雙環(huán)醇對大鼠口服他克莫司和阿托伐他汀后血漿藥代動力學的影響

王燕 扈金萍

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雙環(huán)醇對大鼠口服他克莫司和阿托伐他汀后血漿藥代動力學的影響

王燕 扈金萍

目的 研究雙環(huán)醇對大鼠口服他克莫司和阿托伐他汀后血漿藥代動力學的影響，為雙環(huán)醇與其他臨床藥物合理應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法 SD大鼠分為空白對照組和雙環(huán)醇組，分別口服給予0.5%羧甲基纖維素(CMC)和雙環(huán)醇200 mg·kg-1·d-1，連續(xù)給藥7 d。實驗第8天兩組動物分別口服給予他克莫司(2 mg/kg)和阿托伐他汀(10 mg/kg)。應(yīng)用LC/MS/MS分析方法測定各組動物給藥后不同時間點的血藥濃度。采用WinNonLin軟件進行非房室模型分析，計算血漿藥代動力學參數(shù)。結(jié)果 空白對照組和雙環(huán)醇給藥組大鼠(200 mg·kg-1·d-1，7 d)口服他克莫司及阿托伐他汀后的血漿血藥峰濃度(Cmax)及藥時曲線下面積(AUC)差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論 雙環(huán)醇多次給藥后對合用藥物他克莫司和阿托伐他汀在大鼠體內(nèi)血漿藥代動力學無明顯影響。

雙環(huán)醇；他克莫司；阿托伐他?。凰幋鷦恿W；相互作用

聯(lián)合用藥是目前臨床協(xié)同治療或降低毒副作用的重要手段，但合用藥物間代謝性相互作用可導致血液或靶器官中藥物濃度降低或升高，在一定程度上改變藥物的安全性和療效[1]。

他克莫司和阿托伐他汀是目前臨床最常用的腎移植術(shù)后免疫抑制劑和他汀類降脂藥物，但在長期臨床應(yīng)用中，可出現(xiàn)肝損傷等不良反應(yīng)[2]，因此在免疫治療和降脂過程中常使用保肝藥治療藥物引起的肝損傷。雙環(huán)醇片(Bicyclol，商品名：百賽諾)是我國首個上市的治療肝臟炎癥的1.1類化學新藥。以往研究結(jié)果表明，雙環(huán)醇可預(yù)防和治療腎移植術(shù)后抗排斥藥物以及降脂藥引起的肝損傷[3]。應(yīng)用雙環(huán)醇進行抗炎保肝治療的同時是否會影響合用藥物的代謝，是臨床關(guān)注的熱點問題之一。本研究擬觀察雙環(huán)醇多次給藥后對上述兩種藥物在大鼠體內(nèi)血藥濃度的影響，旨在降低臨床用藥風險，避免因藥物代謝性相互作用而引起的不良反應(yīng)，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

資料和方法

一、材料

(一)藥物和試劑 雙環(huán)醇由北京協(xié)和藥廠提供，純度>99%；他克莫司(普樂可復(fù)膠囊)由華北制藥集團新藥研究開發(fā)中心惠贈；阿托伐他汀鈣(批號：100590-200802)購自中國食品藥品檢定研究院；環(huán)孢素A(CAS：59865-13-3)購自百靈威公司；辛伐他汀(CAS：79902-63-9)購自美侖生物技術(shù)有限公司。甲醇和乙腈為色譜純(Fisher，美國)，其他試劑均為分析純。超純水由Milli-Q 純水儀制備(Millipore，MA，美國)。

(二)實驗動物 雄性SD大鼠，體重180～200 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。動物許可證編號： SCXK(京)2012-0001。

(三)實驗儀器 美國AB公司API 4000液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜，包括ESI源、自動進樣器、質(zhì)譜泵及Analysist 1.5.2數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；島津LC-30AD液相色譜儀。

二、方法

(一)動物給藥及處理 雙環(huán)醇、他克莫司、阿托伐他汀分別用0.5% 羧甲基纖維素(CMC)配制成濃度為20 mg/mL、0.2 mg/mL、1 mg/mL混懸液，用于口服給藥。將20只SD大鼠分成兩組，每組10只，分別為空白對照組和雙環(huán)醇給藥組。雙環(huán)醇給藥組口服雙環(huán)醇 200 mg·kg-1·d-1，連續(xù)給藥7 d，空白對照組給予同體積0.5% CMC。實驗第8天空白對照組和雙環(huán)醇給藥組大鼠分別口服給予他克莫司(2 mg/kg)和阿托伐他汀(10 mg/kg)。大鼠口服他克莫司后0、2、5、10、15、30、45 min、1、2、3、4、6、8、12、24 h各時間點自大鼠眼眶靜脈叢取血約300 μL，肝素抗凝后離心分離血漿備用；大鼠口服阿托伐他汀后0、5、10、20、30、45 min、1 h，1.5 h、2 h、3 h、4 h，6 h，8 h，12 h各時間點自大鼠眼眶靜脈叢取血約300 μL，肝素抗凝離心后，分離血漿備用。

