HPLC法測定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量

摘要：目的 通過HPLC方法測定阿昔洛韋在阿昔洛韋眼用凝膠中的含量。方法 在色譜條件：ZorbaxExtendC18不銹鋼柱（250 mm×4 mm，5 μm）為色譜柱，流動相：水-甲醇-冰醋酸（90∶10∶0.1），檢測波長：252 nm，進樣量10 μ，1.0 mL/min流速，柱溫為室溫（25℃）條件下進行檢測。結果 阿昔洛韋在0.12～1.44 ug/mL范圍內線性關系良好，線性方程為：Y=633417X-52341（r=0.9996），平均回收率為100.67%，RSD為1.32%。結論 采用高效液相色譜方法，可有效評估阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋的含量，本法結果準確、方法簡單、靈敏度高。

關鍵詞：HPLC法；阿昔洛韋；眼用凝膠；含量

單純皰疹病毒性角膜炎又稱單皰角膜炎，是由單純皰疹病毒誘發的角膜感染引起的一類眼科疾病，是目前世界上危害最為嚴重的眼科疾病之一[1]，阿昔洛韋（aciclovior）因其選擇性高、副作用小、藥物耐受好且為高特異性抗單純皰疹病毒藥物，成為目前單皰角膜炎最佳治療藥物。早期眼部用藥治療多采用眼膏或滴眼劑，因使用方便、患者接受性好等特點，被廣泛應用，但近期研究發現，由于滴眼劑在眼內停留時間較多，且容易被體內吸收，藥物生物利用率低，重復多次應用又可能引發較多副作用[2]。凝膠型眼用制劑的出現，有效解決了上述問題。阿昔洛韋凝膠劑可有效解決單皰角膜炎治療需反復用藥、生物利用率低等問題。如何快速測定此類眼用凝膠中主成分含量，有效監測此類藥物質量，成為眾多藥學所關注的問題。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥 島津LC-20A型高效液相色譜儀；離心機（北京醫用離心機廠）；甲醇、冰醋酸均由國藥集團化學試劑有限公司提供，均為色譜醇；阿昔洛韋對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：150913-151102）；阿昔洛韋凝膠（江蘇圣寶羅藥業有限公司，國藥準字H19991377，批號為：140911、150212、150622）。

1.2方法

1.2.1方法學驗證

1.2.1.1色譜條件 色譜柱：ZorbaxExtendC18不銹鋼柱（250 mm×4 mm，5 μm），流動相：水-甲醇-冰醋酸（90∶10∶0.1），檢測波長：252nm，進樣量10 μl，1.0 mL/min流速，柱溫為室溫（25℃）。

1.2.1.2溶液的制備

1.2.1.2.1供試品溶液的制備 精密稱取0.3 g阿昔洛韋凝膠，加入流動相25 ml稀釋，充分混勻后，于3000 r/min，離心5 min，取上清液，0.2 um微孔濾膜過濾，取續濾液做供試液。

1.2.1.2.2對照溶液的制備 精密量取阿昔洛韋對照品15 mg，置于100 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。

1.2.1.3系統適用性試驗

1.2.1.3.1空白對照結果 試驗中的空白溶劑選擇為流動相，取流動相適量，除不加樣品外其余操作同“1.2.1.2.1”制備空白對照，取10 ul進液相252 nm掃描，未見任何雜質峰，對測定不會造成影響，可考慮作為空白溶劑。

1.2.1.3.2精密度試驗 精密量取20 μL對照品溶液，重復進樣6次，分別測定峰面積，并計算其相對標準偏差RSD=1.2%（<2.0%），符合標準規定，結果表明本實驗精密度良好。

1.2.1.3.3重復性試驗 精密稱取同批號阿昔洛韋凝膠6份，根據供試品“1.2.1.2.1”項操作制備溶液，取10 μL溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖，可得到6份供試品溶液的相對標準偏差RSD=0.9%（<2.0%），符合標準規定，因此具有良好的重復性。

1.2.1.3.4穩定性試驗 取供試品溶液與對照品溶液，分別在0 h、4 h、8 h、12 h、24 h、48 h精密量取10 μL注入液相色譜儀，進樣測定，對照品溶液峰面積的RSD為1.16%（<2.0%），符合標準規定；供試品溶液峰面積RSD為1.23%（<2.0%），符合標準規定，提示對照品及供試品溶液在48 h內穩定。

1.2.1.3.5回收率考察 分別精密稱取約10 mg同一批次的阿昔洛韋凝膠，保存至3個錐形瓶內，依次加阿昔洛韋對照品2.23 mg、5.17和10.31 mg，根據制作“1.2.1.2.1”項步驟，取續濾液10 ul進針，對峰面積進行測定，分別計算回收率為101.23%、101.18%和99.79%，平均回收率為100.67%，RSD為1.32%，與藥典標準相符。

1.2.1.4線性關系考察 精密稱取阿昔洛韋對照品13.4 mg置于100 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密量取0.05 ml、0.10 ml、0.20 ml、0.40 ml、0.80 ml、1 ml、2 ml、5 ml、6 ml置于10 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得系列標準溶液，分別取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，并以峰面積對其濃度進行線性回歸，得線性方程為：Y=633417X-52341，（r=0.9996），結果表明，阿昔洛韋濃度在0.12～1.44 ug/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

1.2.2樣品中阿昔洛韋含量測定 在同一色譜條件下分別測定阿昔洛韋對照品溶液與3批阿昔洛韋凝膠供試品溶液（取供試品0.2 g），采用峰面積歸一化法和自身對照法（不加校正因子），對供試品內含有的阿昔洛韋含量進行測定。

2 結果

結果顯示，通過上述色譜條件測定阿昔洛韋凝膠中阿昔洛韋含量，與標識量比較結果顯示，三個批次的樣本含量分別為101.23%、100.49%、100.37%，RSD<2%，見表1。

3 討論

阿昔洛韋（C8H11N5O3）屬嘌呤類抗病毒藥物[3]，本文首先通過對其進行全波段掃描，確定252 nm作為其檢測波長，因此時吸收最大；前期試驗及文獻調查顯示，凝膠中存在大分子物質，可能導致色譜柱堵塞，進而影響測定，經試驗分析在酸性流動相處理后，對應高聚物配合離心可有效去除，故考慮先對樣品稀釋后離心，排除干擾；在色譜條件選擇上，本文參考了早期[4]的文獻報道，結合本實驗室條件優選所得。

經方法學考察可知，本次實驗所選方法準確性高、精密度好、重現性和相關性均符合相關要求，且比較自身對照法和面積歸一化法，發現兩組結果基本一致，提示二者均可用于其含量計算。

參考文獻：

[1]胡漢昆，吳東方，劉薇芝.高效液相色譜法測定阿昔洛韋眼凝膠中阿昔洛韋的含量[J].HeraldofMedicine，2010，29（12）：1644-1645.

[2]謝愛麗，王維.HPLC法測定阿昔洛韋乳膏（Ⅱ）中阿昔洛韋的含量[J].海峽藥學，2013，25（4）：41-42.

[3]王書玉，王磊，竇佳，等.離心分配色譜法測定阿昔洛韋乳膏中主成分的含量[J].中國藥房，2015（18）：2567-2569.

[4]劉海宏，李振武，李宏斌，等.高效液相色譜法測定阿昔洛韋眼用凝膠中阿昔洛韋含量[J].中國藥業，2011，20（9）：22-23.

編輯/肖慧