AEG-1基因在NSCLC中的表達及其臨床病理意義

高建華 曹 華 李 萱 虞春華 宋曉東

(江西醫學高等專科學校，上饒334000)

AEG-1基因在NSCLC中的表達及其臨床病理意義

高建華 曹 華 李 萱 虞春華 宋曉東

(江西醫學高等?？茖W校，上饒334000)

目的：探討非小細胞肺癌(NSCLC)組織中星型膠質細胞上調基因1(AEG-1)的表達及其臨床意義。方法：選取本院心胸外科手術切除治療的83例NSCLC患者的術后癌組織標本及20例癌旁組織標本進行研究，采用免疫組化染色法檢測兩組AEG-1蛋白的表達水平，并分析AEG-1蛋白與NSCLC患者的臨床病理學關系。結果：AEG-1 NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達46例(55.42%)顯著高于癌旁組織的2例(10.00%)(P<0.05)；NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達與患者的T分期、N分期及發生遠處轉移具有顯著的相關性(P<0.05)，與患者年齡、性別、分化程度關系不顯著(P>0.05)。 AEG-1高表達NSCLC患者的中位生存時間15.0個月顯著低于AEG-1低表達患者的19.0個月(log-rankχ2=4.119，P<0.05)。結論：NSCLC組織中AEG-1基因表達上調，并且與患者的臨床分期及遠處轉移有關。

非小細胞肺癌；星型膠質細胞上調基因1；基因表達；免疫組化

非小細胞肺癌(Non-small-cell lung cancer，NSCLC)發病率約占整體肺癌的80%[1]，已成為最主要的肺癌病理分型，且約60%的NSCLC患者被確診時，已處于Ⅲ或Ⅳ期[2]，故其患者預后差、死亡率高。臨床中，治療NSCLC的方式以手術聯合放化療及分子靶向療法為主，但患者五年生存率仍≤20%[3]，因此，尋找更高效的新型NSCLC治療方式仍十分必要。目前，研究者致力于探查NSCLC發病的分子機制，并發現新的分子靶點，從而為治療NSCLC創造新方向。文獻稱，星形膠質細胞上調基因1(AEG-1)顯著高表達于多類組織及臟器腫瘤內[4]，其表達水平和腫瘤生長、侵潤和轉移具有相關性，但關于AEG-1在NSCLC發展過程中的具體作用，仍未探查清楚。本文通過檢測NSCLC腫瘤組織內AEG-1表達水平，旨在探討其在NSCLC發病過程中的作用及其表達水平對NSCLC治療的指導作用，現將研究結果總結如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取本院心胸外科手術切除治療的83例NSCLC患者的術后癌組織標本及20例癌旁組標本進行研究。NSCLC患者83例，男54例、女29例，年齡41～78歲，平均(64.9±10.3)歲，分化程度：高分化21例、中分化23例、低分化39例，遠處轉移29例，吸煙36例，病理類型：鱗癌37例、腺癌43例、其他類型3例。癌旁組織20例，男13例、女7例，年齡43～72歲，平均(62.8±9.7)歲，吸煙9例。兩組患者的年齡、性別及吸煙率差異無統計學意義(P>0.05)。納入標準：(1)NSCLC標本來源于本院心胸外科手術后標本并經過病理學證實；(2)NSCLC患者術前未接受放療或者化療[5]；(3)患者的各項臨床資料完整。排除標準：(1)術前接受放化療治療的患者；(2)資料不完整的患者。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色法 取肺癌組織及癌旁組織切片甲醛固定、脫水、石蠟包埋及連續切片，片厚4 μm，切片65℃下烤2 h ，脫蠟后蒸餾水洗 2次。置于3%H2O2室溫下孵育20 min，蒸餾水洗5 min，PBS 內泡5 min。將切片浸于枸櫞酸鹽緩沖液內，不銹鋼壓力鍋修復抗原2～3 min ，PBS洗3次，5 min/次。滴入1∶400稀疏AEG-1兔抗人多克隆抗體(上海信裕生物科技有限公司)一抗，4℃下孵育過夜；次日PBS洗3次，5 min/次；滴HRP標記二抗50 μl，室溫孵育1 h；PBS洗3次，5 min /次，DAB顯色，DAB顯色試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司，待5 min后蒸餾水洗滌中止顯色，蘇木素復染、1%酒精鹽酸分化，自來水洗滌返藍，蒸餾水再洗滌，分別行脫水、透明后封片，置于顯微鏡觀察切片染色情況。