(二)標準曲線配制 ①他克莫司：取大鼠空白血漿樣品50 μL，加入不同濃度他克莫司(0.0015，0.0025，0.005，0.025，0.05，0.125，0.25，0.5，1，1.5 μg/mL)標準品各10 μL，再加入10 μL內(nèi)標環(huán)孢素A(1.25 μg/mL)，混勻后加入乙腈180 μL沉淀蛋白，高速離心14000×5 min兩次，取上清液5 μL進行LC/MS分析。②阿托伐他?。喝〈笫罂瞻籽獫{樣品50 μL，加入不同濃度阿托伐他汀鈣(0.001， 0.0025，0.005，0.025，0.05，0.1，0.25，0.5，1，2.5，5 μg/mL)標準品各10 μL，再加入10 μL內(nèi)標辛伐他汀(1.25 μg/mL)混勻后加入乙腈180 μL沉淀蛋白，高速離心14000×5 min兩次，取上清液5 μL進行LC/MS分析。

(三)血漿樣本處理 取他克莫司組血漿樣品50 μL，加入10 μL內(nèi)標環(huán)孢素A(1.25 μg/mL)，再加190 μL乙腈沉淀蛋白；取阿托伐他汀組血漿樣品50 μL加入10 μL內(nèi)標辛伐他汀(1.25 μg/mL)，再加190 μL乙腈沉淀蛋白，高速離心14000×5 min兩次，取上清液進樣10 μL。

(四)LC-MS檢測條件 ①他克莫司：色譜柱：CAPCELL PAK(2.1 mm×100 mm, 5 μm)，柱溫：40 ℃，流動相：甲醇：水(10 mM NH4Ac)=95∶5，流速：0.2 mL/min，SRM檢測：m/z 826.0→616.0(他克莫司)，m/z 1202.8→425.4(環(huán)孢素A)。②阿托伐他?。荷V柱：Zorbax SB-C18(2.1 mm×100 mm, 3.5 μm)；柱溫：25 ℃，流動相：乙腈(0.1%甲酸)∶水(0.1%甲酸)=70∶30，流速：0.2 mL/min，SRM檢測：m/z 559.4→440.2(阿托伐他汀)，m/z 419.9→199.4(辛伐他汀)。

三、統(tǒng)計學處理

結(jié) 果

一、大鼠血漿標準曲線

如表1所示，血漿中各藥物的響應(yīng)值和濃度線性關(guān)系良好，未見明顯雜質(zhì)干擾。

表1 大鼠血漿他克莫司(Tac)和阿托伐他汀(Ato)標準曲線

二、雙環(huán)醇多次給藥大鼠口服他克莫司后的血藥濃度經(jīng)時間變化

大鼠多次口服雙環(huán)醇(200 mg·kg-1·d-1，7 d)后口服他克莫司(2 mg/kg)，空白對照組和雙環(huán)醇給藥組相比，兩者的血漿Cmax分別為97.72±91.32 ng/mL和60.82±26.95 ng/mL，AUC(0-∞)分別為190.32±128.8 h·ng/mL和148.4±64.93 h·ng/mL。雖然雙環(huán)醇給藥后的 Cmax降低37.8%，AUC(0-∞)降低22.0%，但與空白對照組相比差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。兩組動物的血藥濃度-時間曲線比較見圖1，藥代動力學參數(shù)見表2。

圖1 空白對照組和雙環(huán)醇給藥組大鼠口服他克莫司(2 mg/kg)后的血漿藥時曲線(n=5例)

參數(shù)Tac-對照組Tac-雙環(huán)醇組t1/2(h)7.14±2.117.57±2.42Tmax(h)1±1.120.5±0.18Cmax(ng/mL)97.72±91.3260.82±26.95AUC(0-t)(h·ng/mL)182.73±127.41138±57.23AUC(0-∞)(h·ng/mL)190.32±128.8148.4±64.93Vz(L/kg)148.43±102.22165.64±77.12CLz(L/h-1·kg-1)13.36±5.6915.32±5.38MRT(0-t)(h)4.51±0.374.64±0.69MRT(0-∞)(h)6.04±1.316.73±2.12

二、雙環(huán)醇多次給藥大鼠口服阿托伐他汀后血藥經(jīng)時間變化

大鼠多次口服雙環(huán)醇(200 mg·kg-1·d-1，7 d)后口服阿托伐他汀(10 mg/kg)，空白對照組和雙環(huán)醇給藥組相比，兩者的Cmax分別為302±157.43 ng/mL和256±111.27 ng/mL，AUC(0-∞)分別為341.63±174.35 h·ng/mL和311.03±38.68 h·ng/mL。雖然雙環(huán)醇給藥后的 Cmax降低15.2%，AUC(0-∞)降低8.96%，但兩組差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。兩組動物的血藥濃度-時間曲線比較見圖2，藥代動力學參數(shù)見表3。

