結核分枝桿菌金胺O熒光和萋—尼染色顯微鏡鏡檢結果比較

萋一尼染色法和金胺O熒光染色法[1]是痰涂片鏡檢常用的二種染色方法。萋一尼染色法結果較為準確且因為其操作簡單、費用低、速度快，1 h可以報告結果而一直延用至今，但陽性檢出率較低，無法滿足臨床需求。金胺O熒光染色法需要熒光顯微鏡，但傳統的熒光顯微鏡的檢測成本過高，一直沒有普及，發光二極管熒光顯微鏡很好解決了這一問題，近幾年逐漸廣泛應用于結核分枝桿菌的痰涂片鏡檢。為了解二種檢驗方法對痰標本結核分枝桿菌的檢出情況，我們對就診的可疑肺結核患者的痰標本進行了二種方法的對比分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1試劑和器材 金胺O熒光染色液和萋-尼染色液均按《結核病診斷實驗室檢驗規程》[1]進行配制；使用德國蔡司CX-21發光二極管全冷光源熒光顯微鏡及奧林巴斯CH30生物顯微鏡。

1.2檢測標本 痰標本來自2014年1月～2015年12月丹陽市人民醫院結核病門診就診的可疑肺結核患者，全部為初診患者。本實驗共收集432例患者的痰標本1296份。每位患者收集3份深咯痰標本，分別為清晨痰、夜間痰和即時痰。標本量為3～5 ml，每份痰標本涂抹2張玻片，分別進行萋-尼染色和金胺O熒光染色。

1.3涂片 用竹簽挑取痰標本的膿樣、血樣或干酪樣部分約0.05～0.1 ml于玻片正面的右側2/3中央處，均勻涂抹成寬1.0 cm，長2.0 cm的橢圓形痰膜，厚薄適中，室溫下自然干燥。按照《結核病診斷實驗室檢驗規程》[1]進行初染、脫色、復染。

1.4鏡檢及結果判定 萋-尼染色用普通光學顯微鏡鏡檢，10倍目鏡、100倍油鏡觀察。在淡藍色背景下，結核分枝桿菌呈紅色，其他細菌和細胞呈藍色。金胺O熒光染色用發光二極管顯微鏡，10倍目鏡、40倍物鏡觀察痰涂片，在暗視野背景下，結核分枝桿菌呈現橘黃色熒光，呈桿狀或短棒狀。萋-尼染色鏡檢結果報告標準為：抗酸桿菌陰性：連續觀察300個不同視野，未發現抗酸桿菌；報告抗酸桿菌菌數：1～8條/300視野；抗酸桿菌陽性（1+）：3～9條/100視野；抗酸桿菌陽性（2+）：1～9條/10視野；抗酸桿菌陽性（3+）：1～9條/視野；抗酸桿菌陽性（4+）：≥10條/每視野。金胺O熒光染色鏡檢結果報告標準為：金胺O熒光染色抗酸桿菌陰性：0條/50視野；金胺O熒光染色報告抗酸桿菌菌數：1～9條/50視野；金胺O熒光染色抗酸桿菌陽性（1+）：10～99條/50視野；熒光染色抗酸桿菌陽性（2+）：1～9條/視野；金胺O熒光染色抗酸桿菌陽性（3+）：10～99條/視野；金胺O熒光染色抗酸桿菌陽性（4+）：≥100條/每視野。

1.5統計學方法 采用STATA 10.0統計軟件對數據進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

金胺O熒光染色組432例可疑結核病患者的痰標本中檢出138例陽性，陽性率為31.9%；萋-尼組檢出80例陽性，陽性率為18.5%；χ2=7.21，P<0.01，差異有統計學意義，見表1。在檢測1+或以下菌量的標本時，金胺O熒光染色鏡檢組陽性率為14.3%，萋-尼染色組陽性率為5.9%；χ2=23.5，P<0.01，差異有統計學意義，2+及以上菌量時，金胺O熒光染色鏡檢組陽性率為13.5%，萋-尼染色組陽性率為12.8%；χ2=0.42，P>0.05，差異無統計學意義，見表2。

3 討論

金胺O熒光染色方法染色鏡檢時抗酸桿菌在暗視野背景下發出橘黃色熒光，黑色背景與抗酸桿菌對比鮮明，非常明顯容易發現，金胺O熒光染色染色讀片放大倍數為400倍（40倍物鏡，10倍目鏡），所觀察的視野面積大，故它的靈敏度比萋-尼染色方法普通顯微鏡鏡檢高[2]。本研究結果顯示，金胺O熒光染色組檢出陽性率為31.9%，萋-尼組為18.5%，χ2=7.21，P<0.01，兩者的陽性檢出率差異有統計學意義，結果與陳燕梅等[2-5]報道相符；兩組陽性檢出率差異主要體現在結果為1+及以下的標本，即含菌量少的痰標本上，金胺O熒光染色組為14.3%，萋-尼組5.9%，χ2=23.5，P<0.01，差異有統計學意義。而2+及以上菌量時的陽性率χ2=0.42，P>0.05，差異無統計學意義，結果也與陳燕梅等[2-5]報道相符。表明痰標本含菌量較少時直接涂片金胺O熒光染色法鏡檢較萋-尼法具有更高的靈敏度，這樣可防止漏診的出現，對于那些病變活動性輕、排菌量較少的肺結核診斷具有重要意義，及時準確發現這部分具有傳染性的肺結核患者對于我國的結核病預防控制、流行病學調查、治療等有重大意義[3]。

參考文獻：

[1]中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程[M].北京：中國教育文化出版社，2006：13-29.

[2]尚美.劉冠，趙立平，等.發光二極管熒光顯微鏡實驗室診斷效果評價[J].中國防癆雜志，2010，32（5）：275-278.

[3]陳燕梅，錢明，江勇，等.熒光染色發光二極管顯微鏡檢測結核分枝桿菌的效果分析[J].中國防癆雜志，2011，33（9）：585-587.

[4]申長海.熒光染色在結核病細菌學檢驗中的應用[J].河南預防醫學雜志，2002，13（1）：7-8.

[5]戴學海，金法祥，湯佳良，等.金胺O熒光染色法在結核病細菌學檢驗中的應用[J].中國衛生檢驗雜志，2008，18（5）：851-923.

編輯/翟辰萬