1.2.2 免疫組化結果判斷 免疫組化結果判定AEG-1蛋白的陽性著色表達于細胞質，呈黃色、棕黃色、褐色顆粒表達。(1)根據著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；(2)根據陽性細胞比例：陽性細胞數目所占比例<10%為1分、陽性細胞所占比例11%～50%為2分、陽性細胞數51%～75%為3分、陽性細胞數所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≥3分為陽性。(-)為總分<3分，陰性表達；(+)為3～5分，弱陽性表達；(++)為6～9分，中陽性表達；(+++)為>9分，強陽性表達。(++)及(+++)為高表達，(-)及(+)為低表達。

2 結果

2.1 AEG-1基因在NSCLC組織中的表達情況 AEG-1 NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達46例(55.42%)顯著高于癌旁組織的2例(10.00%)(P<0.05)，見表1。免疫組化染色可見NSCLC組織中棕黃色著色強度顯著高于癌旁組織，細胞質中大量黃色、棕黃色顆粒(圖1)。

2.2 AEG-1蛋白在NSCLC組織中的表達與患者臨床病理特征的關系 NSCLC組織中的AEG-1 蛋白高表達與患者的T分期、N分期及發送遠處轉移具有顯著的相關性(P<0.05)，與患者年齡、性別、分化程度關系不顯著(P>0.05)，見表2。

2.3 AEG-1蛋白表達與NSCLC患者預后的關系 AEG-1高表達NSCLC患者的中位生存時間15.0個月顯著低于AEG-1低表達患者的19.0個月(log-rankχ2=4.119，P<0.05)，見圖2。

表1 AEG-1蛋白在NSCLC組織中的表達情況

Tab.1 In NSCLC protein expression of AEG-1

Groupsn-++++++Highlyexpressed(%)NSCLCtissue831126252146(5542)Paracancer20153202(1000)χ213362P<0001

圖1 免疫組化染色結果(SP×400)Fig.1 Immunohistochemical staining(SP×400)Note:A.NSCLC tissue；B.Adjacent tissues.

表2 AEG-1蛋白在NSCLC組織中的表達與患者臨床病理特征的關系[n(%)]

Tab.2 Relationship between AEG-1 protein expression in NSCLC tissues and clinical pathological characteristics[n(%)]

Clinicopath?ologicalfactorsHighlyexpre?ssed(n=46)Lowexpre?ssed(n=37)χ2PAge(years)02210638<6020(4348)18(4865)≥6026(5652)19(5135)Sex09210337Male32(6957)22(5946)Female14(3043)15(4054)Tstage74320006T1-T216(3478)24(6216)T3-T430(6522)13(3514)Nstage97930002T1-T214(3043)23(6216)T3-T432(6957)14(3784)Differentiation22440134High+moderatelydifferentiated21(4565)23(6216)Lowdegreeofdifferentiation25(5435)14(3784)Distantmetastasis52090022Yes21(4565)8(2162)No25(5435)29(7839)Pathologicaltype02450885Squamouscellcarcinoma21(4565)16(4324)Adenocarcinoma23(5000)20(5405)Othertypes2(435)1(270)

圖2 生存函數圖Fig.2 Survival function

3 討論

NSCLC具有腫瘤惡性程度高、進展速度快和易向遠處組織器官轉移、侵潤等特點，因此，其治療難度較高，患者預后差、病死率高。NSCLC發病分子機制較復雜，但初步研究顯示，人體多種變異基因參與其發病過程，并造成腫瘤細胞無限制增殖及細胞凋亡異常，從而促使腫瘤發展、惡化[6]，因此，研究者認為通過探查NSCLC產生及發展的分子機制，以尋找關鍵靶向基因有效治療該惡性腫瘤。

AEG-1是廣泛表達于人體內的腫瘤促進基因之一，其最早在HIV-1感染者血細胞內被發現，隨著研究深入，其也被測定高表達于腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導的胚胎星形細胞內。AEG-1 基因是一個遺傳上高度保守的癌基因，位于人類染色體 8q22，全長包含3 611 bp，由12 個外顯子和 11 個內含子組成。人AEG-1的啟動子(-2710～+49)缺少啟動子共同的 TATA 或 CAAT 盒，但有多個Spl 基序和高含量的GC。AEG-1 啟動子有正調控區(459～302)和負調控區(-738～-460)。正調控區 356～302內有結合激活Ha-ras 轉錄因子的位點。該基因均高表達于乳腺癌、惡性膠質瘤及黑色素瘤等腫瘤細胞內[7]，并可和原癌基因H-ras結合，刺激非致癌永生化黑色素細胞向惡性腫瘤細胞轉變。有文獻稱，AEG-1還可和其上游基因Ha-Ras相互作用，并在其調控下進行RNA轉錄和復制，共同促進腫瘤生成及生長[8]。AEG-1基因常高表達于乳腺、肝臟、胃、食管等臟器癌癥及神經惡性腫瘤、膠質惡性腫瘤內，并明顯增強腫瘤細胞侵襲及轉移性，而人工干預方式刺激其表達降低后，可顯著抑制癌細胞侵襲性?；谝陨衔墨I，筆者認為AEG-1基因可能和NSCLC等肺癌腫瘤的產生、發展及轉移、侵襲具有相關性。

