光值，并根據(jù)此吸光值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上算出相應(yīng)的總酚濃度，同時做空白實驗。總酚含量按以下方法計算：

式中：a——單位抗氧化劑所含有酚的質(zhì)量，以沒食子酸計量，單位mg（沒食子酸）/g（抗氧化劑）

c——用于測量吸光值的抗氧化劑濃度，mg/mL

c1——在濃度c下測得相應(yīng)吸光值后，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線得

到的酚的濃度，mg/mL。

3 實驗結(jié)果與討論

（1）最佳吸收波長的確定

通過光譜掃描圖可確定最佳吸收波長為755nm。

（2）沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照福林-酚比色法測得了對照品沒食子酸不同濃度下的吸光值，并繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線（c-A 曲線）如圖2所示。

圖2 總酚含量測定沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)去曲線

由圖2可知，該標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R2=0.997，得到?jīng)]食子酸濃度（c，mg/mL）-吸光度A（755nm）的線性方程為y（A）=13.08x（c）-0.086。由于吸光光譜穩(wěn)定，所制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線仍具有較好的線性關(guān)系。

（3）樣品總酚含量的測定

所稱取的抗氧化劑質(zhì)量及所配成的濃度見表1和表2。

表1 脂溶性抗氧化劑及相應(yīng)吸光值

表2 水溶性抗氧化劑及相應(yīng)吸光值

將表1和表2所得到的吸光值代入圖2標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程可分別得到不同濃度抗氧化劑中酚的濃度（以沒食子酸計），再按總酚含量計算式可計算出各抗氧化劑的酚含量，并制得表。

表3 抗氧化劑的酚含量

4 結(jié)論

從表3可知，三個季節(jié)提取得到的水溶性抗氧化劑的酚含量比脂溶性抗氧化劑要高，而春季鮮葉制得的脂溶性抗氧化劑酚含量比水溶性的高。就總酚含量而言（脂溶性抗氧化劑與水溶性抗氧化劑酚含量的總和），干料提取得到的抗氧化劑總酚含量比鮮料的高，且秋季迷迭香干葉制得的抗氧化劑的總酚含量最高，達到297mg/g，因此抗氧化劑的提取最好選擇秋季干葉為原料。

［1］ 孫尚賢.芳香植物-迷迭香［J］.中國花卉園藝，2002，（21）:17.

［2］ 張沖，馮玉紅，周雪晴，等.迷迭香揮發(fā)油成分分析［J］.海南大學(xué)學(xué)報自然科學(xué)版，2008，26（1）:74-77.

［3］ 韓宏星，宋志宏，屠鵝飛.迷迭香水溶性成分研究［J］.中草藥，2001，32（10）:877-878.

［4］ 張保順，袁呂江，馮敏，等.迷迭香天然抗氧化劑研究及其應(yīng)用［J］.糧食與油脂，2004，（11）:9-10.

［5］ 吳蒙，徐曉軍.迷迭香化學(xué)成分及藥理作用最新研究進展［J］.生物質(zhì)化學(xué)工程，2016，50（3）:51-57.

［6］ 程賢，畢良武，趙振東，等.迷迭香酸的提取純化及生物活性研究進展［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2015，35（4）:151-158.

［7］ 凌關(guān)庭.抗氧化食品與健康［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2004:58-60.

［8］ C.S.ough，M.A.Amerine.Methods for Analysis of Musts and Wines（second edition）［M］.New York:J.Wiley and sons，1988:203-205.

Determine of total phenol contention of antioxidant from rosemary

The antioxidants of dry and fresh leaves from rosemary in spring， autumn， winter three seasons were extracted and the total content of phenol was measured. The results showed that the total content of phenol of dry leaves was higher than that of the fresh ones .And dry leaves in autumn was the highest， which could up to 279mg/g. So the ideal raw material for extracting antioxidants was dry leaves in autumn.

Rosemary； antioxidants； total content of phenol

O657

A

1008-1151（2016）08-0045-02

2016-07-13

廣西教育廳科研項目（2013YB331）；廣西工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院科研基金（桂工業(yè)院科研 2012003005）；南寧市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)項目（20155345）。

樊紅日（1966-），男，廣西忻城人，廣西工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院高級實驗師，從事物質(zhì)中成分的分析及檢測。