CAV1在人肺動脈成纖維細胞增殖調控中的作用

王昌國 曾大雄 雷偉 黃建安

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CAV1在人肺動脈成纖維細胞增殖調控中的作用

王昌國 曾大雄 雷偉 黃建安

目的 研究小窩蛋白1(CAV1)在缺氧相關肺動脈成纖維細胞(PAFs)增殖調控中的作用。方法 將體外培養的人PAFs分為：對照組(C：21%O2)；10%氧濃度組(10%O2)；5%氧濃度組(5%O2)及2%氧濃度組(2%O2)進行細胞增殖實驗，選取細胞增殖最明顯組為缺氧組(H)進行后續實驗。并構建CAV1高表達質粒(pCAV1)，然后再將PAFs分為對照組(C：21%O2)，缺氧組(H)，空白對照組(NC：缺氧+空質粒轉染組)和CAV1高表達組(pCAV1:缺氧+ pCAV1轉染組)，采用Western-blot法檢測各組細胞中CAV1、細胞周期蛋白D1(cyclinD1)和細胞凋亡抑制蛋白2(c-IAP2)含量，四甲基偶氮唑藍(MTT)及增殖細胞核抗原(PCNA)免疫組化法檢測細胞增殖情況。結果 缺氧能刺激PAFs增殖，并呈濃度依賴性，于2%氧濃度刺激48小時PAFs增殖達峰值，與對照組相比差異有統計學意義(1.20+0.02vs0.54+0.04,P<0.01);缺氧組PAFs中CAV1表達下調(1.23±0.04vs0.90±0.02,P<0.01),cyclinD1 (0.19±0.03vs1.15±0.06,P<0.01)和c-IAP2(0.63±0.04vs0.78±0.09,P<0.01) 表達上調,細胞增殖增加(MTT：0.78±0.04vs1.20±0.02,P<0.01；PCNA：0.29±0.03vs0.54±0.03，P<0.01);CAV1在PAFs中高表達后(0.55±0.03vs0.90±0.03,P<0.01)，cyclinD1 (0.88±0.02vs0.52±0.02,P<0.01)和c-IAP2 (0.87±0.02vs0.72±0.02,P<0.01) 表達下調，PAFs增殖減少(MTT：1.20±0.02vs1.00±0.06,P<0.01；PCNA：0.52±0.03vs0.38±0.03,P<0.01)。結論 缺氧能通過下調CAV-1在PAFs中的表達，促進PAFs的增殖、抑制其凋亡。cyclinD1和c-IAP2可能是CAV1調控PAFs增殖和凋亡的下游靶點。

缺氧；PAH；小窩蛋白1；肺動脈成纖維細胞

缺氧性肺動脈高壓(hypoxic pulmonary hypertension, HPH)是臨床常見疾病，可導致右心功能衰竭甚至死亡，目前尚缺乏有效治療手段。肺動脈重構是HPH的特征性改變，也是造成HPH不可逆的主要病理基礎。肺動脈重構過程中多種細胞組分參與其中，包括肺動脈內膜內皮細胞、中膜平滑肌細胞以及外膜成纖維細胞等均在細胞增殖、凋亡、分化、基質產生、細胞因子分泌等方面發生明顯變化。這些變化導致肺動脈內膜纖維性增厚、中膜增殖肥厚、外膜膠原沉積和纖維組織增多等多種解剖性改變[1-2]。但至今為止，HPH的相關研究主要集中在肺動脈內膜內皮細胞和中膜平滑肌細胞的功能變化方面，而對肺動脈外膜的相關研究甚少[3]?！?br>