在本研究中，實驗結果顯示NSCLC組織中的AEG-1蛋白高表達水平顯著高于癌旁組織(P<0.05)，這表明AEG-1在NSCLC腫瘤內表達亦處于顯著高表達水平，可能在一定程度上影響其腫瘤細胞發展及侵襲。為進一步掌握AEG-1病理性特點，筆者選擇對NSCLC腫瘤組織及癌旁組織進行免疫化染色，結果顯示腫瘤組織內棕黃色著色強度顯著高于癌旁組織，而AEG-1免疫染色結果呈現黃色、棕黃色大顆粒，這進一步證明了AEG-1在NSCLC 組織具有明顯高表達特異性，因此筆者推斷該基因可作為判斷NSCLC發病的特異性分子標志指標。

在臨床中，選擇合適的檢測指標評估NSCLC腫瘤不同分化程度和臨床分期，對制訂針對性治療方案具有十分重要的指導意義，AEG-1表達水平會隨臨床分期及腫瘤分化程度發展而逐漸升高。筆者在本實驗中，通過對NSCLC病情進展程度和AEG-1表達進行相關性分析可得，NSCLC組織中的AEG-1蛋白高表達與癌癥T分期、N分期及發送遠處轉移具有顯著的相關性(P<0.05)，這與他人研究相一致[9]，證明AEG-1高表達不僅可以促進NSCLC產生，而其表達水平持續增高也可顯著刺激癌癥發展。本研究發現AEG-1表達水平和患者年齡、性別、腫瘤分化和轉移無關。這與前人報道的AEG-1與腫瘤轉移相關不盡相同[10]，這可能與肺癌組織樣本量偏小有關，另一個可能原因是轉移性肺癌多不選擇手術治療，導致研究對象中轉移性肺癌例數較少，未能發現統計學意義。

在本研究也發現部分NSCLC患者的AEG-1蛋白表達和腫瘤分化和轉移無相關性，這可能因為其NSCLC的發展受到多種基因分子影響，單AEG-1不能完全決定該類癌癥惡化、侵襲及轉移走向。但總體而言，高表達AEG-1在NSCLC產生過程中可能起著重要的促進作用，其參與腫瘤產生及發展，且表達水平可以評估腫瘤T分期、N分期及遠處轉移情況，因此，AEG-1能夠作為預防和治療NSCLC新的分子靶向標識之一，從而為研發基于該基因新型靶向藥物創造理論依據。

綜上所述， AEG-1基因表達在NSCLC組織顯著上調，其表達水平可影響甚至決定患者臨床分期及遠處轉移，但本文未針對AEG-1進行關于NSCLC治療的研究，因此，AEG-1與NSCLC治療及預后的相關性仍需進一步研究以完善。

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[收稿2016-02-19 修回2016-04-08]

(編輯 張曉舟)

Expression of AEG-1 gene in NSCLC and its clinical significance

GAO Jian-Hua,CAO Hua,LI Xuan,YU Chun-Hua,SONG Xiao-Dong.

Jiangxi Medical College,Shangrao 334000,China

Objective:To investigate the expression of AEG-1 gene in NSCLC and its clinical significance.Methods:Selected our hospital cardiothoracic surgical resection of 83 cases of postoperative cancer tissues of NSCLC patients and 20 paracancer to study，immunohistochemical staining was used to detect the expression level of AEG-1 protein in two groups，the clinical and pathological of AEG-1 protein in patients with NSCLC was analyzed.Results:NSCLC tissues AEG-1 protein expression 46 cases (55.42%) was significantly higher than 2 cases (10.00%) of paracancer (P<0.05).The high expression of AEG-1 protein in NSCLC tissue was significantly correlated with T stage,N stage and distant metastasis (P<0.05),the relationship of AEG-1 between the age,sex,and differentiation degree of the patients was not significant (P>0.05).AEG-1 high expression of NSCLC in patients with a median survival time of 15.0 months was significantly lower than that of 19.0 months (log-rankχ2=4.119P<0.05,) in patients with low expression of AEG-1.Conclusion:AEG-1 gene expression has been up-regulated in NSCLC tissue,which was related to the clinical stage and distant metastasis of the patients.

Non-small cell lung cancer;Star-shaped limb mesenchymal cells up-regulated gene 1；Gene expression;Immunohistochemical analysis

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.12.024

高建華(1978年-)，男，碩士，講師，主要從事生物遺傳學方面的研究。

R734.2

A

1000-484X(2016)12-1833-04