圖2 空白對照組和雙環(huán)醇給藥組大鼠口服阿托伐他汀(10 mg/kg)后的血漿藥時曲線(n=5例)

參數(shù)Ato-對照組Ato-雙環(huán)醇組t1/2(h)1.54±0.132.14±0.24Tmax(h)0.32±0.250.17±0Cmax(ng/mL)302±157.43256±111.27AUC(0-t)(h·ng/mL)340.42±173.52305.33±38.83AUC(0-∞)(h·ng/mL)341.63±174.35311.03±38.68Vz(l/kg)78.10±33.77100.90±20.04Clz(l/h/kg)35.47±15.5932.57±4.18MRT(0-t)(h)1.46±0.312.15±0.39MRT(0-∞)(h)1.5±0.312.39±0.49

討 論

他克莫司是一種強效免疫抑制劑，作用強度約為CsA的10～100倍，且安全性較CsA好，已逐漸成為器官移植術(shù)后首選的免疫抑制劑。阿托伐他汀是3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，通過競爭性抑制膽固醇合成限速酶HMG-CoA降低膽固醇和脂蛋白水平，是目前最常用的他汀類降脂藥。上述兩藥在長期臨床應(yīng)用中，可出現(xiàn)不同程度的肝損傷等不良反應(yīng)。因此在免疫治療和降脂過程常使用保肝藥進行保肝治療。

雙環(huán)醇作為治療肝臟炎癥的1.1類化學新藥，可通過抑制肝損傷后炎性調(diào)控因子的表達和活性，抑制氧自由基和一氧化氮的生成，提高體內(nèi)抗氧化物如谷胱甘肽的水平，減輕炎癥和氧化及硝化損傷，抑制肝細胞凋亡[4-5]，從而穩(wěn)定肝細胞膜、改善線粒體功能及保護肝細胞核DNA的結(jié)構(gòu)和功能[6]，達到抗炎保肝的作用。目前雙環(huán)醇也越來越多的用于藥源性肝損傷的聯(lián)合治療，如雙環(huán)醇片可預(yù)防60歲以上腫瘤患者的化療藥物性肝損傷[7]，在常規(guī)保肝基礎(chǔ)上加用雙環(huán)醇可明顯減輕抗結(jié)核藥所致DILI的發(fā)生率及肝損傷程度[8]等。

臨床聯(lián)合用藥時，由于藥物間的代謝性相互作用可能引起藥物的血藥濃度改變，從而影響療效和毒性。既往體外實驗結(jié)果顯示[9]，雙環(huán)醇體外對二甲雙胍、非諾貝特、環(huán)孢素A和他克莫司在大鼠和人肝微粒體中的代謝無明顯影響，一定程度地反映了雙環(huán)醇與上述合用藥物的相互作用情況。雙環(huán)醇主要經(jīng)大鼠和人肝微粒體CYP3A代謝， 對CYP3A僅有微弱的誘導作用，不誘導其自身代謝。已知藥物代謝過程中，當兩種或多種藥物經(jīng)同一代謝酶代謝時，藥物間則可能由于對藥酶的競爭而發(fā)生相互作用，致使血藥濃度發(fā)生改變。阿托伐他汀、他克莫司都是通過CYP3A4代謝[10]的臨床藥物，因此，本研究探討雙環(huán)醇對他克莫司、阿托伐他汀體內(nèi)血藥濃度的影響以及潛在的藥物相互作用具有顯著的臨床意義。

研究結(jié)果表明，雙環(huán)醇給藥組大鼠給予他克莫司(2 mg/kg)后，與空白對照組相比，他克莫司的Cmax降低37.8%，AUC(0-∞)降低22.0%，但兩組動物的Cmax和AUC(0-∞)差異均無明顯統(tǒng)計學意義；雙環(huán)醇連續(xù)給藥7天后給予阿托伐他汀(10 mg/kg)，與空白對照組相比，阿托伐他汀的Cmax降低15.2%，AUC(0-∞)降低8.96%，但兩組動物的Cmax和AUC(0-∞)差異均無統(tǒng)計學意義。上述結(jié)果提示，雙環(huán)醇多次給藥未明顯影響他克莫司和阿托伐他汀在大鼠體內(nèi)的血藥濃度，提示雙環(huán)醇與上述藥物合用時發(fā)生代謝性藥物相互作用的可能性較小。

綜上所述，大鼠多次口服雙環(huán)醇后對他克莫司和阿托伐他汀體內(nèi)血藥濃度無明顯影響，此結(jié)果可為臨床聯(lián)合用藥的有效性和安全性提供一定的參考依據(jù)。

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(本文編輯：易玲)

100050 北京 中國醫(yī)學科學院藥物研究所，創(chuàng)新藥物非臨床藥物代謝及藥代/藥效研究北京市重點實驗室

扈金萍，Email：hujp@imm.ac.cn

2016-04-27)